巯甲丙脯酸联合重组人脑利钠肽治疗充血性心力衰竭的效果及对细胞间黏附分子-1和促甲状腺素水平的影响

目的研究巯甲丙脯酸联合重组人脑利钠肽对充血性心力衰竭患者细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、促甲状腺素(TSH)水平的影响。方法以本院2018年6月至2019年5月间收治的106例充血性心力衰竭患者作为对象,以随机数字表法作为依据对其进行分组,单独组53例与联合治疗组53例,各组患者分别进行治疗。两组分别以心功能分级进行亚组分析,将单独组分为单独Ⅱ级组、单独Ⅲ级组、单独Ⅳ级组,将联合治疗组分为联合Ⅱ级组、联合Ⅲ级组、联合Ⅳ级组。检测各组患者治疗前后心功能指标、去甲肾上腺素(NE)、内皮素-1(ET-1)、N末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)、白介素-6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)水平,统计对比各组患者的治疗有效率和不良反应发生率。结果治疗后联合组患者SV是(60.12±5.92)ml、LVEF水平是(56.83±5.17)%,高于单独组的(53.27±5.06)ml与(45.61±4.20)%,CO水平是(5.86±0.75)L/min,低于单独组的(9.81±0.96)L/min(P<0.05)。治疗后联合组患者的NE是(109.21±10.64)ng/L、ET-1是(230.71±18.37)ng/L,低于单独组的(145.13±13.67)ng/L与(313.10±20.81)ng/L(P<0.05)。治疗后联合组患者的IL-6是(10.33±1.16)ng/L、CRP是(5.25±0.41)mg/L、TNF-α是(9.53±0.42)ng/L,低于单独组的(15.64±1.87)ng/L、(7.43±0.73)mg/L与(12.37±1.32)ng/L(P<0.05)。治疗后联合组患者sICAM-1是(498.34±43.57)μg/L,低于单独组的(563.28±46.27)μg/L,T3是(7.01±0.83)μmol/L。高于单独组的(4.28±0.51)μg/L(P<0.05),TSH低于单独组(P>0.05)。相比单独组,联合组治疗总有效率较高(P<0.05)。联合组患者的不良反应发生率略高于单独组,但两组比较,无统计学意义(P>0.05)。亚组分析显示,联合Ⅲ级组的总有效率比单独Ⅲ级组的更高(P<0.05)。治疗后联合Ⅱ级组CO、LVEDD、LVESD、NE、ET-1、NT-proBNP、IL-6、CRP、TNF-α、sICAM-1水平比单独Ⅱ组更低,联合Ⅲ级组比单独Ⅲ级组更低,联合Ⅳ级组比单独Ⅳ级组更低(P<0.05);治疗后联合Ⅱ级组SV、LVEF、FS、T3水平比单独Ⅱ组更高,联合Ⅲ级组比单独Ⅲ级组更高,联合Ⅳ级组比单独Ⅳ级组更高(P<0.05)。同级亚组间治疗后的TSH水平、不良反应总发生率差异比较无统计学意义(P>0.05)。结论充血性心力衰竭患者使用巯甲丙脯酸联合重组人脑利钠肽治疗,可改善心功能和血清神经激素因子,降低炎症因子,调节sICAM-1、TSH水平,治疗效果显著,具有一定的临床使用价值。

促甲状腺激素受体与人乳头瘤病毒16 E6蛋白在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探究促甲状腺激素受体(TSHR)、人乳头瘤病毒(HPV)16 E6蛋白在宫颈癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选取2016年1月至2018年3月本院收治的124例宫颈癌患者作为研究对象,分别采集所有受试者的宫颈癌组织、癌旁组织及正常组织,采用免疫组织化学法检测不同宫颈组织的TSHR、HPV16 E6蛋白表达情况。比较不同宫颈组织中TSHR、HPV16 E6蛋白阳性率,分析TSHR、HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌患者临床病理特征及生存状况的关系。结果宫颈癌组织中TSHR、HPV16 E6蛋白阳性率(67.74%、66.13%)均高于癌旁组织(21.77%、22.58%)及正常组织(2.42%、3.23%),且癌旁组织高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、肿瘤直径≥3 cm及有淋巴结转移宫颈癌患者TSHR蛋白阳性率均高于中高分化、肿瘤直径<3 cm及无淋巴结转移宫颈癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、临床分期宫颈癌患者TSHR蛋白阳性率比较差异无统计学意义。年龄≥60岁、有淋巴结转移宫颈癌患者HPV16 E6蛋白阳性率均高于年龄<60岁、无淋巴结转移宫颈癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);不同临床分期、分化程度、肿瘤直径宫颈癌患者HPV16 E6蛋白阳性率比较差异无统计学意义。随访3年,124例宫颈癌患者中,死亡74例,存活50例;宫颈癌死亡患者TSHR蛋白阳性率高于存活患者,差异有统计学意义(P<0.05),而宫颈癌死亡患者与存活患者HPV16 E6蛋白阳性率比较差异无统计学意义。结论宫颈癌组织中TSHR、HPV16 E6蛋白均存在异常高表达,其中TSHR蛋白表达与宫颈癌患者分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移及预后有关,HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌患者年龄及淋巴结转移密切相关,而与预后无关。

重组人促甲状腺激素β亚基的切胶纯化及多克隆抗体制备

目的:切胶纯化重组人促甲状腺激素亚基(hTSHβ),免疫家兔制备多克隆抗体,为人TSH测定试剂盒的国产化奠定基础。方法:将含有重组人促甲状腺激素β亚基(hTSHβ)的大肠杆菌表达产物进行SDS-PAGE分离,切取相应分子量的蛋白条带,研磨回收后用于免疫新西兰大耳朵白兔,ELISA监测血清中抗hTSHβ抗体的效价,饱和硫酸铵沉淀及亲和层析自血清中纯化抗体。结果:切胶后获得了高纯度的重组GST-hTSHβ蛋白,所免疫家兔产生了针对hTSHβ的多克隆抗体,效价可达1:12000。结论:切胶纯化的重组hTSHβ蛋白可成功诱导兔产生高效价的抗hTSHβ多克隆抗体。

高灵敏度人促甲状腺激素(hTSH)酶联免疫分析试剂盒

以辣根过氧化物酶标记链亲合素 (SA) ,二株识别人促甲状腺激素 (hTSH)高度特异的单克隆抗体分别用于包被微孔和生物素化 ,以四甲基联苯胺 (TMB)为底物 ,建立了高灵敏度人促甲状腺激素生物素 亲合素酶联免疫分析 (sTSH BA ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为 0 0 2mIU/L ,批内变异系数 <7 8% ,批间变异系数 <9 6% ,回收率为 93 3 %～ 1 0 7 8% ,特异性鉴定显示与其它糖蛋白激素 (如FSH ,HCG ,LH)无明显的交叉反应性。正常参考值范围为 0 3～ 4 1mIU/L。本法所制备的试剂盒与中国原子能科学研究院同位素研究所的TSH IRMA试剂盒的相关方程为 y =1 .2xIRMA+0 1 4,相关系数r =0 969。本试剂盒较常规ELISA灵敏度高、简便、快速 。

人促甲状腺激素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以进口纯人促甲状腺激素（ｈ—ＴＳＨ）作免疫原，经用Ｇａｌｆｒｅ等杂交瘤制备法，分别制备成１３Ｂ４、１３Ｃ４、８Ｈ１０、３Ｅ４四株具有抗ｈ—ＴＳＨ特异性，与促黄体素、促卵泡素、绒毛膜促性腺素无明显交叉反应。具有稳定分泌功能的杂交细胞株。经亚型鉴定均为ＩｇＧ１。液相中与１２５Ｉ—ｈＴＳＨ的最大结合率依次为１３Ｂ４、３Ｅ４、８Ｈ１０和１３Ｃ４，分别为６１％、５９％、５６％和３４％。表位分析表明，４株单抗主要针对两个不同表位。在此基础上已成功地建立ｈ—ＴＳＨ固相免放和酶免吸附超敏测定法。

人促甲状腺素受体膜外区蛋白在原核系统表达及其生物活性鉴定

为研究重组人促甲状腺素受体 (hTSHR)膜外区表达产物及其生物活性与免疫活性 ,将hT SHR膜外区编码基因 (编码第 3～ 4 2 0位氨基酸 )重组到表达型质粒pGEX 4T 3上 ,测序结果表明序列正确 ,未改变读码框架 .然后转入E .coliAd4 94进行诱导表达 .纯化后的表达产物经SDS PAGE、Western印迹及放射受体法分别检测其分子量、免疫活性和生物活性 .重组TSHR3～ 4 2 0 膜外区蛋白 (简称TSHR3～ 4 2 0 )产率为 15 9～ 2 0 2 μg L培养基 ,分子量为 4 8.9kD ;融合蛋白 (简称GST TSHR3～ 4 2 0 )分子量为 75 .4kD .两种表达产物都可与TSHRAb反应 ;TSHR3～ 4 2 0 可与12 5I TSH结合 .

hTSHR膜外区氨基端基因原核表达载体的构建和鉴定

目的:为研究人促甲状腺素受体膜外区氨基端(hTSHR462bp)肽段的免疫学特性,将hTSHR462bpcDNA片段在原核表达系统中表达,故构建原核表达载体。方法:以人Graves病患者甲状腺组织中提取mRNA为模板,利用RT-PCR方法扩增双链甲状腺组织cDNA,又以PCR技术扩增目的基因,定向克隆法构建融合基因的原核表达载体pET102-hTSHR462bp。结果:获得了重组目的基因原核表达载体并经PCR鉴定、酶切鉴定插入片段方向、大小正确,DNA测序分析表明插入处接头和读框与预期序列相符。结论:成功构建了融合基因的原核表达载体pET102-hTSHR462bp,为进一步的蛋白表达、其生物学功能研究和未来临床应用奠定了基础。

脂质体包裹人促甲状腺激素受体胞外段基因真核表达质粒的构建

目的:构建阳离子脂质体包裹的人促甲状腺激素受体胞外段基因真核表达质粒。方法:PCR扩增穿梭质粒PHMCMVTSHR289目的基因并连接于真核表达质粒pcD NA3.1+上,重组质粒pcD NA3.1+/TSHR289采用酶切及测序法鉴定。阳离子脂质体包裹重组质粒pcD NA3.1+/TSHR289。结果:重组质粒pcD NA3.1+/TSHR289用Hind III酶切后产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测显示出现512bp条带。正向测序发现AAC突变为AAT,为同义突变。反向测序发现GCG突变为GCT,亦为同义突变。阳离子脂质体与重组质粒的体积质量比例为3∶1。结论:酶切及测序鉴定重组质粒pcD NA3.1+/TSHR289构建成功。

TSH对正常和甲亢甲状腺细胞cAMP生成的影响

以bTSH刺激体外培养的正常和甲亢甲状腺细胞,通过测定细胞生成环磷腺苷(cAMP)的量,探讨bTSH对两种甲状腺细胞功能的影响。结果显示:正常和甲亢甲状腺细胞释放cAMP的量均随细胞含量、bTSH浓度的增加或细胞培养时间或bTSH刺激时间的延长而增多。在相同实验条件下,两种细胞释放cAMP的值无显著性差异。提示甲亢甲状腺细胞与正常甲状腺细胞相似,对TSH具有良好的反应性。

儿童促甲状腺激素地区性参考区间建立与临床应用

目的：建立河北省儿童促甲状腺激素（TSH）及甲状腺素（T3、T4、FT3、FT4）参考区间,并应用于临床筛查儿童甲状腺疾病。方法：选择黄骅市、保定市、张家口市健康儿童,测定血清中TSH、T3、T4、FT3、FT4,建立参考区间。分别将新建立的参考区间与试剂盒提供的参考区间作为实验室诊断标准,分析诊断三个地区800例儿童的甲状腺疾病发病情况。结果：建立的河北省儿童促甲状腺激素及甲状腺激素参考区间是：TSH 0.50-6.88μIU/ml,T30.52~2.36 ng/ml,T445.28~127.42 ng/ml,FT32.30~10.29 pmol/L、FT47.99-24.88 pmol/L。800例儿童采用该参考区间作为诊断标准,共检出45例异常结果;采用试剂盒提供的参考区间作为诊断标准,共检出120例异常。结论：该参考区间为河北省儿童促甲状腺激素提供了基础性数据,有利于儿童亚临床甲状腺减退的监测工作。

重组腺病毒Ad-TSHR289注射诱导Graves病小鼠模型

目的观察过表达人促甲状腺激素受体(TSHR) A亚单位的重组腺病毒(Ad-TSHR289)注射诱导Graves病(GD)模型的效果。方法 36只BALB/c小鼠,分为模型组(GD组)、正常对照组(NC组),每组各18只。GD组分别于第1、4周注射含2×109Pfu优化Ad-TSHR289腺病毒的PBS溶液; NC组分别于同时注射等量PBS溶液。造模后第7、13、18周两组各随机选取6只小鼠,摘眼球取血,检测血清T4、TRAb,处死两组小鼠取甲状腺组织,肉眼观察形态后HE染色观察两组甲状腺病理变化。结果与NC组比较,第7、13、18周GD组眼球血清T4含量及TRAb水平均增加(P均<0. 05)。第7、13、18周GD组成模数分别为6、6、6。与第7周比较,第13周GD组眼球血清TRAb水平降低(P <0. 05)。第7、13、18周,GD组小鼠甲状腺不同程度肿大、充血。NC组甲状腺滤泡上皮细胞呈扁平状,滤泡腔光滑,腔内充满均匀胶质。GD组甲状腺滤泡上皮细胞肥大,细胞呈高柱状,排列紧密,增生的细胞向滤泡腔内形成乳头状凸起,滤泡腔不光滑,腔内胶质明显减少、内含物增加,甲状腺组织内红细胞浸润明显。且随造模时间推移,甲状腺滤泡上皮细胞增生程度逐渐加重,滤泡腔逐渐变小。结论 2×109Pfu的Ad-TSHR289两次注射BALB/c小鼠第7周时即可成功构建GD模型,成模率和维持时间均较好。

用重组hTSHR胞外段测定女性AITD患者TRAb的研究

目的应用重组人促甲状腺素受体胞外段(hTSHRecd)蛋白在自身免疫性甲状腺病(AITD)患者中用以间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测TSH受体抗体(TRAb),建立一种简便快捷、敏感性及特异性均高的新的TRAb测定方法。方法病例组:女性,Graves甲亢(GD)患者59例,其中初诊23例;原发性甲状腺功能减退患者63例。对照组:非AITD甲状腺病(甲状腺囊肿或腺瘤,甲状腺功能正常)43例;正常对照50例。将重组hTSHRecd蛋白稀释成10μg/mL,包被酶标板,利用间接ELISA法测定上述各组样本血清TRAb,以放射受体分析(RRA)检测法为对照。结果间接ELISA法测定TRAb,各组OD450值分别为:正常对照组0.27±0.12,非AITD对照组0.32±0.26,GD甲亢组0.96±0.78,甲减组0.48±0.39。GD甲亢及甲减组与两个对照组相比均有显著性差异(GD甲亢t_1=6.79,t_2=6.30;甲减t1=4.27,t_2=3.26,均P<0.01)。用ELISA法和RRA法在AITD患者组中检测TRAb的阳性率分别为:GD甲亢组76.27%、81.36%,经比较无显著性差异(x^2=0.57,P>0.05);初诊GD甲亢组86.96%、91.30%,经比较无显著性差异(x^2=0.00,P>0.05);甲减组34.92%、39.68%,经比较无显著性差异(x^2=0.57,P>0.05)。用两种方法测得的TRAb活性值有相关性(r=0.577925,P<0.05)。结论 重组hTSHRecd蛋白与AITD患者血清有良好的反应性。间接ELISA法检测高效、简便、费用低,无同位素污染,在作为临床常规检验中优于RRA。

131I-rhTSH在荷人分化型甲状腺癌裸鼠模型的体内分布和放射免疫显像

目的:以重组人促甲状腺素(recombinant human thyrotropin,rhTSH)为靶向探针,测定131I标记rhTSH的标记率、放化纯度和比活度,并探讨其在荷人分化型甲状腺癌(differentiated thyroid carcinoma,DTC)裸鼠模型中的体内分布情况和放射免疫显像(radioimmunoimaging,RII)。方法:采用氯胺T法,利用131I标记rhTSH,Sephadex G25M柱纯化放射性标记物,纸层析法测定其标记率、放化纯度、室温稳定性及血清稳定性,并计算其放射性比活度,进而研究该放射性标记药物在荷K1裸鼠模型中的生物分布及RII情况。结果:131I-rhTSH标记率为(93.04±1.13)%,放化纯度为(97.71±1.14)%,比活度为(4.92±0.06)MBq/μg;131IrhTSH放于室温1、6、12、24 h后所测得的放射性化学纯度分别为(92.94±0.34)%、(91.81±0.64)%、(91.38±1.20)%、(90.43±0.74)%;而与血清孵育1、6、12、24 h后所测得的放射性化学纯度分别为(92.59±0.73)%、(91.33±0.98)%、(91.01±0.73)%、(89.58±1.33)%。荷K1裸鼠模型的体内分布及单光子发射型计算机断层成像(single photon emission computed tomography,SPECT)显示分子探针131I-rhTSH可以在肿瘤组织中靶向聚集,在24 h时肿瘤/肌肉(T/NT)比达最高,且肿瘤显影最清晰。结论:成功制备了分子探针131I-rhTSH,在荷人DTC裸鼠模型中有较好的靶向作用,为DTC的进一步诊治奠定基础。

重组人促甲状腺激素辅助^(131)Ⅰ在儿童和青少年分化型甲状腺癌的临床研究

目的评估重组人促甲状腺激素(rhTSH)辅助^(131)I对治疗儿童和青少年分化型甲状腺癌的安全性和有效性。方法本研究共纳入87例分化型甲状腺癌患者,川I疗前注射重组人促甲状腺激素的46例患者为实验组,^(131)I疗前停用甲状腺素药物的41例患者为对照组,对其进行回顾性调查研究。结果实验组患者在注射重组人促甲状腺激素后第1天、第3天和第6天血清中促甲状腺激素浓度间存在统计学差异,第三天的浓度最高。^(131)I疗前两组患者的促甲状腺激素浓度存在统计学差异(t=2.362,P=0.023)。对于甲状腺球蛋白抗体阴性患者,对照组患者的血清甲状腺球蛋白浓度显著高于实验组rhTSH注射第3天浓度(1.5±1.2 vs.0.7±1.4,P=0.034)。^(131)I清甲3~8个月后全身显像结果显示,实验组34例(84%)患者无放射性物,对照组例40例(87%)患者无放射性物,实验组与对照组患者间不存在统计学差异(χ~2=0.277,P=0.599)。实验组和对照组患者^(131)I再次清甲的原因分析结果显示不存在统计学差异(P=0.875)。结论在短期内重组人促甲状腺激素和停用促甲状腺激素对于^(131)I清甲治疗在甲状腺清除、生化缓解、短期复发等结局不存在统计学差异。重组人促甲状腺激素介导^(131)I清甲治疗对于儿童和青少年分化型甲状腺癌是一个更好的方法。

甲状腺细胞的简易冷冻保存方法

以含４０％小牛血清、８％二甲亚砜的Ｅａｇｌｅ培养液作为冻存液，采用温度梯度冷冻法保存人正常或Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）甲状腺细胞，结果显示，冷冻保存３、６或１２个月的甲状腺细胞成活率均大于８５％，各冻存时相的细胞对ＴＳＨ刺激生成ｃＡＭＰ的反应性无明显差异，并与非冷冻甲状腺细胞的反应强度相似。提示冻存一年内的甲状腺细胞仍保持良好的活力与功能，可以作为体外，研究甲状腺生理功能和病理变化的材料。

血清β⁃hCG和孕酮表达与妊娠剧吐患者甲状腺功能 和胃动素相关性

目的探究妊娠剧吐患者血清β⁃人绒毛膜促性腺激素(β⁃hCG)、孕酮(P)表达及与甲状腺功能、胃动素(MOT)的相关性。方法选取2018年1月至2019年10月本院收治的81例妊娠剧吐孕妇作为研究组,选取79例正常孕妇作为对照组。检测比较两组血清β⁃hCG、P、MOT水平、妊娠剧吐程度(VAS评分)、甲状腺功能[游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、促甲状腺素(TSH)],分析血清β⁃hCG、P水平与VAS评分、甲状腺功能、MOT的相关性,探讨血清β⁃hCG、P与妊娠剧吐的关系。结果研究组血清β⁃hCG水平高于对照组,血清P水平低于对照组(P<0.05);研究组血清FT3、FT4水平及VAS评分高于对照组,血清TSH及MOT水平低于对照组(P<0.05);血清β⁃hCG水平与血清TSH、MOT水平存在显著负相关,与血清FT3、FT4水平及VAS评分存在显著正相关(P<0.05);血清P水平与血清TSH、MOT水平存在正相关,与血清FT3、FT4水平及VAS评分存在显著负相关(P<0.05);血清β⁃hCG、P与妊娠剧吐高度相关(P<0.05)。结论妊娠剧吐患者血清β⁃hCG表达异常升高,P表达较低,与患者甲状腺功能、MOT水平及妊娠剧吐程度关系密切,监测其变化情况可为临床合理制定干预措施提供指导性参考。

血清激素检测在判断早期妊娠流产结局的临床价值研究

目的:分析血清激素检测在判断早期妊娠流产结局中的预测价值。方法:选取2011年2月-2016年11月本院收治的120例早期先兆流产孕妇作为观察组(根据安胎治疗结果分成妊娠持续亚组57例和流产亚组63例),同时选取90例正常妊娠的健康孕妇作为健康对照组,对比分析入院日、入院1周、入院2周时组间孕妇血清雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,PROG)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-Human chorionic gonadotropin,β-h CG)、抑制素A等孕期相关激素表达水平的差异。结果:入院时、入院1周、入院2周,观察组孕妇的血清E2、PROG、、β-h CG、抑制素A均显著低于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.0.5)。入院时、入院1周、入院2周,流产亚组的血清E2、PROG、β-h CG、抑制素A均显著低于妊娠持续亚组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:早期先兆流产孕妇血清激素水平有明显异常变化,早期血清激素联合检测有利于准确预测和判断早期妊娠结局,为早期正确识别难免流产提供可靠信息。

人促甲状腺激素受体的制备及其敏感性测定

目的探索一项简便、经济的提取人甲状腺促甲状腺激素（ｔｈｙｒｏｉｔｒｏｐｉｎ，ＴＳＨ）受体－Ｇｓ蛋白－腺苷酸环化酶信息传递系统及检测ＴＳＨ受体敏感性的方法。方法用高速离心法，从低温保存的人甲状腺组织提取细胞膜蛋白ＴＳＨ受体及与之偶联的Ｇｓ蛋白－腺苷酸环化酶，以腺苷酸环化酶的活性反映ＴＳＨ受体与配基ＴＳＨ结合的敏感性。结果提取膜蛋白量（３０～１８０μｇ）与ｃＡＭＰ生成量之间呈显著的线性相关（ｒ＝０．９８７，Ｐ＜０．００５）；膜蛋白量相同时（５０μｇ），配基人ＴＳＨ（ｈＴＳＨ）浓度（０～２５００μＩＵ／ｍｌ）与ｃＡＭＰ生成量之间呈极显著的线性相关（ｒ＝０．９５４，Ｐ＜０．００１）；Ｇｓ蛋白兴奋剂ＧＴＰγＳ浓度（０～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ）与ｃＡＭＰ生成量之间亦呈极显著性相关（ｒ＝０．９８６，Ｐ＜０．００１）。结论该方法制备到完整的ＴＳＨ受体－Ｇｓ蛋白－腺苷酸环化酶信号传递系统，腺苷酸环化酶活性能较好反映ＴＳＨ受体对配基ｈＴＳＨ刺激的敏感性。此方法简便经济，可用于甲状腺ＴＳＨ受体－Ｇｓ蛋白－腺苷酸环化酶信号传递系统的实验室研究。

人促甲状腺激素（hTSH）ELISA的建立

采用抗ｈＴＳＨ单抗８Ｅ７包被聚苯乙烯４０孔板作为固相抗体，另用高滴度的兔抗ｈＴＳＨ多抗作液相抗体，以辣根过氧化物酶标羊抗兔ＩｇＧ作为标记第二抗体为反应的显示系统，以邻苯二胺作底物，４５０ｎＭ吸收值计算ｈＴＳＨ浓度，建立了高灵敏度的ｈＴＳＨ酶免吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）。灵敏度为０．０３ｍＩＵ／Ｌ。批内ＣＶ１．４～６．７％平均５．４％（ｎ＝２０）批间ＣＶ为７．０％。方法特异性鉴定显示与其他糖蛋白激素无明显的交叉反应性。添加回收及稀释度试验鉴定均表明方法重复性、准确性、线性相关都符合临床应用标准。应用本法与瑞士Ｓｅｒｏｎｏ公司出品的酶免磁颗粒分离药盒同时测定１３０例，相关系数为０．９３。

TSH双位点单抗免疫放射测定法的建立及临床应用

采用本所制备及鉴定的二株不同位点的抗ｈ－ＴＳＨ单抗１３Ｂ４和８Ｅ７，建立了高灵敏度、高特异的ｈ－ＴＳＨ免放测定法。其中经饱和硫酸铵和ＰｒｏｔｅｉｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析柱纯化的１３Ｂ４以Ｉｏｄｏｇｅｎ固相法进行碘标，纯化的８Ｅ７（１∶１００稀释度）作塑料管固相抗体。方法学鉴定表明，本法与生理剂量的其他糖蛋白激素ｈ－ＦＳＨ、ｈ－ＬＨ、ｈＣＧ无明显交叉反应，灵敏度达０．０２６ｍＵ／Ｌ（－ｘ±２ｓ），批内ｃｖ为１．２３～７．３０％，批间ｃｖ为１２．３％。稀释度试验示平行线性关系好，ｒ＝０．９９９。初步临床应用结果表明：甲亢６４例，ＴＳＨ值为未测得（ＮＤ）～０．３１ｍＵ／Ｌ，９５％可信限为ＮＤ～０．２６３ｍＵ／Ｌ；甲减２８例，ＴＳＨ范围为６．６～１８２ｍＵ／Ｌ；甲状腺功能正常者９８例ＴＳＨ为１．４５ｍＵ／Ｌ（Ｐ＿（５０）），９５％可信限为０．３２６～６．０５９ｍＵ／Ｌ。本法与瑞士Ｓｅｒｏｎｏ酶免药盒同时测定１２８例，两种结果的相关系数ｒ＝０．８４４（Ｐ＜０．０１）。经上海华山医院等４家医院初步临床试用，结果表明本法与国内外同类型药盒相比，测定方法简便，相关性高，临床符合率好。