KDR启动子驱动双自杀基因诱导胃癌细胞凋亡的体内实验研究

目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对胃癌细胞凋亡和增值的影响。方法建立小鼠SCG7901胃癌细胞膜型,随机分为4组。治疗结束后,称取瘤重并计算抑瘤率。用电镜和TUNEL法检测双自杀基因体系作用下SCG7901胃癌细胞的凋亡。结果实验组(B组)肿瘤体积逐渐缩小,而对照组(A、C和D组)肿瘤体积逐渐增大。透射电镜下可见实验组出现凋亡细胞,TUNEL法显示实验组肿瘤细胞凋亡率显著高于对照组,P<0.01。结论KDR启动子驱动双自杀基因体系对裸鼠皮下移植瘤有明显的生长抑制作用,其机制可能与双自杀基因体系诱导肿瘤细胞凋亡有关。

KDR启动子驱动双自杀基因靶向杀伤人胃癌细胞的作用

目的:探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901的靶向杀伤作用.方法:应用重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染实验组SCG7901细胞株和对照组HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞杀伤效应及其旁观者效应.结果:携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和未转染SCG7901的细胞在细胞生长方面无显著性差异(t=0.224,P=0.823).已转染腺病毒的HepG2细胞和未转染HepG2的细胞在细胞生长方面也无显著性差异(t=0.120,P=0.904).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性,SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性(F=109.43,P=0.000).融合基因的疗效优于单一自杀基因(F=162.22,P=0.000).将感染腺病毒细胞与未感染细胞以不同比例混和培养,观察到该体系明显的旁观者效应.结论:KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并存在旁观者效应.

重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK融合基因系统对胃癌细胞增值的影响

目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人胃癌细胞SCG7901增值的影响。方法重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和对照组不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞生长增值的影响。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞同未转染的各自细胞在细胞生长方面无显著性差异(P>0.05)。在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P<0.01)。融合基因的疗效优于单一自杀基因(P<0.01)。结论KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,抑制其增值。

Ad-KDR-CDglyTK双自杀基因系统对荷瘤鼠胃癌体内抑制实验

目的:探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对荷瘤鼠胃癌的体内抑瘤作用。方法:建立胃癌移植瘤动物模型,当肿瘤直径达0.5cm时,随机分为A组:空白对照,不施加任何处理;B组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC和GCV;C组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK;D组:仅注射前药5-FC和GCV。治疗过程中绘制肿瘤生长曲线,观察该治疗体系的体内抑瘤效应;通过RT-PCR检测肿瘤组织内融合基因的表达;采用免疫组化行微血管密度检查。结果:接种肿瘤细胞后13d,裸鼠出现右臀区皮下瘤结节。治疗结束后A、B、C、D组间瘤质量差异有统计学意义(F=12 727.42,P=0.000),B组明显缩小。重组腺病毒转基因荷瘤鼠胃癌组织内可检测到CDglyTK融合基因产物的表达。肿瘤组织的MVD值在A、B、C、D组之间差异有统计学意义,F=27.04,P=0.000。结论:KDR启动子驱动双自杀基因体系对裸鼠皮下移植瘤有明显的抑瘤作用,表现为肿瘤的生长抑制和瘤体微血管密度减少等。