金丝桃苷对大鼠颅脑损伤后炎性反应及血脑屏障通透性的影响

目的探讨金丝桃苷对大鼠颅脑损伤(TBI)后炎性反应和血脑屏障损伤的影响及机制。方法选取60只成年SPF级SD大鼠,按随机数字表法随机分为假手术组、模型组、低剂量金丝桃苷组、高剂量金丝桃苷组、脂多糖(LPS)组、高剂量金丝桃苷+LPS组,每组10只。采用改良Feeney自由落体法建立TBI大鼠模型。低剂量、高剂量金丝桃苷组大鼠造模后以金丝桃苷药液灌胃,剂量分别为60、120 mg/kg;LPS组大鼠造模后以LPS药液灌胃,剂量为0.4 mg/kg;金丝桃苷+LPS组大鼠造模后以高剂量金丝桃苷和LPS药液灌胃;每天灌胃1次,持续14 d。灌胃结束后24 h,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估神经功能,采用跳台实验检测认知功能;采用伊文思蓝(EB)定量法检测大鼠血脑屏障通透性;透射电镜观察大鼠血脑屏障结构损伤;采用ELASA检测大鼠血清及脑组织炎性介质[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)]水平;采用免疫印迹法检测脑组织TNF-α/NF-κB/caspase-3蛋白表达水平。结果TBI后,大鼠mNSS评分、跳台潜伏期显著降低(P<0.05),跳台犯错次数、脑组织EB含量、血清及脑组织炎性介质(TNF-α、IL-17、iNOS)水平、脑组织TNF-α和caspase-3蛋白表达及pNF-κB p65/NF-κB p65显著升高(P<0.05);LPS明显加重TBI大鼠神经损伤(P<0.05),明显增高炎性介质水平(P<0.05),明显增高TNF-α/NF-κB/caspase-3蛋白表达水平(P<0.05);金丝桃苷明显改善TBI大鼠脑损伤(P<0.05),而且呈剂量依赖性(P<0.05),高剂量金丝桃苷明显逆转LPS的作用(P<0.05)。结论金丝桃苷可通过抑制TNF-α/NF-κB/caspase-3信号通路、抑制炎性反应,进而减轻TBI大鼠血脑屏障损伤,改善大鼠神经功能。

金丝桃苷对棕榈酸诱导内皮细胞凋亡的保护作用及相关机制的实验研究

目的:研究金丝桃苷对棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响和相关机制。方法:建立棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型,实验分为正常组、棕榈酸组(50μmol/L棕榈酸)、金丝桃苷组(50μmol/L棕榈酸+0.1μmol/L金丝桃苷),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax(Bcl-2相关X蛋白)、Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2蛋白)和内质网应激相关蛋白CHOP(C/EBP同源蛋白)、GRP78(葡萄糖调节蛋白78)的表达水平,PCR检测凋亡相关基因Bax、CHOP mRNA水平,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:与正常组比较,棕榈酸组细胞凋亡率显著增加(P<0.01),Bax/Bc-l2蛋白表达比值显著升高(P<0.01),Bax mRNA表达水平显著升高(P<0.01),迁移能力显著降低。与棕榈酸组比较,金丝桃苷组细胞凋亡率显著降低(P<0.01),Bax/Bcl-2蛋白表达比值显著降低(P<0.01),Bax mRNA表达水平显著降低(P<0.01),迁移能力显著升高(P<0.01)。研究还发现,棕榈酸可提高CHOP(P<0.01)表达(P<0.01),降低GRP78表达(P<0.01);与棕榈酸组相比,金丝桃苷组CHOP和GRP78蛋白和mRNA表达水平均逆转(P<0.01)。结论:金丝桃苷能够缓解棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞内质网应激,减少细胞凋亡,提高细胞迁移能力。

金丝桃苷纳米粒与骨髓间充质干细胞协同给药修复子宫内膜损伤

目的体外细胞实验评价金丝桃苷壳聚糖纳米粒(hyperoside/chitosan-nanoparticles,Hyp/CS-NPs,Hyp-NPs)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的影响及作用机制;体内动物实验探讨Hyp-NPs与BMSCs协同修复大鼠子宫内膜损伤的效果。方法采用流式实验鉴定BMSCs;采用离子交联法制备Hyp-NPs,激光粒度分析仪及透射电镜进行表征评价;采用划痕实验检测Hyp-NPs对BMSCs的迁移作用;以及构建NRF2慢病毒载体,检测Hyp-NPs对BMSCs的氧化损伤模型的作用机制;动物实验将Hyp-NPs与BMSCs协同移植入子宫内膜损伤大鼠模型宫腔中,利用HE、Masson、IHC、TUNEL及ELISA实验从子宫内膜的一般病理、纤维化、干细胞募集及炎症情况,评价其对大鼠子宫内膜损伤的修复作用及妊娠功能。结果成功分离培养BMSCs;成功制备Hyp-NPs;划痕实验表明Hyp-NPs可促进BMSCs迁移;通过成功构建BMSCs的慢病毒NRF2载体以及细胞氧化损伤模型,表明Hyp-NPs可通过激活NRF2调控BMSCs生物轴;动物实验表明Hyp-NPs与BMSCs协同给药可增加子宫内膜厚度及腺体数量,抗纤维化、抗凋亡及抗炎等促进干细胞归巢,恢复子宫内膜损伤大鼠的妊娠功能。结论Hyp-NPs与BMSCs协同给药可修复子宫内膜损伤。

基于太赫兹光谱及1DCNN-BiLSTM的黄蜀葵花金丝桃苷含量预测

太赫兹(THz)光谱具有信噪比高、光子能量低、穿透性强、安全和快速等优点,已广泛应用于食药检测.现有基于HPLC等方法的黄蜀葵花金丝桃苷含量检测耗时长、操作复杂.提出一种基于太赫兹光谱及1DCNN-BiLSTM的黄蜀葵花金丝桃苷含量预测方法:首先采集黄蜀葵花的太赫兹时域谱,并通过傅里叶等变换获取其7种光谱数据;然后利用主成分分析(PCA)对7种光谱数据降维,以获得维数一致的7元样本数据;接着将降维对齐后的7元样本数据输入设计好的1DCNN-BiLSTM网络,以获得金丝桃苷含量预测.与1DCNN、BiLSTM的对比实验结果表明,1DCNN-BiLSTM网络具有较高的预测精度,10次随机实验的平均决定系数达0.970 5.

基于IL-6/STAT3信号通路探讨金丝桃苷抑制胃癌细胞侵袭和迁移的作用机制

目的:研究金丝桃苷(Hyp)对MGC-803胃癌细胞侵袭和迁移的作用及机制。方法:体外培养MGC-803细胞,给予10、20、40、80 mg/L的Hyp处理后,采用MTT法检测MGC-803细胞活力;实验设置Hyp(20 mg/L)组和IL-6(10 ng/mL)+Hyp(20 mg/L)组,同时以不加药物的细胞作为对照,Transwell法检测细胞迁移和侵袭;实验设置IL-6(10 ng/mL)组和IL-6(10 ng/mL)+Hyp(20 mg/L)组,Western blot检测IL-6/STAT3信号通路活化及相关蛋白表达。结果:与对照组相比,Hyp处理后,MGC-803细胞活力下降,MGC-803细胞迁移和侵袭数量显著降低(P<0.01)。与Hyp组比较,Hyp+IL-6组MGC-803细胞迁移和侵袭数量显著升高(P<0.01)。IL-6刺激MGC-803细胞经过Hyp处理后IL-6水平显著低于IL-6组(P<0.01)。Hyp可显著抑制IL-6介导的STAT3蛋白的磷酸化。结论:Hyp能够抑制MGC-803胃癌细胞的侵袭和迁移,机制与其调控IL-6/STAT3信号通路有关。

金丝桃苷对高脂饮食引起的肥胖伴胰岛素抵抗小鼠的保护作用

目的研究金丝桃苷对高脂饮食引起的肥胖伴胰岛素抵抗小鼠的代谢保护作用。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、高脂组及金丝桃苷组,对照组小鼠给予普通饲料,高脂组及金丝桃苷组给予高脂饲料,喂养14周后建模成功(n=10)。金丝桃苷组灌胃给予金丝桃苷,对照组给予溶媒,灌胃9周后收集血清,检测生化指标及细胞因子,qRT-PCR法检测肝脏内糖脂代谢相关基因,并观察肝脏形态。结果给予金丝桃苷后,金丝桃苷组小鼠的体重和空腹血糖较高脂组明显降低(P<0.05),且葡萄糖耐受能力显著增强(P<0.05)。金丝桃苷组小鼠的血清TC、TG、LDL及HDL水平显著低于高脂组(P<0.05),肝脏内脂质沉积也较高脂组减少,而脂联素和瘦素水平均明显高于高脂组(P<0.05)。与高脂组相比,金丝桃苷组小鼠SREBP1c、ACC、FAS基因表达降低,而AMPK基因表达增加(P<0.05)。结论金丝桃苷可降低高脂饮食小鼠的体重和血糖,改善胰岛素抵抗,抑制脂质合成,这些作用可能与AMPK及下游信号通路有关。

金丝桃苷纳米结构脂质载体制备及其体内药动学研究

目的制备金丝桃苷纳米结构脂质载体,并考察其体内药动学。方法制备纳米结构脂质载体。以固态脂质用量、液态脂质用量、表面活性剂(泊洛沙姆188)浓度为影响因素,包封率、载药量、粒径为评价指标,Box-Behnken响应面法优化处方,测定冻干粉体外释药。12只大鼠随机分为2组,分别灌胃给予金丝桃苷及其纳米结构脂质载体的05%CMC-Na混悬液(40 mg/kg),于05、1、2、3、4、45、5、6、8、10、12 h采血,HPLC法测定金丝桃苷血药浓度,计算主要药动学参数。结果最佳处方为固态脂质用量1015 mg,液态脂质用量270 mg,表面活性剂浓度11%,包封率为8992%,载药量为337%,粒径为16256 nm,Zeta电位为-3428 mV。纳米结构脂质载体48 h内累积释放度为7177%。与原料药比较,纳米结构脂质载体tmax、t1/2延长(P<001),Cmax、AUC0~t、AUC0~∞升高(P<001),相对生物利用度增加至319倍。结论纳米结构脂质载体可改善金丝桃苷体外释药、体内吸收。

金丝桃苷对急性心肌梗死小鼠心功能及Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的:探究金丝桃苷对急性心肌梗死(AMI)小鼠心功能及核因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响。方法:将60只C57BL/6小鼠随机分成对照组、AMI组及金丝桃苷低、中、高剂量组,每组12只。除对照组外,其余各组小鼠均建立AMI模型,并给予相应剂量(金丝桃苷50 mg/kg、100 mg/kg和200 mg/kg)药物处理。小型动物超声系统评估各组小鼠心功能;试剂盒检测血清氧化应激指标;苏木精-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病理变化;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织中Nrf2/HO-1通路蛋白表达水平。结果:对照组小鼠心肌组织结构正常;AMI组小鼠心肌组织呈明显坏死,并有大量炎性细胞浸润;与AMI组比较,金丝桃苷各剂量组小鼠心肌组织表现出局部坏死,炎性浸润明显减少。与对照组比较,AMI组小鼠左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、丙二醛(MDA)、心肌细胞凋亡指数明显升高(P<0.05),左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)、超氧化物歧化酶(SOD)及Nrf2、HO-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与AMI组比较,金丝桃苷各剂量组LVESD和LVEDD、MDA、心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05),LVFS和LVEF、SOD及Nrf2、HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:金丝桃苷可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路,抑制心肌细胞凋亡和氧化应激反应,改善AMI小鼠心功能。

金丝桃苷激活Sirt1/AMPK自噬通路改善糖尿病骨质疏松大鼠骨代谢和骨结构的机制研究

目的:探讨金丝桃苷(HYP)对2型糖尿病性骨质疏松症(T2DOP)大鼠骨质疏松的影响及机制。方法:雌性SD大鼠采用高糖、高脂饮食联合低剂量(30 mg/kg)链脲佐菌素和双侧卵巢切除术建立T2DOP模型,建模后分为模型组(T2DOP组)、低剂量(50 mg/kg)HYP(L-HYP)组、高剂量(100 mg/kg)HYP(H-HYP)组和HYP+Sirt1抑制剂EX-527组(100 mg/kg HYP+1 mg/kg EX-527),每组12只;另取12只大鼠为正常对照(NC)组。给予相应的药物干预3个月后,检测大鼠体重、空腹血糖(FBG)、血清脂质[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]及骨代谢标志物[抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)、I型前胶原氨基端原肽(PINP)、骨钙素(OCN)和I型胶原交联羧基末端肽(CTX-I)]水平;评估骨生物力学特性和骨微结构;苏木精-伊红染色检测骨组织形态学变化;免疫组织化学染色检测骨组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)和beclin-1的表达;RT-qPCR和Western blot分析LC3、beclin-1、p62和沉默信息调节因子1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路相关分子的mRNA和蛋白表达。结果:与NC组相比,T2DOP组大鼠的体重、血清PINP和OCN水平、最大载荷和弹性模量、骨密度(BMD)、骨连接密度(Conn.D)、骨小梁数(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、LC3 mRNA表达水平、beclin-1 mRNA表达水平、Sirt1mRNA表达水平、AMPK mRNA表达水平、LC3蛋白表达水平、beclin-1蛋白表达水平、Sirt1蛋白表达水平、LC3-II/LC3-I比值和p-AMPK/AMPK比值显著降低,FBG、TC、TG、LDL-C、TRACP-5b、CTX-I、骨小梁间隔(Tb.Sp)、p62mRNA表达水平、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达水平和p-mTOR/mTOR比值显著升高(P<0.05);与T2DOP组相比,L-HYP组和H-HYP组大鼠体重、血清PINP和OCN水平、最大载荷和弹性模量、BMD、Conn.D、Tb.N、Tb.Th、LC3 mRNA表达水平、beclin-1 mRNA表达水平、Sirt1 mRNA表达水平、AMPK mRNA表达水平、LC3蛋白表达水平、beclin-1蛋白表达水平、Sirt1蛋白表达水平、LC3-II/LC3-I比值和p-AMPK/AMPK比值显著升高,FBG、TC、TG、LDL-C、TRACP-5b、CTX-I、Tb.Sp、p62 mRNA表达水平、mTOR mRNA表达水平和p-mTOR/mTOR比值显著降低(P<0.05),且H-HYP组优于L-HYP组(P<0.05);EX-527可消除HYP对自噬的诱导作用,并减弱HYP对T2DOP大鼠骨代谢和骨微结构的改善作用。结论:HYP可缓解T2DOP大鼠的血脂和血糖失调,进而改善骨代谢和骨微结构,其作用机制可能与激活Sirt1/AMPK信号通路,促进自噬有关。

金丝桃苷调节非酒精性脂肪性肝病大鼠脂质代谢的作用机制研究

目的探讨金丝桃苷对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠脂质代谢的影响及其作用机制。方法Wistar大鼠高脂饮食喂养6周,造模成功后随机分为模型对照组(n=10)、金丝桃苷低剂量组(50 mg·kg^(-1),n=10)和金丝桃苷高剂量组(100 mg·kg^(-1),n=10);另设空白对照组予正常饲料喂养(n=10)。各组均灌胃给药,每日1次。每周测量大鼠的体质量;干预6周后,检测大鼠肝功能和脂质代谢指标,苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠肝组织的病理形态改变,Western blot法检测大鼠肝组织脂质代谢相关蛋白的表达水平。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠肝脏有明显的脂肪变性。与模型对照组比较,金丝桃苷高剂量组大鼠肝内脂滴空泡、肝组织脂肪变性有明显改善,肝组织中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平显著降低(P<0.05),脂肪合成相关蛋白胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合酶(FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)表达量显著下调(P<0.05),脂肪分解相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)表达量明显增加(P<0.05),且磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α(p-AMPKα)蛋白表达量升高(P<0.05),差异均有统计学意义。结论金丝桃苷可能通过调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路抑制肝脏脂质合成,促进脂质分解,说明金丝桃苷可能是治疗NAFLD的潜在药物。

金丝桃苷通过AMPK/mTOR/ULK1信号通路对肾病综合征大鼠自噬反应的影响

目的探究金丝桃苷(Hyp)对肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)大鼠肾自噬及AMPK/mTOR/ULK1通路的影响。方法32只6周龄SD大鼠分为正常组(N组)、肾病综合征组(NS组)、金丝桃苷组(Hyp组,60 mg/kg Hyp)、金丝桃苷+AMPK抑制剂组(Hyp+CC组,60 mg/kg Hyp+0.2 mg/kg CC),每组8只。除N组外,其余各组大鼠采用一次性尾静脉注射阿霉素(6.5 mg/kg)建立NS模型,模型成功率为75.0%。Hyp组大鼠灌胃给予60 mg/kg的Hyp,Hyp+CC组给予60 mg/kg的Hyp灌胃和0.2 mg/kg CC腹腔注射,N组和NS组给予等量溶剂,每天1次,连续14 d。给药结束后,全自动分析仪检测24 h尿液总蛋白(UTP)、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)和白蛋白(ALB)水平;HE染色观察肾组织病理形态;透射电子显微镜(TEM)观察肾组织超微结构变化;Western blot检测肾中自噬、足细胞及AMPK/mTOR/ULK1通路蛋白表达;免疫荧光染色观察自噬体和足细胞的定位。结果相比于N组,NS组肾小球体积变大、肾小管萎缩或部分消失、基底膜增厚;UTP、BUN、Scr、基底膜厚度、足突宽度及p-AMPK/AMPK比值显著增加(P<0.05),ALB、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg5、Atg7、NPHS2蛋白水平、NPHS2、Beclin-1相对荧光强度及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1比值显著降低(P<0.05)。相比于NS组,Hyp治疗可改善肾小球形态,降低UTP、BUN、Scr、基底膜厚度、足突宽度及p-AMPK/AMPK比值(P<0.05),增加ALB、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg5、Atg7、NPHS2蛋白水平、NPHS2、Beclin-1相对荧光强度及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1比值(P<0.05)。相比于Hyp组,Hyp+CC组肾小球体积变大、肾小管萎缩或部分消失、基底膜增厚;UTP、BUN、Scr、基底膜厚度、足突宽度及p-AMPK/AMPK比值显著增加(P<0.05),ALB、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、Atg5、Atg7、NPHS2蛋白水平、NPHS2、Beclin-1相对荧光强度及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1比值显著降低(P<0.05)。结论Hyp可能通过激活AMPK/mTOR/ULK1通路促进肾细胞自噬活性,减轻NS大鼠的足细胞损伤等肾病变。

金丝桃苷抑制鼻咽癌细胞生物学行为的分子机制研究

目的 探讨金丝桃苷对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响和机制。方法 采用10、20及40 mg/L金丝桃苷的培养液孵育SUNE1细胞,依次记为低、中、高剂量组;将长链非编码RNA(lncRNA)配对盒基因8反义RNA 1(PAX8-AS1)过表达或敲低质粒、miR-494-3p模拟物及其阴性对照分别转染至40 mg/L金丝桃苷处理的SUNE1细胞,采用CCK-8实验、平板克隆实验、Transwell实验检测SUNE1细胞活力、克隆形成以及迁移和侵袭。蛋白质印记法分析基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p表达。双荧光素酶报告实验分析lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p靶向关系。结果低、中、高剂量金丝桃苷降低SUNE1细胞活力、迁移数和侵袭数,下调MMP-2蛋白、MMP-9蛋白以及miR-494-3p表达水平,上调lncRNA PAX8-AS1表达水平(P<0.05)。lncRNA PAX8-AS1靶向负调控miR-494-3p表达。过表达lncRNA PAX8-AS1增强40 mg/L金丝桃苷对SUNE1细胞活力、迁移、侵袭以及MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。敲低lncRNA PAX8-AS1和过表达miR-494-3p均减弱40 mg/L金丝桃苷对SUNE1细胞活力、迁移、侵袭以及MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论 金丝桃苷可能通过上调lncRNA PAX8-AS1/miR-494-3p轴来抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭。

金丝桃苷对小鼠酒精性脂肪肝炎的保护作用

为探究低、中、高剂量金丝桃苷对酒精饮食诱发的小鼠酒精性肝病的影响,该文建立短期酒精性脂肪肝炎模型(Gao-Binge模型),测定血清转氨酶、甘油三酯(triglyceride,TG)含量,以及肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,并对肝脏进行苏木精-伊红染色(hematoxylin and eosin staining,H&E)和油红染色观察肝脏组织病理学变化,免疫组化染色检测肝脏中性粒细胞浸润情况,最后利用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)技术分析肝脏炎性细胞因子和趋化因子的表达。结果显示,酒精液体饲料喂养后,模型组小鼠出现脂肪性肝炎,而金丝桃苷能够降低血清转氨酶和TG含量,减少肝组织油红染色区域,降低肝脏MDA含量,提升SOD活性。此外,金丝桃苷抑制酒精饮食诱发的肝脏白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)表达,减少肝组织中性粒细胞浸润及其趋化因子表达,表明金丝桃苷可以通过降低肝脏脂质过氧化水平,抑制炎症反应来改善小鼠酒精性脂肪肝炎。

制备金丝桃苷纳米粒修复子宫内膜损伤

背景:金丝桃苷具有抗炎、抗氧化等多种药理作用,但将其应用于修复子宫内膜损伤的研究并不多见。目的:制备金丝桃苷纳米粒,利用泊洛沙姆407搭载金丝桃苷纳米粒,研究其对大鼠子宫内膜损伤的修复作用。方法:分别制备金丝桃苷纳米粒、泊洛沙姆407水凝胶与泊洛沙姆407水凝胶搭载金丝桃苷纳米粒。取24只雌性SD大鼠,随机分4组,每组6只:模型组、单纯水凝胶组、载药水凝胶组以搔刮法建立子宫内膜损伤模型,分别向子宫内注射PBS、泊洛沙姆407水凝胶、泊洛沙姆407水凝胶搭载金丝桃苷纳米粒,空白对照组仅行开腹不进行造模。造模7 d后取材,苏木精-伊红染色观察子宫内膜形态学变化,采用ELISA法检测子宫内膜组织中白细胞介素1β、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α水平,免疫荧光染色检测宫内膜组织中血管内皮生长因子、角蛋白、波形蛋白的表达。结果与结论:①苏木精-伊红染色显示,与空白对照组比较,模型组大鼠子宫内膜层变薄,内膜结构不完整,血管及腺体及明显减少稀疏;与模型组比较,单纯水凝胶组大鼠子宫内膜增厚、内膜结构较完整,载药水凝胶组大鼠子宫内膜增厚、内膜结构较完整、腺体较丰富;②与空白对照组比较,模型组的白细胞介素1β、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α水平均升高(P<0.01);与模型组比较,单纯水凝胶组、载药水凝胶组的白细胞介素1β、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α水平均下降(P<0.01);③免疫荧光染色显示,与空白对照组比较,模型组的血管内皮生长因子、角蛋白、波形蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,载药水凝胶组血管内皮生长因子、角蛋白、波形蛋白表达均升高(P<0.01),单纯水凝胶组血管内皮生长因子表达升高(P<0.01);④结果表明,水凝胶搭载金丝桃苷纳米粒对大鼠子宫内膜损伤有修复作用。

金丝桃苷改善吡咯里西啶生物碱诱导小鼠急性肝损伤的作用及机制研究

目的明确金丝桃苷对吡咯里西啶生物碱(PAs)诱导小鼠急性肝损伤的作用及机制。方法40只C57BL/6雄性小鼠随机分成5组,即空白对照组、模型组以及金丝桃苷低、中、高剂量组,每组8只。除空白对照组外,其余小鼠采用PAs建立急性肝损伤模型,造模6 h、30 h后金丝桃苷低、中、高剂量组小鼠分别灌胃给予20、40、80 mg/kg金丝桃苷各1次,造模48 h后,收集血清、肝脏、回肠、粪便。检测小鼠血清生化指标丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和总胆汁酸(TBA)水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠肝脏组织病理学形态变化;测定小鼠血清、肝脏、回肠、粪便中胆汁酸含量;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法及Western blot法检测小鼠肝脏组织中法尼酯X受体(Fxr)、小异源二聚体伴侣(Shp)、胆盐输出泵(Bsep)、胆固醇-7α-羟化酶(Cyp7a1)、甾醇-12α-羟化酶(Cyp8b1)mRNA与蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,模型组血清生化指标ALT、AST、TBA水平显著升高(P<0.05),肝细胞大面积坏死,同时伴有肝窦淤血;与模型组比较,金丝桃苷各剂量组血清生化指标ALT、AST、TBA水平显著降低(P<0.05),金丝桃苷中、高剂量组未见明显肝细胞坏死及肝窦淤血。与空白对照组比较,模型组胆汁酸代谢异常,小鼠肝脏Fxr、Shp、Bsep、Cyp7a1、Cyp8b1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,金丝桃苷中剂量组胆汁酸稳态失衡有所改善,小鼠肝脏Fxr、Shp、Bsep、Cyp7a1、Cyp8b1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论金丝桃苷可改善PAs诱导的急性肝损伤,其机制与调控胆汁酸相关基因、维护胆汁酸稳态平衡有关。

金丝桃苷通过miR-155/c-MYB通路抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及迁移作用

目的探讨金丝桃苷通过miR-155/c-MYB通路抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及迁移的作用。方法将人神经胶质瘤细胞系U251分为U251细胞组、紫衫醇组(300μmol/mL)、金丝桃苷低剂量组(300μmol/mL)和金丝桃苷高剂量组(600μmol/mL),每组设置6个平行孔,继续培养72 h。细胞培养结束后,采用CCK-8法测定细胞增殖水平,Transwell法评估细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法及蛋白质印迹法测定miR-155、c-MYB mRNA和蛋白表达水平。结果与U251细胞组比较,紫衫醇组、金丝桃苷低、高剂量组吸光度(A)值、存活率、克隆形成数目、穿膜数目、miR-155、c-MYB mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与紫衫醇组比较,金丝桃苷低剂量组A值、存活率、克隆形成数目、穿膜数目、miR-155、c-MYB mRNA蛋白表达水平升高,凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05),而金丝桃苷高剂量组A值、存活率、克隆形成数目、穿膜数目、miR-155、c-MYB mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与金丝桃苷低剂量组比较,金丝桃苷高剂量组A值、存活率、克隆形成数目、穿膜数目、miR-155、c-MYB mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论金丝桃苷可降低胶质瘤U251细胞的活力、增殖和侵袭能力,并促进其凋亡,相关机制可能与金丝桃苷抑制miR-155、c-MYB表达进而抑制miR-155/c-MYB通路激活有关。

金丝桃苷抑制Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子-κB 信号通路减轻牙周炎大鼠牙周组织损伤实验研究

目的:探究金丝桃苷调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对牙周炎大鼠牙周组织损伤的影响。方法:构建牙周炎大鼠模型,建模成功大鼠随机分为模型组、金丝桃苷(30 mg/kg)组、金丝桃苷(30 mg/kg)+TLR4激活剂(脂多糖,0.4 mg/kg)组,每组15只,另取15只健康大鼠作为对照组,建模结束后,各组大鼠按对应方式给药,1次/d,连续4周。HE染色及抗酒石酸酸性磷酸酶染色分别观察各组大鼠牙周组织病理变化及破骨细胞数量;ELISA法检测各组大鼠血清骨保护素(OPG)、NF-κB受体活化因子配体(RANKL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;荧光定量PCR法检测各组大鼠牙周组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平;蛋白印迹法检测各组大鼠牙周组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。结果:对照组大鼠牙周组织结构正常;与对照组相比,模型组大鼠牙周组织炎性细胞浸润明显,伴随骨吸收陷窝数量增多,牙周组织破骨细胞数量、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、血清RANKL、TNF-α、IL-6水平显著升高(均P<0.05),血清OPG水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,金丝桃苷组大鼠牙龈上皮较完整,炎性细胞浸润程度较轻,骨吸收陷窝减少,牙周组织破骨细胞数量、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、血清RANKL、TNF-α、IL-6水平显著降低(均P<0.05),血清OPG水平显著升高(P<0.05);与金丝桃苷组相比,金丝桃苷+TLR4激活剂组大鼠牙周组织炎性细胞浸润程度加深,骨吸收陷窝增多,牙周组织破骨细胞数量、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、血清RANKL、TNF-α、IL-6水平显著升高(均P<0.05),血清OPG水平显著降低(P<0.05)。结论:金丝桃苷可缓解牙周炎大鼠牙周组织损伤,抑制大鼠炎性反应,其机制与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

金丝桃苷通过AMPK/SIRT1通路介导的自噬途径对糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用

目的基于AMPK/SIRT1通路介导的自噬途径探讨金丝桃苷改善糖尿病小鼠胰岛素抵抗的作用机制。方法40只小鼠分为对照组,模型组,金丝桃苷低、高剂量组,自噬激活组,每组8只,采用高脂饲料喂养及STZ腹腔注射的方式诱导建立糖尿病小鼠模型。给药28 d后检测小鼠体质量、FBG、FINS,计算HOMA-IR,HE染色和免疫组化染色检测小鼠肝组织病理变化和Beclin 1阳性细胞比例,Western blot法检测肝组织p-AMPK/AMPK、SIRT1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62、Bax、caspase-6蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠体质量及肝组织p62蛋白表达降低(P<0.05),FBG、FINS水平、HOMA-IR及肝组织Beclin 1阳性细胞比例、p-AMPK/AMPK、SIRT1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax、caspase-6蛋白表达升高(P<0.05),肝组织中细胞形态不规则、结构不完整,伴有空泡、水肿、坏死现象;与模型组比较,金丝桃苷各剂量组小鼠体质量及肝组织p62蛋白表达升高(P<0.05),FBG、FINS水平、HOMA-IR及肝组织Beclin 1阳性细胞比例、p-AMPK/AMPK、SIRT1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax、caspase-6蛋白表达降低(P<0.05),肝组织病理损伤有所改善;与金丝桃苷高剂量组比较,自噬激活组小鼠体质量及肝组织p62蛋白表达降低(P<0.05),FBG、FINS水平、HOMA-IR及肝组织Beclin 1阳性细胞比例、p-AMPK/AMPK、SIRT1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax、caspase-6蛋白表达升高(P<0.05),肝组织病理损伤加重。结论金丝桃苷可能通过抑制AMPK/SIRT1通路介导的自噬途径改善糖尿病小鼠胰岛素抵抗状态。

高效液相色谱法测定臻源胶囊中金丝桃苷和五味子醇甲含量

目的 提升臻源胶囊质量标准,完善其质量控制水平。方法 利用高效液相色谱法(HPLC)测定臻源胶囊中金丝桃苷和五味子醇甲含量。结果 臻源胶囊中金丝桃苷和五味子醇甲平均含量分别为0.27 mg/g和0.34 mg/g,平均加样回收率标准偏差值(RSD)分别为1.63%和1.69%,方法学考察符合规定。结论 在臻源胶囊现有质量标准的基础上,增加了金丝桃苷和五味子醇甲作为含量测定指标,方法简便可行,结果准确,重现性好,为更好控制臻源胶囊产品质量以及探究功效物质基础提供科学依据。

HPLC法同时测定湘莲中芦丁、金丝桃苷及槲皮素含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定湘莲中芦丁、金丝桃苷及槲皮素的含量。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇—0.6%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长255 nm。结果:20批湘莲样品中芦丁、金丝桃苷及槲皮素含量分别为1.32~2.06,1.36~2.43,1.41~3.26 mg/kg;芦丁、金丝桃苷和槲皮素检测质量浓度线性范围均为5~200μg/mL(R^(2)=0.9999),在相应的线性范围内,3种黄酮类物质线性关系好,灵敏度高,精密度、稳定性、重复性及回收率试验相对标准偏差(RSD)均小于4.0%;芦丁、金丝桃苷及槲皮素的平均加标回收率分别为96.6%,96.9%,97.4%。结论:该方法操作便捷且结果准确,可用于湘莲中黄酮类成分的含量测定和质量评价。