抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的制备人 Ig G检测用双特异性单克隆抗体诊断试剂。方法用人 Ig G免疫 BAL B/c小鼠脾细胞与抗HRPMc Ab杂交瘤细胞 HAT敏感株进行第 2次融合。结果获得 5株能稳定分泌抗人 Ig-抗 HRP的双特异性单克隆抗体的杂交-杂交瘤细胞 ,分泌的抗体亚类其中 1株为 Ig G2 a/Ig G1,余为 Ig G1 /Ig G1 。培养上清与腹水效价分别为 2 - 7,10 - 5以上 ,经 HRP亲和层析有 2个蛋白吸收峰 ,Bs Mc Ab存在于第 2峰。用 EL ISA法及免疫印迹试验证明 :Bs Mc Ab只与人 Ig G有特异性反应。杂交 -杂交瘤细胞连续 3月培养和反复冻存 ,复苏后仍能稳定保持分泌 Bs Mc Ab的能力。结论该方法制备简单 ,灵敏高度 。

杂交-杂交瘤技术制备BsMAb的研究进展及其在食品安全检测中的应用

双特异性单克隆抗体(bispecific monoclonal antibody,BsMAb)是指具有两个不同特异性抗原结合位点的单克隆抗体分子。杂交-杂交瘤技术因其简便易行、制备周期短,在制备Bs MAb方面有较大优势。基于杂交-杂交瘤技术能制备出可以特异性识别两种或者两类小分子药物的Bs MAb,在食品安全多残留免疫分析检测中具有较好的应用价值。本文综述了杂交-杂交瘤技术制备Bs MAb的进展,探讨了基于该技术的Bs MAb生成机制,讨论分析了杂交-杂交瘤及Bs MAb筛选制备的关键技术要点,并归纳了Bs MAb在检测食品中小分子污染物方面的应用进展,旨在为食品安全多残留免疫分析技术的发展应用提供参考。

抗肾综合征出血热病毒和抗辣根过氧化物酶的双特异性单克隆抗体的建立

成功地获得了既抗肾综合症出血热病毒,又抗辣根过氧化物酶的双特异性单克隆抗体(简称抗HFRSV-抗HRP BsMcAb)。方法是,先将分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤A25-1细胞用杂氮鸟嘌呤进行诱变试验,建立了分泌抗HFRSV McAb的HGPRT细胞株(即HAT敏感型细胞株)251AGD6。用此细胞与HRP免疫的Balb/c小鼠脾细胞再次融合,得到分泌抗HFRSV-抗HRP的BsMcAb杂交杂交瘤(Hybrid Hybridoma)261-HRPB10细胞株。用双抗原免疫斑点试验和双抗原ELISA试验测定251-HRPB10腹水BsMcAb,滴度均为1000;用IFA测定单向抗HFRSV抗体滴度为10000;用免疫斑点法和ELISA测定单向抗HRP抗体滴度,均为100000。杂交杂交瘤的染色体数目在150条左右,证实是三细胞两次杂交瘤。

杂交－杂交瘤细胞系的建立及其生物学特性

研究了以产生抗人小细胞肺癌相关抗原和ＣＤ３双特异性抗体（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ）的杂交杂交瘤（Ｈｙｂｒｉｄ－ｈｙｂｒｉｄｏｍａ）的方法及双特异性抗体的性质。两个具有不同表型（ＨＡＴ敏感／Ｎｅｏ拮抗和ＨＡＴ拮抗／Ｎｅｏ敏感）杂交瘤细胞系，经常规方法进行融合。最后选出７个分泌双特异性抗体的杂交。杂交瘤细胞系并对其中一个克隆系细胞进行了测示研究。结果表明，该克隆系细胞培养上清能有效增强ＬＡＫ细胞对靶瘤细胞的杀伤活性，表明其具有临床应用前景。

抗辣根过氧化物酶单克隆抗体的研制和鉴定

用国产辣根过氧化物酶(HRP)免疫BALB/C鼠,取免疫脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得了7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株,其培养上清液的效价为256～4096,腹水效价为1024×10~3～4 096×10~3.上述7株细胞株中的6株所产生的单克隆抗体均能制备出质量良好的鼠单克隆PAP复合物,用于免疫组织化学及血清学研究均取得较理想效果。将7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株适应于含8-氮杂鸟嘌呤培养基中,诱导出了对HAT敏感的突变细胞株,为研制双特异性单克隆抗体奠定了基础。

抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体的研制及初步应用

用8－AG（8－氮杂鸟嘌呤）驯化的HRP－MCAb（抗辣根过氧化物酶单克隆抗体）杂交瘤细胞HAT（次黄嘌呤氨基喋呤胸苷）敏感株与人IgG免疫的BALB／c小鼠脾细胞进行二次融合，获得5株能稳定分泌抗人IgG－抗HRP的BsMcAb（双特异性单克隆抗体）杂交－杂交癌细胞，用其混合腹水经HRP亲和层析纯化的BsMcAb制备BsMcAbPAP（双特异性单抗过氧化物酶-抗过氧化物酶复合物）试剂代替丙肝诊断试剂盒中酶标二抗，比较结果初步表明两者差异无显著意义，将为IgG的检测提供有用试剂。

抗HIV p24和人A型红细胞双特异性单克隆抗体的研制

目的 :制备抗HIVp2 4和人A型红细胞双特异性单抗 (mAb) ,并建立检测HIVp2 4的间接血凝试验。方法 :将分泌抗HIVp2 4mAb的杂交瘤株 2 E4和分泌抗人A型红细胞mAb的杂交瘤株S2 ,分别用 8 Ag和 5 BrdU驯化 ,使成为HAT敏感株。将两者常规融合 ,筛选分泌双特异性mAb的杂交 杂交瘤株。然后制备并纯化双特异性mAb ,用其建立的间接血凝法检测p2 4。结果 :共获得 6株杂交 杂交瘤细胞株 ,以其分泌的双特异性mAb建立了检测HIVp2 4的间接血凝法 ,敏感性可达 4 0 0ng/L。结论 :获得可稳定分泌双特异性mAb的杂交 杂交瘤株 ,并用纯化的双特异性mAb建立了快速检测HIVp2

抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体的提纯及应用

应用杂交—杂交瘤技术中的三瘤体（Trioma）法，获得的能稳定分泌抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体的细胞株BS－33所诱生的BALB／c小鼠腹水为材料，采用三种不同的层析方法（DEAE－52、羟基磷灰石及双亲和层析）均能提纯出该双特异抗体。用于临床检测HBSAg，与科华试剂检测结果符合率为100％。

分泌抗HBsAg-抗HRP双特异单克隆抗体杂交-杂交瘤的建株

用分泌抗-HBs Ag单克隆抗体的杂交瘤细胞的8-氮杂鸟嘌呤(8-AG)耐受株作为亲本细胞,与辣根过氧化物酶(HRP)免疫的BALB/c小鼠脾细胞进行第2次融合,从382个克隆上清中筛选出一株分泌抗-HBs Ag-抗-HRP双特异抗体的阳性孔。经多次克隆纯化建立3株杂交-杂交瘤,命名为Bs33、Bs38和Bs39,其抗体均属Ig G_1型。细胞染色体平均为113条。细胞反复冻存、复苏、传代仍稳定分泌双特异抗体。

角蛋白和过氧化物酶双特异性杂交杂交瘤的建立

作者采用杂交杂交瘤技术制备用于免疫学测定的双特异性抗体。以8-氮鸟嘌呤处理抗过氧化物酶杂交瘤细胞株E-47,获得了HAT敏感的突变株,且保持抗过氧化物酶分泌活性,将其中一个细胞克隆O45克隆化后,与角蛋白免疫的小鼠脾细胞融合,得到了一株稳定分泌抗角蛋白和抗过氧化物酶双特异性抗体的杂交杂交瘤BKH,染色体众数为129条,分泌的抗体含有IgG(1-2a)型杂交抗体。免疫组化显示,BKH抗体可识别角化的皮肤鳞状上皮组织,而不与其它上皮组织反应。

分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤细胞株E_4和E_7

用分泌抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体的6-巯基鸟嘌呤抗性杂交瘤突变株BAH_1-TG细胞与用辣根过氧化物酶(HRP)免疫的小鼠脾细胞进行二次杂交。二次杂交瘤细胞的培养上清用双抗原夹心放射免疫测定法和双抗原夹心酶联免疫测定法检测抗hCG-抗HRP双特异抗体。经多次克隆和筛选,获得两株分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤株E_4和E_7。