人血清淀粉样蛋白A1原核表达及胶体金检测方法的建立

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的SAA1定量检测新方法。利用大肠杆菌BL21（DE3）原核表达人血清淀粉样蛋白A1（SAA1）,根据BL21（DE3）表达偏好性设计并合成SAA1蛋白基因片段,构建表达载体p ET-28a-SAA1,采用Ca Cl2法制备BL21（DE3）感受态,热激转化法将p ET-28a-SAA1转入到BL21（DE3）。经表达条件优化,获得重组蛋白最佳诱导表达条件：温度30℃,时间6h,转速180rpm/min,培养基p H 7.0,IPTG浓度0.4m M,诱导表达后目的蛋白经SDS-PAGE电泳鉴定,Ni柱纯化、透析、浓缩从而获得浓度为8.09mg/ml,纯度为85%的SAA1。同时,结合胶体金标记技术,建立了SAA1胶体金免疫层析试纸检测方法,线性范围0.16~500μg/ml,最低检测限0.16μg/ml,该研究为临床体外诊断SAA1快速检测提供技术基础。