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Recombinant adeno-associated virus delivered human thioredoxin-PR39 prevents hypoxia-induced apoptosis of ECV304 cells
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作者 Xiyun Ruan Zhenguo Yuan +2 位作者 Yifeng Du Guangxiao Yang Quanying Wang 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2012年第9期708-713,共6页
Human thioredoxin and antibacterial peptide, PR39, have been shown to have potent antioxidant effects that may prolong survival of cells during hypoxia. The pSSCMV/human thioredoxin-PR39 vector was successfully constr... Human thioredoxin and antibacterial peptide, PR39, have been shown to have potent antioxidant effects that may prolong survival of cells during hypoxia. The pSSCMV/human thioredoxin-PR39 vector was successfully constructed in this study and used to infect ECV304 cells. Transfected ECV304 cells were incubated at 1%, 5% hypoxic, and normal oxygen conditions. We found that the number of apoptotic cells after transfection with recombinant adeno-associated virus-human thioredoxin -PR39 was significantly lower than controls, suggesting a protective effect of the recombinant human thioredoxin-PR39 protein on hypoxic cells. 展开更多
关键词 human thioredoxin antimicrobial peptide PR39 fusion gene recombinant adeno-associated virus gene therapy apoptosis hypoxia
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环状RNA-SCAF8通过miR-93-5p/TXNIP通路促进血管内皮细胞焦亡
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作者 王冰 于欣雨 +4 位作者 陈天驰 邱宸阳 陆炜 郑祥韬 吴子衡 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期473-484,共12页
目的:探究环状RNA(circRNA)-SR相关CTD相关因子8(SCAF8)在高糖环境下对血管内皮细胞焦亡发挥的作用及机制。方法:将来源于人脐静脉内皮细胞分为正常对照组、高糖对照组分别置于5、33 mmol/L葡萄糖浓度的细胞培养基培养,RNA对照组、circR... 目的:探究环状RNA(circRNA)-SR相关CTD相关因子8(SCAF8)在高糖环境下对血管内皮细胞焦亡发挥的作用及机制。方法:将来源于人脐静脉内皮细胞分为正常对照组、高糖对照组分别置于5、33 mmol/L葡萄糖浓度的细胞培养基培养,RNA对照组、circRNA-SCAF8抑制组、微RNA(miR)-93-5p过表达组和miR-93-5p抑制组分别在高糖环境下加入无功能siRNA、circRNA-SCAF8抑制分子、miR-93-5p过表达分子和miR-93-5p抑制剂。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、流式细胞术和Hoechst 33342/碘化丙啶双荧光染色法检测细胞存活率和焦亡率,采用蛋白质印迹法和酶联免疫吸附法检测凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、Gasdermin D蛋白(GSDMD)、NOD样受体家族蛋白3(NLRP-3)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、IL-18和IL-1β等焦亡相关因子表达,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circRNA-SCAF8、miR-93-5p和TXNIP的基因表达,采用荧光原位杂交法定位circRNA-SCAF8和miR-93-5p,采用双荧光素酶实验验证miR-93-5p与上下游分子的靶向调控关系。结果:与RNA对照组比较,circRNASCAF8抑制组和miR-93-5p过表达组细胞存活率升高(均P<0.01),细胞焦亡率降低(均P<0.01),TXNIP、NLRP-3、caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18和IL-1β等焦亡相关因子的表达量显著减少(均P<0.05);抑制circRNA-SCAF8后miR-93-5p的表达量显著增加(P<0.01),过表达miR-93-5p后circRNA-SCAF8的表达有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。miR-93-5p通过与circRNA-SCAF8的3'UTR区结合下调circRNA-SCAF8表达,miR-93-5p通过与TXNIP的3'UTR区结合下调TXNIP表达。circRNA-SCAF8和miR-93-5p均位于细胞质中,在细胞中高度关联。qRT-PCR结果显示,过表达或抑制miR-93-5p后,TXNIP的相对表达量较RNA对照组分别增加或减少(均P<0.05),证明miR-93-5p可调控TXNIP基因表达。结论:circRNASCAF8/miR-93-5p/TXNIP通路可能参与调控高糖环境下血管内皮细胞焦亡。 展开更多
关键词 2型糖尿病 细胞焦亡 人脐静脉内皮细胞 硫氧还蛋白相互作用蛋白 环状RNA-SR相关CTD相关因子8 微RNA-93-5p
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人硫氧还蛋白对脑缺血作用的CT灌注与SOD相关性的实验研究 被引量:6
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作者 范义 滕妍 +2 位作者 张启周 胡卫东 娄明武 《北华大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第4期306-310,共5页
目的研究人硫氧还蛋白(hTRX)对局灶性兔脑缺血/再灌注损伤后脑组织的保护作用,并探讨其清除氧自由基的生物学活性.方法采用线栓法制成一侧兔脑缺血/再灌注模型(栓塞6 h,再灌注18 h),将25只雄性新西兰白兔随机分成假手术组(Sham组,5只)... 目的研究人硫氧还蛋白(hTRX)对局灶性兔脑缺血/再灌注损伤后脑组织的保护作用,并探讨其清除氧自由基的生物学活性.方法采用线栓法制成一侧兔脑缺血/再灌注模型(栓塞6 h,再灌注18 h),将25只雄性新西兰白兔随机分成假手术组(Sham组,5只)、缺血/再灌注组(I/R组,10只)和缺血/再灌注+hTRX治疗组(I/R+hTRX组,10只),I/R+hTRX组给予hTRX(0.75 mg/kg体质量),Sham组、I/R组以等容积的生理盐水取代hTRX;分别于梗死后6 h及再灌注后18 h做CT灌注图像,观察脑梗死面积,计算出其所占同侧大脑半球面积的百分比(HLA%);检测脑组织匀浆中SOD,MDA含量.结果脑缺血/再灌注后,脑梗死范围显著,脑组织匀浆中SOD明显下降,MDA明显升高(与假手术组比较,P<0.01);而应用hTRX能显著减小脑梗死面积,降低MDA及升高SOD含量(与B组比较,P<0.01).结论重组hTRX对脑缺血/再灌注损伤有显著的治疗作用. 展开更多
关键词 人硫氧还蛋白 氧自由基 CT灌注成像 脑缺A/再灌注
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人硫氧还蛋白在兔脑缺血再灌注损伤中的作用 被引量:2
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作者 娄明武 滕妍 +2 位作者 范义 胡卫东 杨广夫 《中国医学影像技术》 CSCD 2004年第11期1676-1679,共4页
目的 通过CT灌注及测量脑水肿程度 ,观察人硫氧还蛋白 (hTRX)对局灶性兔脑缺血 /再灌注损伤的保护作用。方法 采用线栓法制成一侧兔脑缺血 /再灌注模型 (栓塞 6h ,再灌注 18h) ,将 2 5只雄性新西兰白兔随机分成假手术组 ( 5只 )、缺... 目的 通过CT灌注及测量脑水肿程度 ,观察人硫氧还蛋白 (hTRX)对局灶性兔脑缺血 /再灌注损伤的保护作用。方法 采用线栓法制成一侧兔脑缺血 /再灌注模型 (栓塞 6h ,再灌注 18h) ,将 2 5只雄性新西兰白兔随机分成假手术组 ( 5只 )、缺血 /再灌注组 ( 10只 )和缺血 /再灌注 +hTRX组 ( 10只 ) ,后者给予hTRX( 0 .75mg/kg体重 ) ,其他组给予等容积的生理盐水。分别于梗死后 6h及再灌注后 18h做CT灌注图像 ,计算脑梗死面积占同侧同层大脑半球面积的百分比 ;测量脑组织含水量。结果 脑缺血 /再灌注后 ,应用hTRX治疗 ,脑梗死面积显著减少 ,脑水肿减轻。结论 重组hTRX对脑缺血 展开更多
关键词 人硫氧还蛋白 脑缺血/再灌注 灌注 脑水肿
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人硫氧还蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及对内毒素血症小鼠的保护作用 被引量:5
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作者 曹丽 黄大无 +4 位作者 范慧 狄春辉 王应 陈建民 马大龙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期733-736,共4页
为了对人硫氧还蛋白hTRX功能及其在休克治疗前景进行评价 ,将PCR扩增的hTRX基因连入pKPL 4载体 ,转化大肠杆菌pop2 136 .通过两步离子交换柱分离得到纯化的蛋白 ,进一步观察其稳定性及在体外对NFS 6 0和MCF 7细胞的促增殖活性 .结果发现... 为了对人硫氧还蛋白hTRX功能及其在休克治疗前景进行评价 ,将PCR扩增的hTRX基因连入pKPL 4载体 ,转化大肠杆菌pop2 136 .通过两步离子交换柱分离得到纯化的蛋白 ,进一步观察其稳定性及在体外对NFS 6 0和MCF 7细胞的促增殖活性 .结果发现 ,TRX蛋白可明显促进去细胞因子诱导的NFS 6 0细胞增殖和撤血清后MCF 7细胞的增殖 ,并发现外源性TRX可明显对小鼠内毒素血症起保护作用 . 展开更多
关键词 人硫氧还蛋白 大肠杆菌 高效表达 纯化 内毒素血症 小鼠 保护作用
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黄芪多糖对过氧化氢诱导的MRC-5细胞氧化损伤的保护作用 被引量:10
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作者 陈珏晓 王桂芬 +1 位作者 李丽 张鹏霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1062-1066,共5页
目的研究黄芪多糖(APS)在过氧化氢(H2O2)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞氧化损伤细胞模型中,对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(APE/Ref-1)和硫氧还蛋白(TRX)水平的影响,分析APS在氧化损伤过程中对MRC-5细胞的保护机制。方法将培养... 目的研究黄芪多糖(APS)在过氧化氢(H2O2)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞氧化损伤细胞模型中,对无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(APE/Ref-1)和硫氧还蛋白(TRX)水平的影响,分析APS在氧化损伤过程中对MRC-5细胞的保护机制。方法将培养的MRC-5细胞随机分组:空白对照组、不同浓度H2O2组、(200、400、800)mg/L APS处理组。通过H2O2作用于MRC-5细胞建立细胞氧化损伤模型,使用MTT法检测H2O2对MRC-5细胞的增殖抑制率,待H2O2作用的MRC-5细胞氧化损伤模型建立后,用最佳H2O2浓度与不同浓度的APS共同作用于MRC-5细胞,确定APS对氧化损伤MRC-5细胞的最佳作用浓度;采用免疫荧光检测8-羟脱氧鸟苷(8-OHd G)含量反映MRC-5细胞DNA氧化损伤情况;应用流式细胞术检测MRC-5细胞的凋亡;采用反转录PCR分析TRX和APE/Ref-1 mRNA的水平;Western blot法检测TRX和APE/Ref-1蛋白水平的变化。结果实验表明,H2O2孵育MRC-5细胞24 h,可诱导细胞损伤,使细胞存活力下降,且具有浓度依赖性。800μmol/L H2O2浓度时建立细胞氧化损伤模型。与H2O2引起氧化损伤的模型组相比,200 mg/L的APS明显抑制H2O2引起的APE/Ref-1、TRX蛋白表达下调,降低8-OHd G含量,抑制MRC-5细胞凋亡,细胞存活率明显升高。结论 H2O2引起MRC-5细胞氧化损伤,APS促进氧化损伤的MRC-5细胞APE/Ref-1和TRX的表达,APS减轻MRC-5细胞的氧化损伤并抑制其凋亡。 展开更多
关键词 黄芪多糖 人胚肺成纤维细胞 无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1 硫氧还蛋白
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人的睾丸组织硫氧还蛋白cDNA的克隆及序列测定 被引量:2
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作者 邹宁 周丽华 +3 位作者 周令望 樊红 滕宗艳 于维汉 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期554-556,共3页
目的 克隆人硫氧还蛋白 (humanthioredoxin ,hTRX)cDNA序列并进行序列测定。方法 ①应用RT PCR技术以成人睾丸组织RNA为模板 ,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA基因。②应用PCR技术以人的睾丸组织cDNA文库为模板 ,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA... 目的 克隆人硫氧还蛋白 (humanthioredoxin ,hTRX)cDNA序列并进行序列测定。方法 ①应用RT PCR技术以成人睾丸组织RNA为模板 ,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA基因。②应用PCR技术以人的睾丸组织cDNA文库为模板 ,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA基因。二者分别克隆至pGEM○R TEasy载体中进行基因序列测定。结果 将所得序列与EMBLDataLibraryX5453 9提供的序列比较 ,其可译框架相同。将所得序列与GenBank(J0 40 2 6)提供的序列比较 ,酶活性位点 (Trp Cys Pro Cys)与其相同 ,第 117、2 2 2位碱基与其不同 ,编码的氨基酸也发生了变化。结论 从睾丸组织或基因文库中克隆均获得编码hTRX成熟蛋白的cDNA基因 。 展开更多
关键词 睾丸组织 硫氧还蛋白 CDNA 克隆 序列测定 引物序列
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人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 徐江英 许琳 +3 位作者 戴荣 华超 卢是月 彭光勇 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期109-111,共3页
目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取... 目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99%;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36%,其分子质量为55 ku。TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF208018。结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白还原酶 序列分析 原核表达 大肠杆菌 克隆 CDNA
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葡萄糖对人骨髓间充质干细胞增殖的影响及调控机制 被引量:2
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作者 王琳芳 龚娟 +1 位作者 邓波 李裕明 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期562-566,共5页
目的观察不同浓度葡萄糖对人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)增殖的影响,并初步探讨其可能的基因调控机制。方法 hMSC-TERT细胞在不同浓度葡萄糖(5.6、11.0、25.0mmol/L)培养液中,分别培养14、28d后,用MTT法测定... 目的观察不同浓度葡萄糖对人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)增殖的影响,并初步探讨其可能的基因调控机制。方法 hMSC-TERT细胞在不同浓度葡萄糖(5.6、11.0、25.0mmol/L)培养液中,分别培养14、28d后,用MTT法测定各组hMSC-TERT细胞的增殖率,基因芯片检测hMSC-TERT细胞在高浓度葡萄糖(25.0mmol/L)与生理浓度葡萄糖(5.6mmol/L)作用下基因谱的差异性表达,并用RT-PCR扩增技术进一步证实不同浓度葡萄糖作用下的hMSC-TERT细胞硫氧还蛋白相关蛋白(TXNIP)mRNA表达的差异。结果细胞增殖测定结果显示随着葡萄糖浓度的增加以及培养时间的延长,hMSC-TERT细胞的增殖率下降。同时基因芯片测定筛选出表达差异的基因有87条,其中12条表达上调,75条表达下调。在表达上调的基因中,TXNIP基因表达增加最为显著。RT-PCR结果也进一步证实在相同培养时间下,与5.6mmol/L葡萄糖浓度组相比,11.0mmol/L和25.0mmol/L葡萄糖浓度组TXNIP mRNA表达均明显增加(均P<0.01);25.0mmol/L组较11.0mmol/L组TXNIP mRNA表达增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。在5.6mmol/L葡萄糖浓度组,培养28d时TXNIP mRNA水平较培养14d时明显增加(P<0.01);在11.0mmol/L和25.0mmol/L葡萄糖浓度组间,培养至14d与28d后,TXNIP mRNA水平的改变差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高糖环境中hMSC-TERT细胞的增殖能力下降,TXNIP mRNA的表达增加调节hMSC-TERT细胞增殖能力的改变。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 葡萄糖 细胞增殖 基因芯片 硫氧还蛋白相关蛋白
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TR基因重组腺病毒载体的构建和鉴定 被引量:1
10
作者 徐江英 许琳 +3 位作者 彭光勇 丁传林 卢是月 姚堃 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期440-442,共3页
目的 :构建含人硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因的重组腺病毒载体 ,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性。方法 :从重组质粒pGEM TR上用内切酶切下编码 5 0 0个氨基酸的全长TRcDNA片段 ,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle TR... 目的 :构建含人硫氧还蛋白还原酶 (TR)基因的重组腺病毒载体 ,探讨TR的抗氧化功能与神经退行性疾病的相关性。方法 :从重组质粒pGEM TR上用内切酶切下编码 5 0 0个氨基酸的全长TRcDNA片段 ,并连接穿梭质粒pShuttle,再双酶切pShuttle TR。将带有CMV启动子的目的片段 ,插入E1、E3缺失的Adeno X病毒DNA中 ,以Adeno TRDNA通过脂质体转染HEK2 93细胞 ,获得重组腺病毒Adeno TR进行PCR鉴定及病毒滴度测定。用重组腺病毒感染CV1细胞 ,通过免疫荧光染色与Westernblot分别检测重组腺病毒感染的细胞上和裂解液中TR蛋白的表达。结果 :重组腺病毒Adeno TR的病毒滴度为 4 .4× 10 11pfu/L。PCR、荧光显微镜证实 ,以及Westernbolt分析 ,在相对分子质量 (Mr)约 5 5 0 0 0处均出现特异性条带。结论 :成功地构建了重组腺病毒载体 ,并能介导外源基因TR表达 ,为进一步研究TR的功能及其与疾病的相关性奠定了基础。 展开更多
关键词 人硫氧还蛋白还原酶基因 腺病毒 基因表达载体
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人白细胞介素11cDNA的克隆、融合表达及活性测定 被引量:3
11
作者 张颖 刘灿辉 +1 位作者 刘玉乐 田波 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期353-356,共4页
取人胎肺做原代培养细胞 ,PMA诱导后 ,利用RT PCR技术 ,扩增出了去掉N端信号肽序列的IL 11cDNA ;经序列分析表明 ,该序列与文献报道序列高度同源 ,仅 3个核苷酸有变化 ,氨基酸序列完全一致。将此IL 11cDNA克隆入硫氧还蛋白基因融合表达... 取人胎肺做原代培养细胞 ,PMA诱导后 ,利用RT PCR技术 ,扩增出了去掉N端信号肽序列的IL 11cDNA ;经序列分析表明 ,该序列与文献报道序列高度同源 ,仅 3个核苷酸有变化 ,氨基酸序列完全一致。将此IL 11cDNA克隆入硫氧还蛋白基因融合表达载体 pTRXFUS的trxA基因 3′末端 ,利用其 3′端的蛋白肠激酶切点 ,构建符合读码框的融合基因。该融合蛋白在大肠杆菌中表达量达 2 0 %以上。用IL 6依赖细胞株 7TD1及MTT法测定生物学活性 ,达 2 5 6× 10 5u/mL菌液 ,对融合蛋白进行了Westernblot测定 ,并对表达条件作了初步研究。 展开更多
关键词 人白细胞介素11 活性测定 基因克隆 融合表达
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人硫氧还蛋白基因克隆及其重组逆转录病毒载体的构建和鉴定
12
作者 谢宇锋 盛伟华 +1 位作者 缪竞诚 杨吉成 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2007年第1期57-59,65,共4页
目的克隆人硫氧还蛋白(hTRX)基因,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体。方法利用RT-PCR法,以PHA活化的人外周血单个核细胞总RNA为模板,扩增hTRX编码蛋白的cDNA基因,并亚克隆至逆转录病毒载体pSIV-1中进行PCR、双酶切和测序鉴定... 目的克隆人硫氧还蛋白(hTRX)基因,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体。方法利用RT-PCR法,以PHA活化的人外周血单个核细胞总RNA为模板,扩增hTRX编码蛋白的cDNA基因,并亚克隆至逆转录病毒载体pSIV-1中进行PCR、双酶切和测序鉴定。结果将所得的序列与GenBank(BC003377)报道的序列比较,其酶活性中心(Trp-Cys-Gly-Pro-Cys)与已知序列一致,第132、136、170、264位碱基与已知序列不同,其中第136、170位相应密码子编码的氨基酸发生了变化(Phe→Leu,Ile→Thr),成功获得了pSIV-1-hTRX重组逆转录病毒载体。结论hTRX基因的克隆及其重组逆转录病毒载体pSIV-1-hTRX的构建,为进一步探讨hTRX的生物学活性和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人硫氧还蛋白 逆转录PCR 基因克隆 逆转录病毒
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人白细胞介素11融合蛋白切割位点的改变及成熟蛋白的纯化 被引量:5
13
作者 张颖 刘玉乐 田波 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第1期6-9,共4页
将 h IL- 1 1 c DNA克隆入硫氧还蛋白基因融合表达载体 p TRXFUS的 trx A基因 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 ,并在两基因间改变原有的肠激酶切割位点 ,引入蛋白质的羟胺切割位点序列 ,该融合蛋白在大肠杆菌中表达量达 2 0 %以上 ... 将 h IL- 1 1 c DNA克隆入硫氧还蛋白基因融合表达载体 p TRXFUS的 trx A基因 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 ,并在两基因间改变原有的肠激酶切割位点 ,引入蛋白质的羟胺切割位点序列 ,该融合蛋白在大肠杆菌中表达量达 2 0 %以上 .经羟胺切割 ,柱层析等纯化步骤后 ,得到纯度98%以上的成熟 h IL - 1 1 .用 IL- 6依赖细胞株 7TDI及 MTT法测定生物学活性 ,比活达 8× 1 0 6 IU/mg.并对纯品进行了 Western blot,N端 1 5个氨基酸测序及 h IL- 1 展开更多
关键词 hIL-11 融合蛋白 羟胺切割 肠激酶 定点突变
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一种人硫氧还蛋白基因修饰肝细胞的制备
14
作者 李华 汪根树 +4 位作者 张剑 姜楠 贾昌昌 杨扬 陈规划 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期572-576,共5页
【目的】制备出一种人硫氧还蛋白(hTrx)基因修饰的肝细胞。【方法】逆转录聚合酶链反应法扩增出hTrxcDNA,应用重组逆转录病毒制备hTrx基因修饰大鼠肝细胞。白蛋白免疫组化SABC法进行肝细胞活性鉴定,MTT比色试验进行抗氧化应激能力检测... 【目的】制备出一种人硫氧还蛋白(hTrx)基因修饰的肝细胞。【方法】逆转录聚合酶链反应法扩增出hTrxcDNA,应用重组逆转录病毒制备hTrx基因修饰大鼠肝细胞。白蛋白免疫组化SABC法进行肝细胞活性鉴定,MTT比色试验进行抗氧化应激能力检测。【结果】克隆出hTrx开放阅读框cDNA并制备出重组逆转录病毒,感染真核细胞后可分泌融合表达的hTrx并具有生物学活性。制备出hTrx基因修饰大鼠肝细胞,免疫组化SABC法显示肝细胞功能正常,MTT比色法检测具有较强的抗氧化应激能力(P<0.05),并可有效增殖。【结论】成功制备出一种具有较强抗氧化应激的hTrx基因修饰肝细胞。 展开更多
关键词 肝细胞 人硫氧还蛋白 基因修饰
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人白细胞硫氧还蛋白还原酶的分子克隆和序列分析
15
作者 孙路虹 许琳 +1 位作者 徐江英 张锡然 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期42-44,共3页
目的:克隆人白细胞硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)编码区的cDNA并进行序列分析。方法:采用RT-PCR方法获得TR基因cDNA,选择阳性克隆并测序。结果:通过分子克隆和序列分析,发现TR基因长1554bp,ORF为1494bp,编码 498个氨基酸... 目的:克隆人白细胞硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)编码区的cDNA并进行序列分析。方法:采用RT-PCR方法获得TR基因cDNA,选择阳性克隆并测序。结果:通过分子克隆和序列分析,发现TR基因长1554bp,ORF为1494bp,编码 498个氨基酸。结论:确定了中国人白细胞TR的 cDNA序列,并据此推导出相应的氨基酸序列。 展开更多
关键词 人白细胞 硫氧还蛋白还原酶 基因克隆 序列分析
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人硫氧还蛋白对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及机制
16
作者 倪世容 王万铁 +2 位作者 王鑫 郝卯林 戴雍月 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第27期22-24,共3页
目的探讨人硫氧还蛋白(hTrx)对肺缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及可能机制。方法将健康清洁级Wistar大鼠84只随机分为对照组12只、I/R组和Trx组各36只,后两组复制I/R肺损伤模型,Trx组于缺血前10 min和再灌注前10 min腹腔注射重组hTrx... 目的探讨人硫氧还蛋白(hTrx)对肺缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及可能机制。方法将健康清洁级Wistar大鼠84只随机分为对照组12只、I/R组和Trx组各36只,后两组复制I/R肺损伤模型,Trx组于缺血前10 min和再灌注前10 min腹腔注射重组hTrx注射液0.75 mg/kg。于再灌注1、3、5 h分别取三组肺组织检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量;原位缺口末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡指数(AI);原位杂交法检测Caspase-3 mRNA表达。结果 I/R组各时点MDA含量、细胞AI和Caspase-3 mRNA表达均显著高于对照组(P均<0.01),而SOD活性则随再灌注时间延长有所降低;Trx组MDA含量、AI、Caspase-3 mRNA表达均显著低于I/R组(P均<0.01)。AI与MDA、Caspase-3 mRNA呈显著正相关(r分别为0.844,0.775,P均<0.01);与SOD呈显著负相关(r为-0.820,P<0.01)。结论 Trx对I/R后肺组织细胞凋亡具有抑制作用;其机制可能与清除自由基、抑制脂质过氧化、下调Caspase-3 mRNA表达有关。 展开更多
关键词 再灌注损伤 细胞凋亡 CASPASE-3基因 活性氧 人硫氧还蛋白
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重组人硫氧还蛋白对大鼠内毒素肺损伤保护作用
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作者 陈红武 赵海燕 胡旭初 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期256-260,共5页
目的:探讨重组人硫氧还蛋白1(rh Trx-1)对新生SD大鼠急性内毒素肺损伤的保护作用.方法:制备、鉴定rh Trx-1;将新生SD大鼠分为对照组、脂多糖(LPS)实验组和LPS+rh Trx-1干预组.腹腔注射LPS(质量分数为5 mg/kg),制备急性内毒素肺损伤模型... 目的:探讨重组人硫氧还蛋白1(rh Trx-1)对新生SD大鼠急性内毒素肺损伤的保护作用.方法:制备、鉴定rh Trx-1;将新生SD大鼠分为对照组、脂多糖(LPS)实验组和LPS+rh Trx-1干预组.腹腔注射LPS(质量分数为5 mg/kg),制备急性内毒素肺损伤模型,干预组于LPS注射前30 min腹腔注射rh Trx-1(质量分数为10 mg/kg),观察注射后24 h各组新生SD大鼠的一般情况以及死亡率;重复实验,每组分别于实验后的2、8 h随机处死大鼠,提取肺组织用于病理切片观察.结果:(1)成功制备rh Trx-1;(2)LPS组大鼠表现出活动少,反应差,精神萎靡,毛发无光泽,口周发绀等全身炎症反应症状,濒死状态时表现为毛色青灰,呼吸浅表;LPS+h Trx-1干预组动物症状明显减轻;阴性对照组、LPS实验组和LPS+rh Trx-1干预组大鼠24 h死亡率分别为0%,67%、17%(2=14.400,P=0.001);(3)LPS组肺组织损伤严重,可见肺组织结构不完整,肺泡间隔明显增宽,肺泡腔内有红细胞、炎症细胞及浆液渗出,血管周围组织可见白细胞浸润,毛细血管有明显充血及扩张表现,随时间延长有加重趋势,LPS+rh Trx-1干预组病理改变较内毒素组明显减轻,肺泡结构尚正常,轻度肺水肿,肺泡间隔稍增宽,红细胞渗出明显减少,肺泡及肺间质中白细胞浸润减少.结论:重组人硫氧还蛋白1对急性内毒素肺损伤的新生大鼠具有保护作用. 展开更多
关键词 重组人硫氧还蛋白1 急性肺损伤 新生SD大鼠
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腹腔积液中人硫氧还蛋白过表达与小儿腹膜间皮细胞炎症的关系探讨
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作者 曾明涛 赵旸 +1 位作者 石来军 姚娟 《河北医药》 CAS 2019年第18期2766-2769,共4页
目的探讨腹腔积液中人硫氧还蛋白(human thioredoxin,hTRX)过表达与小儿腹膜间皮细胞炎症的关联。方法实验设计分4组:对照组(B-Z组),rhTRX高剂量组(G-Y组),rhTRX中剂量组(Z-Y组),rhTRXl低剂量组(L-Y组);采用MTT比色法检测小儿腹膜间皮... 目的探讨腹腔积液中人硫氧还蛋白(human thioredoxin,hTRX)过表达与小儿腹膜间皮细胞炎症的关联。方法实验设计分4组:对照组(B-Z组),rhTRX高剂量组(G-Y组),rhTRX中剂量组(Z-Y组),rhTRXl低剂量组(L-Y组);采用MTT比色法检测小儿腹膜间皮细胞的存活率;用试剂盒进行T淋巴细胞亚群的测定;测定4组小儿腹膜间皮细胞培养上清液中炎性因子IFN-γ的浓度;采用RT-PCR和酶联免疫吸附法测定各组中的干扰素-γ(IFN-γ)基因和蛋白的表达水平。结果与B-Z组相比,L-Y组、Z-Y组和G-Y组IFN-γ浓度下降( P <0.05),随rhTRX剂量的增加,小儿腹膜间皮细胞的存活率升高( P <0.05);RT-PCR和ELISA结果显示L-Y组中IFN-γ的表达水平无明显下降,Z-Y组和G-Y组细胞的IFN-γ表达水平与B-Z组相比有明显下降( P <0.05)。结论 腹腔积液中hTRX过表达对小儿腹膜间皮细胞炎症具有抑制作用。 展开更多
关键词 腹腔积液 人硫氧还蛋白 过表达 小儿腹膜间皮细胞炎症 酶联免疫吸附法
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高活性重组hG-CSF的制备
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作者 崔立斌 马清钧 《生物工程进展》 CSCD 1997年第3期24-27,共4页
我们构建了新的硫氧还蛋白(Thioredoxin)融合表达载体pETTrxL和pETTrx-HisL,它们可使功能蛋白在大肠杆菌胞质中以可溶性形式高效表达。利用此表达系统成功地获得的hG-CSF-硫氧还蛋白融合蛋白的... 我们构建了新的硫氧还蛋白(Thioredoxin)融合表达载体pETTrxL和pETTrx-HisL,它们可使功能蛋白在大肠杆菌胞质中以可溶性形式高效表达。利用此表达系统成功地获得的hG-CSF-硫氧还蛋白融合蛋白的高效可溶性表达,表达水平达总细胞可溶蛋白的41%以上。所表达的hG-CSF-硫氧还蛋白融合蛋白可通过Cu2+-IDASepharoseFF固相金属螯合层析柱,方便地从细胞破碎可溶上清中直接纯化。所获得的融合蛋白具有hG-CSF特异的生物活性,其比活性达到0.5-1.33×107u/mg融合蛋白。这样表达的hG-CSF融合蛋白能被IgA蛋白酶特异地切割。 展开更多
关键词 药物 粒细胞 集落刺激因子 制备 重组
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人硫氧还蛋白cDNA的克隆及序列测定 被引量:2
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作者 刘庆勇 刘效恭 +5 位作者 纪宗正 党建功 阮喜云 南勋义 王全颖 杨广笑 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期201-204,共4页
目的 克隆人硫氧还蛋白 (HumanThioredoxin ,hTRX)cDNA序列并进行序列测定。方法 应用RT PCR技术 ,以 1 43(TK- )人骨肉瘤细胞RNA为模板 ,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA基因 ,并克隆至 pGEM TEasy载体中进行基因序列测定。结果 将所得序... 目的 克隆人硫氧还蛋白 (HumanThioredoxin ,hTRX)cDNA序列并进行序列测定。方法 应用RT PCR技术 ,以 1 43(TK- )人骨肉瘤细胞RNA为模板 ,扩增出hTRX成熟蛋白的cDNA基因 ,并克隆至 pGEM TEasy载体中进行基因序列测定。结果 将所得序列与GenBanK(J0 4 0 2 6)提供的序列比较 ,其酶活性中心 (Trp Cys Gly Pro Cys)和基序与已知序列一致 ,第 1 80、2 84位碱基与已知序列不同 ,编码的氨基酸也发生了改变。结论 克隆得编码hTRX成熟蛋白的cDNA基因 ,为进一步探讨hTRX的生物活性和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人硫氧还原蛋白 基因克隆 RT-PCR DNA
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