羟基喜树碱脂质体调节SphK1/S1P信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

【目的】探讨羟基喜树碱脂质体(LHCPT)调节鞘氨醇激酶1(SphK1)/1-磷酸鞘氨醇(S1P)信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。【方法】SD大鼠分为对照组、模型组、羟基喜树碱(HCPT)组、LHCPT组、卡托普利组、LHCPT+K6PC-5(SphK1激活剂)组,每组12只。除对照组外,其他组大鼠均需通过腹腔注射阿霉素的方法构建心力衰竭大鼠模型,建模成功后,进行给药处理,给药一天一次,持续4周。彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF);HE、Masson染色分别检测大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化;ELISA法检测大鼠心肌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;qRT-PCR检测大鼠心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、I型胶原蛋白(Collagen I)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)表达;Western blot检测大鼠心肌组织中SphK1、S1P蛋白表达。【结果】与对照组比较,模型组大鼠心肌组织病理损伤及纤维化严重,LVESD、LVEDD、TNF-α、IL-6水平、TGF-β1、Collagen I、CollagenⅢmRNA表达及SphK1、S1P蛋白表达升高,LVEF降低(P<0.05);与模型组比较,HCPT组、LHCPT组、卡托普利组大鼠心肌组织病理损伤及纤维化减轻,LVESD、LVEDD、TNF-α、IL-6水平、TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达及SphK1、S1P蛋白表达降低,LVEF升高(P<0.05);与LHCPT组比较,LHCPT+K6PC-5组大鼠心肌组织病理损伤及纤维化加剧,LVESD、LVEDD、TNF-α、IL-6水平、TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达及SphK1、S1P蛋白表达升高,LVEF降低(P<0.05)。【结论】LHCPT可能通过抑制SphK1/S1P信号通路抑制心力衰竭大鼠心肌纤维化。

羟基喜树碱脂自制质体注射液与市售注射液家兔体内药代动力学行为的比较

目的 比较自制羟基喜树碱脂质体注射液 (hydroxycamptothecinliposomesinjection ,L HCPT)和市售羟基喜树碱注射液 (markethydroxycamptothecininjection ,M HCPT)在家兔体内的药代动力学行为。方法 分别静脉注射单剂量 ( 1mg kg)的L HCPT和M HCPT ,用HPLC法测定血浆中的药物浓度 ,用 3p87程序和SPSS软件处理和分析数据 ,计算有关药代动力学参数。结果 经 3p87程序拟合 ,家兔静脉注射单剂量L HCPT和M HCPT后 ,其血药浓度 时间数据分别符合权重为1 C C的二室模型 ;静脉注射L HCPT和M HCPT后Cmax分别为 3 1768、1 5 2 19μg ml,t1 2 β分别为 3 3 990 7、2 9 3 92 9min ,AUC分别为 2 8 85 15、11 65 5 1μg·min·ml- 1 ,CL分别为 0 .0 3 5 0、0 0 860L·min- 1 ·kg- 1 ,Vc分别为 0 2 70 0、0 64 0 0L kg ,可见L HCPT比M HCPT注射后具有更高的血药浓度水平 ,较长的消除半衰期 ,更大的血药浓度 时间曲线下面积 ,较低的总体清除率和较小的表观分布容积。结论 L HCPT和M HCPT在家兔体内的一些重要的药代动力学特性发生了明显改变 。

羟喜树碱脂质体的粒径对组织分布的影响

目的:考察羟喜树碱脂质体的粒径对组织分布的影响。方法:小鼠尾静脉注射不同粒径的羟喜树碱脂质体,采用HPLC法测定不同时间点小鼠组织脏器中的药物浓度。结果:减小粒径可延长羟喜树碱脂质体在血液中滞留的时间。不同粒径(2 5nm～2 73nm)的羟喜树碱脂质体对各组织脏器的趋向性一致,主要分布于肝脏、脾脏、肾脏和肠。结论:粒径(在2 5nm～2 73nm范围内)没有改变脂质体的组织分布特异性,但羟喜树碱脂质体在一些脏器的经时分布发生了变化。

羟基喜树碱脂质体的制备及其包封率测定

目的：制备符合肺靶向要求的羟基喜树碱脂质体并测定其包封率。方法：采用薄膜分散一冻融法制备羟基喜树碱脂质体；用凝胶柱色谱法分离游离药物；高效液相色谱法测定包封率。采用ZORBAXSB-C18柱（4．6mm×250mm，5μm），以75mmol·L^-1醋酸铵-5mmol·L^-1三乙胺（冰醋酸调pH至5．6）缓冲液／乙腈（75：25）为流动相，流速1mL·min^-1，检测波长383nm，柱温30℃。结果：制得的脂质体平均粒径大于2μm，包封率大于70％。在选定的色谱条件下，羟基喜树碱与辅料能完全分离，在0．2～20mg·L^-1范围内，药物浓度与峰面积呈良好的线形关系（r=0．9998）。结论：薄膜分散-冻融法适用于制备肺靶向羟基喜树碱脂质体；凝胶柱-高效液相色谱法操作简单，准确，重复性好，可用于测定羟基喜树碱脂质体的含量和包封率。

羟基喜树碱长循环脂质体冻干剂的制备及理化性质

以羟基喜树碱(1)为模型药物,大豆磷脂为载体材料,泊洛沙姆F-68为膜表面修饰材料,所制备的1冻干长循环脂质体冻干剂包封率为82.3%,可在30s内分散为均匀的淡黄色胶体溶液。在pH7.4磷酸盐缓冲液和大鼠血浆中24h内无渗漏。用纯水复溶后测得相转变温度为73℃。稳定性初步试验表明所得脂质体基本稳定。

羟基喜树碱脂质体血中的稳定性考察

目的:考察脂质体对羟基喜树碱α-羟基内酯环结构的保护作用。方法:全血中分别加入羟基喜树碱脂质体、羟基喜树碱内酯溶液和羟基喜树碱羧酸盐溶液,12h内定时取样,采用高效液相色谱(HPLC)法测定。结果:12h脂质体包裹的羟基喜树碱在全血中的闭环率大于60.28%;而未包裹的羟基喜树碱的闭环率仅为32.24%。结论:脂质体对羟基喜树碱结构具有较好的保护作用,能有效地保护羟基喜树碱的α-羟基内酯环。

羟基喜树碱脂质体的制备及质量评价研究

目的:制备羟基喜树碱(HCPT)脂质体,并对其质量进行评价。方法:采用薄膜分散-高压乳匀法制备羟基喜树碱脂质体;用激光粒度分析仪测定其Zeta电位、粒径大小;考察其在0.9%NaCl溶液、水、5%葡萄糖溶液中8 h的稳定性;用凝胶柱层析法考察包封率;采用薄膜透析法考察体外释药性质。结果:羟基喜树碱脂质体Zeta电位为(-33.1±1.3)mV,平均粒径(182.5±5.6)nm,8 h内在水、5%葡萄糖溶液中稳定性良好;包封率(91.2±1.2)%;体外释药曲线符合Higuchi方程Q=1.291 6t1/2+0.309 8,r=0.980 3。结论:本试验制备的羟基喜树碱脂质体稳定性好,大小均匀,包封率高,并具有延缓药物释放的性质。

羟基喜树碱脂质体与顺铂联用对耐顺铂的人食管癌Eca109细胞周期和凋亡的影响

目的:研究羟基喜树碱脂质体(LHCPT)与顺铂(DDP)联用对耐DDP的人食管癌细胞Eca109细胞(Eca109/DDP)细胞周期和凋亡的影响。方法:取对数生长期的Eca109/DDP细胞,分别用0、1 mg/L DDP处理,再用0.00、0.49、0.98、1.96、3.92、7.84μg/L LHCPT处理72 h,MTT法测定细胞增殖状况。取对数生长期的Eca109/DDP细胞,分别用0、1 mg/L DDP处理后,再用0.00、3.92μg/L LHCPT处理72 h,用流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡情况。结果:相对于单独应用,LHCPT与DDP联合应用抑制了Eca109/DDP细胞的增殖(FLHCPT=40.330,FDDP=641.010,F交互=20.330,P均<0.001),以3.92μg/L LHCPT与1 mg/L DDP联用效果最佳(P<0.05)。相对于单独应用,3.92μg/L LHCPT与1 mg/L DDP联用可阻滞Eca109/DDP细胞在G0/G1期(FLHCPT=16.184,FDDP=33.660,F交互=15.100,P均<0.05),同时增加细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率(P均<0.05),二者具有协同效应。结论:LHCPT具有辅助DDP治疗食管癌的作用。

大鼠静脉注射羟喜树碱脂质体的胆汁排泄研究

目的研究羟喜树碱不同制剂经大鼠静脉注射给药后的胆汁排泄特征。方法大鼠分别静脉给予羟喜树碱脂质体和羟喜树碱注射液,24 h内收集胆汁并采用HPLC进行测定。结果大鼠静脉注射羟喜树碱脂质体和羟喜树碱注射液24 h累积胆汁排泄量基本一致,羟喜树碱脂质体组平均排泄11%,羟喜树碱注射液组平均排泄13%。结论脂质体不改变羟喜树碱的胆汁排泄途径。

比格犬静滴羟基喜树碱脂质体的毒代动力学研究

目的:研究抗癌药物羟基喜树碱(HCPT)新剂型羟基喜树碱脂质体(LHCPT)在Beagle犬体内的毒物代谢动力学,探讨该药物是否在血液中有蓄积作用。方法:采用HPLC-荧光检测法测定全血中LHCPT的浓度。结果:在第1天和连续给药第30天后Cmax和AUC值存在剂量相关性;药物半衰期t1/2不同剂量之间无显著变化(P>0.05)。AUC、Cmax、t1/2值多次给药与单次给药后比较,同剂量下均未见显著提高(P>0.05)。结论:LHCPT连续静脉给药后未见血液中有明显蓄积现象。

羟喜树碱脂质体中药物对磷脂稳定性的影响

目的:通过对磷脂水解产物溶血磷脂(LPC)的测定,对比空白脂质体与含药脂质体中溶血磷脂含量变化,系统研究了羟喜树碱脂质体中药物对脂质体稳定性的影响。方法:通过高温加速试验的方法,对HCPT脂质体中LPC含量的变化进行比较性研究,并采用HPLC-ELSD法对其含量进行准确测定。结果:经加速试验后发现,含药脂质体中LPC的百分含量较空白脂质体增加10%,两者存在显著性差异(P<0.05)。结论:HCPT脂质体中药物对磷脂水解过程有明显的催化作用,建议在此类药物的研发中应高度关注。

阳离子交换树脂-高效液相色谱法测定羟喜树碱脂质体包封率

目的建立阳离子交换树脂-高效液相色谱(HPLC)法测定羟喜树碱脂质体方法的包封率。方法阳离子交换树脂柱层析法分离脂质体和游离药物,HPLC法测定脂质体中药物的含量,计算包封率。结果在所选色谱条件下,辅料不干扰测定,羟喜树碱浓度在0.56～11.20μg·mL-1范围内线性关系良好。阳离子交换柱层析法可将脂质体与游离药物有效分离,药物回收率99.4%,加样回收率98.1%。样品的包封率88.3%～91.5%。结论阳离子交换柱层析法便捷、准确,可用于测定羟喜树碱脂质体的包封率。

N-三甲基壳聚糖包衣羟喜树碱脂质体冻干剂的研制

目的:对N-三甲基壳聚糖(TMC60)包衣羟喜树碱脂质体(HCPTL)冻干剂的处方及制备工艺进行优化。方法:采用逆向蒸发法制备HCPTL,并用TMC60包衣,经高压乳匀得到纳米级脂质体。以包封率为考察指标,正交试验优选处方及工艺,并筛选最佳的冻干保护剂进行冷冻干燥。对复水化后脂质体的形态、Zeta电位、粒径等进行考察。结果:TMC60包衣HCPTL的最佳处方及工艺为:药脂比为1:30,胆固醇:卵磷脂为1:3,旋蒸温度为35℃,TMC60浓度为0.35%,最佳冻干保护剂为15%(w/v)的海藻糖。复水化后形态圆整,平均包封率为(82.2±2.3)%(n=3),Zeta电位为(53.2±2.0)mV,平均粒径为(92.4±18.5)nm。结论:TMC60包衣HCPTL冻干剂具有包封率高,表面带正电荷等特点,为其进一步研究奠定了基础。

羟基喜树碱脂质体的制备与性质研究

目的:确定羟基喜树碱脂质体的制备工艺。方法:利用薄膜分散-超声法制备羟基喜树碱脂质体,并对制备得到的脂质体进行粒径、稳定性和体外释放的评价。结果:制备到得平均粒径为较小,并具有一定缓释效果的羟基喜树碱脂质体。结论:薄膜分散-超声法适用于制备粒径均一、包封率较高HCPT脂质体。

羟基喜树碱脂质体的制备及其抗肿瘤效果的评价

目的:制备羟基喜树碱脂质体,并观察其对小鼠肝癌H22及肉瘤S180实体瘤的抑瘤作用。方法:薄膜分散法制备羟基喜树碱脂质体,并对其粒径等理化性质进行表征;昆明小鼠分别于右腋下皮下接种肝癌H22及肉瘤S180瘤种,隔日静脉注射给药1次,共给药3次,末次给药后第5天取血涂片进行白细胞计数,并将动物处死,剥离皮下肿瘤并称重,计算抑瘤率。结果:羟基喜树碱脂质体平均粒径为357 nm,包封率大于93%,活性δ内酯环形式大于98%。羟基喜树碱脂质体对小鼠移植性肿瘤H22肝癌和S180肉瘤均有明显抑制作用,与同等剂量(3 mg·kg-1)市售羟基喜树碱注射液比较,抗肿瘤作用差异有统计学意义(P<0.001);各给药组(除小剂量组)都有不同程度的降低白细胞的作用,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);各剂量给药组未见对骨髓细胞有抑制作用。结论:羟基喜树碱脂质体可抑制肿瘤生长,同时也不增加羟基喜树碱的毒性。

脂质体对7-乙基-10-羟基喜树碱稳定性影响

目的考察脂质体对7-乙基-10-羟基喜树碱(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin,SN-38)活性形式的保护作用。方法建立测定SN-38活性形式的HPLC法,考察不同pH条件对SN-38活性与SN-38非活性形式相互转变动力学和平衡比例的影响;并研究了37℃的pH 7.4、8.0、9.0、10.0条件下脂质体对SN-38活性形式的保护作用。结果在pH<4.3的条件下,SN-38以其活性形式存在;在pH>9的条件下,SN-38主要以其非活性形式存在;在pH 6.5的条件下,SN-38活性和非活性形式之间相互转换最慢。包裹在脂质体内的SN-38在模拟生理条件下8 h活性形式质量分数仍大于98%。结论脂质体能够有效地保护SN-38α-羟基内酯环。

羟基喜树碱脂质体多次静脉滴注对Beagle犬的毒性

为了研究羟基喜树碱脂质体连续4周静脉滴注给予Beagle犬后产生的重复给药毒性作用,采用薄膜分散法制备羟基喜树碱脂质体,将30只Beagle犬按照体质量和性别随机分为生理盐水对照组、羟基喜树碱脂质体(0.3、0.6和1.2 mg/kg剂量)组、市售羟基喜树碱注射液1.2 mg/kg对照组,每组6只,雌雄对半,静脉滴注,每日1次,连续给药2 d停药2 d,共连续滴注4周,恢复期为2周。临床观察,检测体质量、摄食量、心电图、临床病理及组织病理学各项指标,全面评价Beagle犬重复给药后产生的毒性反应。结果发现:制备的羟基喜树碱脂质体重现性较好,其剂量相关性地引起Beagle犬食欲不振、呕吐、流涎、体质量减轻、稀便腹泻等消化道毒性反应;在0.6和1.2 mg/kg剂量下引起Beagle犬血液学、血生化部分指标的异常改变,对红细胞和粒细胞有明显的抑制作用;病理结果显示,1.2 mg/kg羟基喜树碱脂质体对给药部位(皮肤)、腺垂体、大肠、胸骨、睾丸有一定损伤作用。同等剂量的注射用羟基喜树碱脂质体和市售羟基喜树碱注射液毒性表现及程度相当。注射用羟基喜树碱脂质体毒性靶器官主要为消化道和睾丸,但毒性可逆,停药即可恢复。羟基喜树碱脂质体对犬的无毒性剂量大约为0.3 mg/kg,相当于临床拟用剂量的3倍,与市售羟基喜树碱注射液相比具有更大的治疗窗口。

气相色谱法测定羟基喜树碱-粉防己碱脂质体中氯仿残留量

目的:采用气相色谱法检测羟基喜树碱-粉防己碱脂质体内氯仿残留量。方法:采用KB-50型毛细管柱(30m×0.25mm,0.25μm),ECD检测器,以二氯甲烷为内标物,测定羟基喜树碱-粉防己碱脂质体中氯仿的残留量。结果:氯仿在0.59～23.68μg·mL^(-1)浓度范围内与其峰面积积分线性关系良好,平均加样回收率均≥95.14%,测得三批样品的氯仿残留量均符合规定。结论:经方法学验证,该检测方法准确可靠,适用于羟基喜树碱-粉防己碱复方脂质体中氯仿残留量的测定。

羟基喜树碱脂质体的制备工艺研究

目的 优化羟基喜树碱脂质体的制备工艺。方法 采用单因素考察法及Box Behnken-响应面法,考察药物在水合介质的质量浓度、包封温度、卵磷脂与药物质量比、卵磷脂与胆固醇质量比等因素对羟基喜树碱脂质体包封率的影响,优化其制备工艺;并通过电镜、粒径分布、电位等对脂质体进行质量评价。结果 羟基喜树碱脂质体的优化工艺为:药物在水合介质的质量浓度为0.12 mg/mL,包封温度为48.64℃,卵磷脂与药物质量比为14.07∶1,卵磷脂与胆固醇质量比为2.23∶1。制备得到的羟基喜树碱脂质体包封率预测值为98.29%,实际包封率为95.97%;粒径为193.1 nm,多分散系数(PDI)为0.221;Zeta电位为-33.1 mV。结论 建立的脂质体制备工艺简便、包封率稳定,适用于羟基喜树碱脂质体的制备。

肝癌细胞膜嵌合的TPP修饰载羟基喜树碱脂质体的制备及抗肿瘤作用

目的 制备肝癌细胞膜嵌合的TPP修饰HCPT脂质体(HCPT@T/HM-L),将HCPT高效递送到肝癌细胞线粒体,充分发挥药物在靶细胞器的药效作用。方法 采用薄膜水化法制备HCPT@T/HM-L,以挤压法将肝癌细胞膜嵌合在脂质体膜上,测定粒径、ζ电位、电镜进行表征;然后检测体外释放、溶血;以香豆素6为荧光探针,探索其胞内转运、线粒体靶向效果;最后从肿瘤细胞和荷瘤小鼠模型上,系统性评价肝癌细胞膜嵌合的HCPT@T/HM-L抗肿瘤效果。结果 HCPT@T/HM-L在电镜下呈现为规则圆球、具有“核-壳”状结构,粒径大约为(162.7±5.8)nm,ζ电位为(12.4±1.8)m V;HCPT@T/HML能促进载药系统的细胞摄取和靶向进入线粒体;细胞药效结果显示,HCPT@T/HM-L能很大程度上抑制肝癌细胞的生长,降低线粒体膜电位、升高细胞内ROS和Caspase-3水平,降低抗凋亡蛋白Bcl-2,提高促凋亡蛋白Bax表达,从而增强药物促进肝癌细胞的大量凋亡;荷瘤小鼠结果显示,HCPT@T/HM-L能明显抑制皮下瘤的生长,促使肿瘤细胞线粒体出现严重的功能障碍,从而促进肿瘤细胞的大量凋亡;细胞和动物试验结果均显示,HCPT@T/HM-L具有很好的抗肿瘤效果,明显优于其他组,这可能与肝癌细胞膜的融合以及TPP阳离子的线粒体靶向作用有关。结论 HCPT@T/HM-L可以高效递药到肝癌细胞线粒体,促进肿瘤细胞的大量凋亡,在精确治疗肿瘤方面具有较好的临床转化潜能。