高压氧治疗对正常及SIRS大鼠脾细胞凋亡的影响

目的实验观察高压氧（HBO）对于正常机体及系统性炎症反应综合征（SIRS）状态下脾细胞凋亡的影响。方法 健康雄性SD大鼠50只,体重140~180g,随机分为5组,每组10只。A组：腹腔注射等量生理盐水;B组：腹腔注射等量生理盐水,做3次HBO;C组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500mg/kg）;D组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500mg/kg）,做1次HBO;E组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500mg/kg）,做3次HBO（2ATA）。24小时后杀死大鼠,取脾,用凋亡检测试剂盒标记凋亡脾细胞,用流式细胞仪检测脾细胞凋亡比例。结果HBO治疗对正常大鼠脾细胞凋亡无明显影响,与正常对照组比较,P（0.05,SIRS状态下大鼠脾细胞凋亡明显增加,与正常大鼠组比较,P〈0.05,HBO明显减少SIRS组大鼠脾细胞凋亡率,与SIRS组比较,P〈0.05。结论 HBO根据机体处于不同状态而对脾脏细胞凋亡产生不同的影响。

高压氧治疗对重型颅脑损伤患者全身炎症反应的影响

目的探讨高压氧（HBO）对重型颅脑损伤患者全身炎症反应的影响及可能机制。方法将70例重型颅脑损伤患者分为常规组及HBO组，2组均给予常规治疗（包括手术、降颅内压、营养脑细胞、抗感染及营养支持等），HBO组患者于病情稳定后辅以HBO治疗；另选取性别、年龄与之相匹配的20例健康体检者作为正常对照组。分别于伤后1，7，14及21d时抽取常规组和HBO组患者静脉血，检查C反应蛋白（CRP）水平，采用酶联免疫吸附法测定血清白介素-6（IL-6）水平，并于上述各时间点对2组患者进行序贯器官衰竭评分（SOFA）及格拉斯哥昏迷量表（GCS）评分，逐日判定有无全身炎症反应综合征（SIRS）发生。结果重型颅脑损伤可导致患者血清IL-6、CRP水平明显升高，经HBO治疗后，HBO组患者各时间点IＬ-6、CRP水半均显著低于常规组（P〈0．01或0．05），SIRS发生率及持续时间也明显低于常规组（P〈0．05或0．01），伤后14d及21d时SOFA分值显著低于常规组（P〈0．01），伤后21d时GCS评分明显高于常规组（P〈0．01）；发生SIRS的患者其IL-6及CRP水平、SOFA分值在各时间点均明显高于未发生SIRS患者，GCS评分均明显低于未发生SIRS患者（P〈0．01）。结论HBO治疗能抑制IL-6的产生与释放，从而减轻脯损伤后全身炎症状态，保护重要器官功能，提高临床疗效。

氧化应激及凋亡与重症急性胰腺炎肠屏障功能障碍

目的通过动物实验，观察重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）肠道屏障功能变化，探讨炎症因子释放、肠黏膜氧化应激及凋亡在肠屏障功能障碍中的作用。方法上海交通大学附属第一人民医院动物实验中心内，24只BALB／c小鼠，随机数字法分为2组，SAP组：以雨蛙素联合脂多糖腹腔注射法诱导，先腹腔内注射雨蛙素50μg/kg,连续6次，每次间隔1h，在末次雨蛙素注射同时，腹腔内注射脂多糖10mS／kg（LPSE．Coli）；对照（假手术）组：每小时一次腹腔注射生理盐水2ml，共6次。两组动物分2批（每批6只／组）分别于建模后4h及8h，麻醉后打开腹腔取血及标本。观察小鼠胰腺及肠道病理变化并予评分，测定小鼠血二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）、淀粉酶、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量，测定肠黏膜丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量及黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XO）活力，检测小鼠肠黏膜细胞easpase-3酶活性，脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase—mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）法检测小鼠肠黏膜凋亡细胞并计算凋亡指数。以PASW18．0软件对数据进行方差分析及t检验，明确上述检测指标在两组小鼠间差异是否有统计学意义，从而明确重症急性胰腺炎肠道屏障功能障碍的机制。结果建模后4h及8h，SAP组小鼠胰腺出血、坏死、炎症细胞浸润较对照组严重，胰腺病理评分与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．01），血淀粉酶含量与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）；肠组织病理评分及血DAO质量浓度与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．01）；血TNF-α质量浓度与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0，01）；肠黏膜MDA含量及XO活力与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．01），肠黏膜SOD含量与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．01）、GSH含量与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）；肠黏膜细胞caspase-3酶活性及凋亡指数与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论重症急性胰腺炎发病后，TNF-a等炎症因子瀑布样释放，导致肠黏膜缺血一再灌注损伤，形成严重的氧化应激反应，进一步激活caspase-3通路，导致肠黏膜细胞凋亡增加，是肠黏膜屏障功能受损的重要机制。

高压氧通过调节炎性反应和细胞凋亡对急性心肌梗死模型大鼠心功能的影响

目的探讨高压氧(HBO)在缓解大鼠心肌梗死(AMI)过程中对机体炎症反应和心肌细胞凋亡的调控作用及其机制.方法4周龄的SPF级雄性SD大鼠30只按照数字表法随机分成3组:假手术组、模型组和HBO组.采用冠状动脉结扎法构建大鼠AMI模型,通过超声心动图和血流动力学检测大鼠左心室射血分数(EF)、短轴收缩率(FS)及左室内压上升/下降段最大变化速率(±dp/dtmax)的变化.采用ELISA、qRT-PCR实验检测各组大鼠血清及组织内炎症因子的表达水平.采用Western blotting检测各组大鼠心肌组织中细胞凋亡相关蛋白的表达水平.结果与假手术组比较,模型组的EF和FS显著下降,±dp/dtmax绝对值显著下调(P<0.01);HBO处理后,HBO组大鼠EF、FS和±dp/dtmax均明显高于模型组(P<0.05);模型组大鼠血清炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α和hs-CRP的表达水平显著上调(P<0.01);HBO处理后,HBO组大鼠血清炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α和CRP的表达水平均明显低于模型组(P<0.05).模型组大鼠心肌组织中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平明显高于对照组(P<0.01);相较于模型组,HBO处理后,可显著下调AMI大鼠心肌组织中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平(P<0.05).与假手术组比较,模型组大鼠体内促凋亡蛋白Bax、c-caspase-3的表达水平上调,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下调(均P<0.05);与模型组比较,HBO处理可显著下调AMI大鼠心肌组织中Bax、c-caspase-3的表达水平,上调Bcl-2的表达水平(P<0.05).结论HBO处理可显著改善AMI大鼠模型组织和细胞的炎症反应及心肌细胞的凋亡情况,进而缓解大鼠AMI症状.

高压氧对大鼠T淋巴细胞和细胞因子的影响

目的研究高压氧对健康大鼠以及全身炎症反应综合征（SIRS）大鼠T淋巴细胞和细胞因子（IL-6、IL一10、TNF-d）等的影响。方法40只雄性SD大鼠随机（随机数字法）分为5组。A组：腹腔注射生理盐水（0．9％NaCl，5ml／kg）作为对照组；B组：腹腔注射等量生理盐水，做3次高压氧治疗；C组：腹腔注射酵母多糖一石蜡悬液（500mg／kg）；D组：腹腔注射等量酵母多糖一石蜡悬液，做1次高压氧治疗；E组：腹腔注射等量酵母多糖一石蜡悬液，做3次高压氧治疗。所有大鼠均于腹腔注射24h后处死，门静脉取血，标本采用流式细胞技术对CD3’CD4’CD8‘进行计数，应用ELISA方法检测IL-6、IL-10、TNF—o【血浆水平，以单因素方差分析及LSD—t检验分析数据。结果高压氧治疗可显著降低健康大鼠外周血CIMT细胞百分比（P〈0．01），使CIM／CD8T细胞比值下降（P〈0．05）。酵母多糖腹腔注射使大鼠外周血CIM、CD8T细胞均减少（P〈0．01）。1次和3次HBO治疗可使酵母多糖所致CD4T细胞减少明显恢复（P〈0．01，P〈0．05）。对于未出现高炎症反应的大鼠，HBO治疗可增加IL-6（P〈0．05）和TNF—d（P〈0．01），而减少IL一10（P〈0．05）。结论高压氧可降低健康大鼠外周血CD4T细胞百分比。当出现高炎症反应时，高压氧可以明显抑制细胞因子TNF一仅、IL-6和IL一10的爆发增多。高压氧对健康大鼠和未出现高炎症反应的SIRS大鼠起促炎作用。

高压氧对系统性炎症反应综合征大鼠脾T淋巴细胞的影响

目的本实验以系统性炎症反应综合征（SIRS）为基础，以免疫功能和炎症反应中具有代表性的脾T淋巴细胞为研究对象，观察高压氧（HBO）对SIRS状态机体的影响。方法健康雄性sD大鼠50只，按数字表法随机分为5组。A、B组：腹腔注射生理盐水（5ml／kg）；C、D、E组：腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液（500mg／kg）。D组腹腔注射后4h做1次HBO，B、E组腹腔注射后4、10、18h各做1次HBO。HBO实施方案：100％纯氧洗舱5min后匀速加压至0．20MPa（10-15min），维持1h后匀速减压，出舱。所有大鼠予腹腔注射后24h取脾，检测大鼠脾脏T淋巴细胞数量、比例以及脾细胞凋亡率。结果HBO（B组）降低正常大鼠外周血CD4^＋T细胞至14．09％（P〈0．01），CD8^＋T细胞基本无变化，脾细胞凋亡有增加，但差异无统计学意义。酵母多糖腹腔注射（C组）使大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞平均减少至13．59％及9．75％（P〈0．01），脾细胞凋亡率达到25．40％（P〈0．05）。HBO治疗可使酵母多糖所致CD4^＋T细胞减少明显恢复，D组为19．68％，E组为18．48％（P〈0．01，P〈0．05），HBO对CD8^＋T细胞几乎无影响。HBO治疗组（D、E组）脾细胞凋亡率均明显减少，分别为12．91％、15．97％（P〈0．05）。结论HBO可以根据机体处于正常或疾病状态产生截然不同的影响。HBO对正常机体主要是免疫抑制作用，当机体处于炎症状态（SIRS）时，HBO则具有明显的促进免疫功能恢复的作用，并且这种作用可能不依赖HBO的压力和暴露时间。