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绿色荧光蛋白和潮霉素抗性双标记载体转化草酸青霉菌P8的研究 被引量:11
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作者 张磊 范丙全 黄为一 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期842-845,T0001,共5页
草酸青霉菌P8(Penicillium oxalicum)溶磷菌株具有较强的溶解多种无机难溶磷的能力和促进作物生长的作用。为研究P8在作物根际的定殖状况,用携带加强型绿色荧光蛋白和潮霉素抗性的双标记载体转化溶磷青霉菌P8的原生质体,筛选出稳定、高... 草酸青霉菌P8(Penicillium oxalicum)溶磷菌株具有较强的溶解多种无机难溶磷的能力和促进作物生长的作用。为研究P8在作物根际的定殖状况,用携带加强型绿色荧光蛋白和潮霉素抗性的双标记载体转化溶磷青霉菌P8的原生质体,筛选出稳定、高效表达GFP并对潮霉素产生抗性的转化菌株,Southern杂交分析结果显示,外源质粒DNA是以非同源重组方式整合到转化菌株基因组染色体上。试验证明转化菌株的形态学特征和溶磷能力与野生型菌株无明显差别。 展开更多
关键词 草酸溶磷青霉菌P8 转化 绿色荧光蛋白(GFP) 潮霉素磷酸转移酶基因(hph)
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抗HPT单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定 被引量:2
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作者 杨丽琛 张素香 +2 位作者 皮国华 朱祯 杨晓光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期335-337,共3页
目的 :制备抗潮霉素B磷酸转移酶 (HPT)的单克隆抗体 (McAb) ,建立一种快速检测转基因作物中该选择标记基因HPT编码蛋白的方法。方法 :用基因重组潮霉素B磷酸转移酶 (HPT)抗原免疫BALB C小鼠 ,采用杂交瘤技术制备McAb。选择不同的抗原决... 目的 :制备抗潮霉素B磷酸转移酶 (HPT)的单克隆抗体 (McAb) ,建立一种快速检测转基因作物中该选择标记基因HPT编码蛋白的方法。方法 :用基因重组潮霉素B磷酸转移酶 (HPT)抗原免疫BALB C小鼠 ,采用杂交瘤技术制备McAb。选择不同的抗原决定簇与兔抗HPT多抗配对 ,建立双抗夹心ELISA检测HPT抗原。结果 :筛选出四株稳定分泌抗HPT单抗的杂交瘤细胞株 ,IgG亚类鉴定均为IgG1,ELISA检测证实单抗可特异性识别细胞培养上清、重组子菌体裂解产物中及纯化出的HPT蛋白。结合位点测定实验表明 4株单抗是针对不同的抗原决定簇 ,与多克隆抗体组成双抗夹心ELISA法 ,均可较好地检测到HPT抗原。检测的灵敏度为 30ng ml,且与别的无关抗原无交叉反应性。结论 :4株杂交瘤细胞株特异性好 ,亲和力强 ,组成双抗夹心ELISA法可用于快速。 展开更多
关键词 HPT 单克隆抗体 鉴定
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转基因作物标记蛋白HPT融合表达载体构建、纯化及复性研究 被引量:1
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作者 卓勤 田园 +2 位作者 王锐 朴建华 杨晓光 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期26-30,共5页
目的潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)是转基因作物中广泛应用的抗生素标记基因,本研究构建该基因的融合表达载体,以期得到足量纯化的HPT蛋白,为该外源蛋白的进一步安全性评价奠定基础。方法将hpt基因克隆到线性表达载体pET41 EK/LIC中,得到... 目的潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)是转基因作物中广泛应用的抗生素标记基因,本研究构建该基因的融合表达载体,以期得到足量纯化的HPT蛋白,为该外源蛋白的进一步安全性评价奠定基础。方法将hpt基因克隆到线性表达载体pET41 EK/LIC中,得到该基因的融合表达载体pET41EK/HPT,将pET41EK/HPT载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,沉淀中的包涵体进行了稀释复性、柱上复性和N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解稀释复性等复性研究及活性测定、标签切除、N端测序等工作。结果融合蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,各复性方法表明SKL溶解稀释复性得到的蛋白在活性及产率方面明显高于其他两种方法,利用该方法每升培养物可获得78mg活性HPT融合蛋白,纯度约为93%,经肠激酶切割后,得到的蛋白与天然HPT蛋白N端氨基酸序列完全相同。结论利用本研究方法可得到在活性、分子量及氨基酸序列等方面与天然HPT蛋白一致的目的蛋白。 展开更多
关键词 潮霉素磷酸转移酶 安全性评价 融合蛋白 包涵体 复性
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以潮霉素B磷酸转移酶基因为遗传标记的启动子探针型载体的构建 被引量:4
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作者 李维 张义正 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期736-740,共5页
用来自大肠杆菌的潮霉素B磷酸转移酶基因(hygr)作为遗传标记构建了启动子探针型载体pSUPV8,该基因的转录和翻译起始区以及5’-端编码区两个密码子均被除去,载体骨架为大肠杆菌质粒pUGV2。
关键词 启动子 探针型载体 潮霉素B 磷酸转移酶
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转基因作物标记蛋白潮霉素磷酸转移酶活性的测定方法 被引量:2
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作者 卓勤 杨晓光 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期502-504,共3页
潮霉素磷酸转移酶 (HPT)是转基因作物中重要的标记蛋白 ,其活性的测定对含有该标记基因的转基因作物的植株构建、基因沉默、标记基因去除及安全性分析等具有重要的作用。本文综述了潮霉素磷酸转移酶活性测定的几种方法 ,包括放射化学法... 潮霉素磷酸转移酶 (HPT)是转基因作物中重要的标记蛋白 ,其活性的测定对含有该标记基因的转基因作物的植株构建、基因沉默、标记基因去除及安全性分析等具有重要的作用。本文综述了潮霉素磷酸转移酶活性测定的几种方法 ,包括放射化学法、抑菌生长法及酶耦联法 ,其中放射化学法用于检测组织粗提蛋白中的HPT活性 。 展开更多
关键词 潮霉素磷酸转移酶 转基因作物 标记基因 活性测定
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Large-scale Purification and Acute Toxicity of Hygromycin B PhoSphotransferase 被引量:1
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作者 QIN ZHUO,JIAN-HUA PIAO,YUAN TIAN,JIE XU,AND XIAO-GUANG YANG~2 Institutefor Nutrition and Food Safety,Chinese Centerfor Disease Control and Prevention, Beijing 100050,China 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2009年第1期22-27,共6页
Objective To provide the acute toxicity data of hygromycin B phosphotransferase (HPT) using recombinant protein purified from E. coli. Methods Recombinant HPT protein was expressed and purified from E. coli. To excl... Objective To provide the acute toxicity data of hygromycin B phosphotransferase (HPT) using recombinant protein purified from E. coli. Methods Recombinant HPT protein was expressed and purified from E. coli. To exclude the potential adverse effect of bacteria protein in recombinant HPT protein, bacterial control plasmid was constructed, and bacteria control protein was extracted and prepared as recombinant HPT protein. One hundred mice, randomly assigned to 5 groups, were administrated 10 g/kg, 5 g/kg, or 1 g/kg body weight of HPT or 5 g/kg body weight of bacterial control protein or phosphate-buffered saline (PBS) respectively by oral gavage. Results All animals survived with no significant change in body weight gain throughout the study. Macroscopic necropsy examination on day 15 revealed no gross pathological lesions in any of the animals. The maximum tolerated dose (MTD) of HPT was 10 g/kg body weight in mice and could be regarded as nontoxic. Conclusion HPT protein does not have any safety problems to human health. 展开更多
关键词 Hygromycin B phosphotransferase Selectable marker Acute toxicity Safety assessment
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