屎肠球菌esp和hyl基因与生物被膜形成关系的研究

目的研究临床分离屎肠球菌esp、hyl基因与生物被膜形成的相关性。方法常规分离菌株,采用纸片扩散法和琼脂稀释法进行药物敏感性试验,多重PCR检测本院临床分离屎肠球菌hyl、esp基因的分布情况,微量板定量检测法和激光共聚焦显微镜分析hyl、esp基因与生物被膜形成的关系。结果 70株临床分离屎肠球菌生物被膜形成阳性率为18.6%,其中hyl基因阳性株不能形成生物被膜,esp基因阳性株生物被膜形成率为36.4%,hyl+esp阳性株生物被膜形成率为27.3%,esp基因阴性株生物被膜形成率为6%。结论本院临床分离屎肠球菌形成生物膜的能力较弱,hyl基因不能促进生物被膜的形成,esp基因能够促进生物被膜的形成,生物被膜的形成不局限于esp阳性菌株。

产esp和hyl基因肠球菌与尿路局部免疫关系探讨

目的探讨产esp和hyl基因的肠球菌与尿液局部免疫的关系。方法使用VITEK-2全自动细菌分析仪鉴定出粪肠球菌131株,屎肠球菌105株,绵子糖肠球菌2株,墩鸡肠球菌3株,铅黄肠球菌和浅黄肠球菌各1株。采用聚合酶链反应(PCR)扩增法检测是否含有esp和hyl基因;沉淀离心法检测尿液中白细胞含量;免疫比浊法测定免疫球蛋白A(Ig A)含量。结果 (1)粪肠球菌检测出esp、hyl为73株和61株,同时检测出两种基因的菌株有33株;屎肠球菌测出esp、hyl为55株和51株,同时检测出两种基因的菌株有30株。(2)尿液中白细胞含量为中等量时肠球菌感染最为多见,在白细胞少于104/L时,肠球菌感染组与未感染组差异有统计学意义。(3)在Ig A含量高时,esp、hyl基因与Ig A含量差异有统计学意义。结论肠球菌是否含有esp、hyl基因与尿路局部免疫功能具有重要关系。

兽疫链球菌透明质酸分解酶基因的敲除

以透明质酸分解酶基因(Hyl)为改造目标,利用同源重组技术获得Hyl基因敲除的重组菌。首先以兽疫链球菌的基因组DNA为模板扩增出部分透明质酸分解酶基因(Hyl-1),然后将其克隆到载体pMD19-T上,再以质粒pUC19为模板,PCR扩增得到氨苄青霉素抗性基因,通过反向PCR将其插入Hyl-1基因的中部,得到基因敲除载体pMD19T-SA。该载体与质粒pBR322分别用EcoRⅠ、PstⅠ双酶切后进行连接,得到基因敲除的重组载体pBR322-SA,PCR及限制性酶切分析,构建的敲除载体与设计结果相符。最后,利用这两种敲除载体通过同源重组技术得到一株重组菌,经PCR及酶活鉴定,这株菌的Hyl基因已缺失。