LC-MS/MS测定大鼠血浆中阿托伐他汀及其活性代谢产物

目的建立LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀、邻羟基阿托伐他汀及对羟基阿托伐他汀的方法,并应用于CYP3A酶诱导模型大鼠和正常大鼠体内阿托伐他汀的药动学研究。方法采用甲基叔丁基醚-乙酸乙酯(50︰50)液液萃取法提取大鼠血浆中药物。使用XBridgeC18(2.1mm×250mm,3.5μm)色谱柱,柱温35℃;流动相为0.1%甲酸-乙腈(40∶60),等度洗脱4.4 min,流速0.2 mL·min?1;进样体积10μL。质谱采用电喷雾离子(ESI)源,以正离子多反应监测(MRM)模式进行定量分析,选择m/z559.1→440.1(阿托伐他汀),m/z575.3→440.2(邻羟基阿托伐他汀/对羟基阿托伐他汀),m/z 564.3→445.3(阿托伐他汀-d5,内标)作为检测离子对。以地塞米松80 mg·kg?1·d?1连续灌胃给药4 d,建立CYP3A酶诱导模型,取正常及模型大鼠给药后0,0.083,0.17,0.25,0.33,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6 h血样于肝素抗凝管中,离心收集血浆,冷冻保存直到进行测定。结果阿托伐他汀及其2种代谢产物在0.49～500.00 ng·mL?1内均有良好的线性关系(r2>0.99);批内、批间精密度RSD<15%(n=6);方法的提取回收率和基质效应均满足生物样品的检测要求;含药血浆在室温放置4,24h、4℃放置3d稳定。诱导组大鼠血浆中阿托伐他汀血药浓度达峰时间(Tmax)提前,血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)显著低于正常组,消除速率常数K和清除率CL略高于正常组。结论新建立的方法简便、稳定、灵敏,能够用于大鼠血浆内阿托伐他汀及其活性代谢产物的浓度测定和药动学研究。进入CYP3A酶诱导模型大鼠与正常大鼠体循环的活性药物成分差异显著。