Ⅰ～Ⅲ期胃癌中VEGF、 HIF-1α和TGF-β1表达的临床意义及其预后价值

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和转移生长因子-β1(TGF-β1)在Ⅰ～Ⅲ期胃癌中的表达及其临床意义和预后价值。方法收集2004年1月至2006年12月在解放军总医院接受根治性手术且TNM分期为Ⅰ～Ⅲ期的胃癌病例。采用组织芯片及免疫组化法检测VEGF、HIF-1α和TGF-β1的表达,并分析其表达与临床病理特征及预后的关系。结果全组343例患者中,VEGF、HIF-1α和TGF-β1的阳性表达率分别为49.3%、30.9%和39.1%,且三者表达两两相关。全组患者的中位随访时间为70.0个月,至随访截止时间,出现复发或转移者232例,死亡218例,中位无疾病生存期(DFS)为23.0个月,中位生存期(OS)为31.1个月。单因素分析显示,年龄、是否全胃切除、是否含印戒细胞癌、Lauren分型、脉管癌栓、肿瘤直径、TNM分期、辅助化疗、VEGF及HIF-1α表达与DFS和OS有关(P<0.05);VEGF、HIF-1α和TGF-β1三者共阳性组的中位DFS(8.6个月)和中位OS(17.7个月)均小于双阳性、单阳性及三者共阴性组(P<0.05)。Cox多因素分析显示,是否全胃切除、是否辅助化疗、TNM分期、VEGF及HIF-1α表达均为影响DFS和OS的独立预后因素。结论对于接受根治性手术治疗的Ⅰ～Ⅲ期胃癌患者,VEGF和HIF-1α阳性表达可能是影响胃癌患者的不良预后因素。

乳腺癌超声光散射断层成像与缺氧诱导因子-1α的相关性

目的探讨乳腺癌超声光散射断层成像(US-DOT)与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的相关性。方法对2007年10月至2010年2月在北京协和医院行手术切除、经病理证实、术前行US-DOT的69例原发性乳腺癌组织切片行HIF-1α、CD34免疫组织化学染色,分析HIF-1α阳性组和阴性组微血管密度(MVD)与US-DOT总血红蛋白浓度(THC)的差异。结果 69例中,HIF-1α阳性病例12例(17.4%),平均THC(274.763±77.661)μmol/L,平均MVD(33.8±10.8)个/0.2 mm2;HIF-1α阴性病例57例(82.6%),平均THC(228.059±65.760)μmol/L,平均MVD(28.4±7.4)个/0.2 mm2;HIF-1α阳性组的MVD(t=2.049,P=0.04)和THC(t=2.167,P=0.034)均显著高于HIF-1α阴性组。结论 HIF-1α可以促进肿瘤血管生成,使肿瘤内血供增加,THC增加。作为反映肿瘤血供的指标,THC可间接反映肿瘤的血管生成活性。

人参皂苷Rg3对人乳腺癌MCF-7细胞血管生成拟态的影响

目的探讨人参皂苷Rg3对人乳腺癌MCF-7细胞体外血管生成拟态的抑制作用及其机制。方法取MCF-7对数生长期细胞分为实验组和对照组,实验组加入含有终浓度为10、20、50、100、150及300 mg/L的Rg3完全培养基;对照组加入含DMSO完全培养基。CCK-8法分析Rg3对MCF-7细胞增殖的影响,分析实验组各浓度下的抑制率和Rg3半数抑制浓度(IC50)并确定实验浓度。体外管道形成抑制实验观察Rg3对MCF-7细胞血管生成拟态的影响。实时荧光定量PCR法检测Rg3对细胞血管内皮生长因子-A(VEGF-A)和基质金属蛋白酶(MMP)9m RNA的表达水平的影响。蛋白免疫印迹法检测Rg3对细胞低氧诱导因子(HIF)-1α、VEGF-A和MMP9蛋白表达的影响。双抗夹心酶联免疫法测定Rg3对细胞培养上清液中VEGF-A、MMP9蛋白表达的影响。结果人参皂苷Rg3可以有效抑制MCF-7细胞增殖,其平均IC50为(115.34±8.50)mg/L;选取50、100和150 mg/L的Rg3作为实验浓度。50、100和150 mg/L组形成的管状结构数目分别为(19.0±1.0)、(15.0±1.5)、(10.0±1.7)个/视野,呈逐渐降低趋势;且均较对照组(22.0±1.8)减少(均P<0.05)。对照组、50 mg/L组、100 mg/L组及150 mg/L组细胞中的VEGF-A和MMP9的m RNA和蛋白表达水平、HIF-1α的蛋白表达水平均呈逐渐下降趋势(P<0.05)。对照组、50 mg/L组、100 mg/L组及150 mg/L组细胞培养上清液中的VEGF-A蛋白呈逐渐下降趋势(P<0.05);后3组的MMP9蛋白表达水平均呈逐渐下降趋势(P<0.05),但50 mg/L组与对照组的MMP9蛋白表达水平差异无统计学意义。结论人参皂苷Rg3可以抑制MCF-7细胞体外血管形成拟态的能力,其分子机制可能与抑制MCF-7细胞中HIF-1α、VEGF-A和MMP9的蛋白表达有关。

痰热清注射液联合氨溴索对老年COPD与哮喘-COPD重叠综合征血清低氧诱导因子-1α及肺功能水平的影响研究

目的探讨痰热清注射液联合氨溴索对老年COPD与哮喘-COPD重叠综合征血清低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及肺功能水平的影响。方法选择2015年10月~2016年10月在我院确诊的69例老年COPD与哮喘-COPD重叠综合征患者,随机分为对照组和研究组,对照组34例患者予以常规治疗,研究组35例患者在对照组基础上予痰热清注射液治疗。15 d为1个疗程。通过比较治疗前后两组患者临床症状以及相关指标的变化来探讨痰热清注射液联合氨溴索对老年COPD与哮喘-COPD重叠综合征血清低氧诱导因子-1α及肺功能水平的影响。结果治疗后,两组血清HIF-1α以及血清炎性因子水平均明显降低(P<0.05),研究组的HIF-1α、IL-10、TNF-α、IL-8水平低于对照组(P<0.01);治疗后两组患者的FEV1、FVC与FEV/FVC水平提高(P<0.01),且研究组的肺功能指标均比对照组高(P<0.01);治疗后研究组患者的总有效率为94.29%,高于对照组的75.47%(P<0.05)。结论痰热清注射液联合氨溴索对老年COPD与哮喘-COPD重叠综合征血清低氧诱导因子-1α及肺功能水平有很好的调节作用,能明显改善患者的肺功能指标。

缺氧诱导因子-1α和环氧合酶-2在视网膜新生血管中的表达及意义(英文)

目的:探讨缺氧诱导因子 -1α(HIF-1α)和环氧合酶 -2(COX-2)在视网膜新生血管中的表达和意义。方法:以高浓度氧诱导 C57BL/6J 小鼠建立视网膜新生血管模型。取对照组和给氧组幼鼠眼球作荧光素血管灌注,病理切片及免疫组织化学检测,分别观察视网膜血管的改变,视网膜新生血管内皮细胞数目及 HIF - 1α、COX-2 蛋白的表达。结果:给氧组视网膜可见大量新生血管形成,新生血管内皮细胞核数为(23.38±1.07)个,与对照组相比差异有极显著性(P<0.001)。HIF-1α蛋白表达在神经节细胞层和突破视网膜内界膜的新生血管。COX-2 蛋白表达在内核层,神经节细胞层和突破视网膜内界膜的新生血管。两者表达呈显著正相关。(r=0.363,P<0.01)。结论:在视网膜新生血管形成中存在 HIF - 1α、COX-2的高表达,且两者表达密切相关。

iNOS和HIF1α在骨肉瘤中的表达及其临床病理相关性研究

目的从酶蛋白水平研究骨肉瘤组织缺氧代谢过程中iNOS、HIF1α的表达及与临床、病理特征的关系;探讨它们在肿瘤发展过程中作用的可能机制。方法筛选不含硬骨组织,未经脱钙处理的骨肉瘤标本59例,依据临床病理特征进行分组,并行术后随访。应用免疫组织化学EnVision法检测肿瘤组织中iNOS、HIF1α表达,应用χ2检验、Spearman等级相关分析等进行统计分析。结果骨肉瘤中iN-OS、HIF1α表达阳性率分别为86·44%、38·98%,对照组中分别为9·9%和0,两组比较,差异均有显著性。HIF1α的表达与骨肉瘤患者年龄有关(P<0·01),iNOS则无关(P>0·05)。HIF1α和iNOS的表达均与骨肉瘤组织学类型有关,iNOS、HIF1α在髓内高分化型和骨旁型骨肉瘤总阳性表达率分别为33·33%和0,分别低于其余各组总和阳性率91·30%和41·30%,差异有显著性(P<0·01和0·05)。HIF1α与iNOS表达正相关,两者共阳率38·98%,共阴率13·56%。iNOS阳性与阴性组中,HIF1α的阳性表达率分别为45·10%和0,差异有显著性(P<0·01)。结论iNOS与HIF1α在骨肉瘤组织中均高表达,与肿瘤的发生、发展有关,可能协同促进肿瘤的恶性进展。

细胞外HSP70/HSP70-PCs通过HIF-1α影响肝癌细胞HepG2Glut1与VEGF的表达

目的:探讨细胞外的热休克蛋白7 0及H S P70肽复合物(h e a t s h o c k p r o t e i n 70/peptide complexes,HSP70/HSP70-PCs)对肝癌细胞HepG2缺氧诱导因子1(hypoxiainduciblefactor-1,HIF-1)、葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,Glut1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及可能机制.方法:将肝癌细胞分为3组:正常对照组、细胞外HSP70/HSP70-PCs诱导实验组(终浓度2g/mL)、细胞外HSP70/HSP70-PCs+siRNA转染组.应用Real-time RT-PCR与Western blot法检测HIF-1、Glut1和VEGF的表达变化.结果:细胞外HSP70/HSP70-PCs诱导实验组HIF-1、VEGF与Glut1蛋白表达显著升高,与对照组相比有显著差异(P<0.05),表明细胞外HSP70/HSP70-PCs促进肝癌细胞的HIF-1、Glut1和VEGF表达;应用siRNA阻断HIF-1后,细胞外HSP70/HSP70-PCs对Glut1和VEGF的上调表达作用消失,与对照组相比有明显差异(P<0.05).结论:细胞外HSP70/HSP70-PCs可以上调肝癌细胞HepG2中Glut1和VEGF表达,并且这一作用是通过HIF-1来实现的.

E2F3、MCM2及HIF-1α在结直肠癌中的表达及其相关性

目的:探讨转录因子E2F3、微型染色体维持蛋白(minichromosome maintenance proteins 2,MCM2)及缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor1α,HIF-1α)在结直肠癌、结直肠腺瘤、大肠正常黏膜组织中的表达及他们与结直肠癌临床病理因素之间的关系.方法:收集2007-01/2008-12佳木斯大学附属第一医院普通外科、肿瘤外科及消化内科肠镜室行手术切除并经病理证实的结直肠癌病理标本40例.应用免疫组织化学SP方法检测E2F3、MCM2及HIF-1α在结直肠癌(40例)、结直肠腺瘤(20例)及大肠正常黏膜组织(20例)中的表达.结果:E2F3的阳性表达率在结直肠腺瘤组织与结直肠癌组织中均显著高于正常组织(30.0%vs0.0%,57.5%vs0.0%,P<0.01).MCM2的阳性表达率在结直肠腺瘤组织与结直肠癌组织中均显著高于正常组织(45.0%vs5.0%,87.5%vs5.0%,P<0.01);HIF-1α的阳性表达率在结直肠腺瘤组织与结直肠癌组织中均高于正常组织(30.0%vs5.0%,67.5%vs5.0%,P<0.05).E2F3、MCM2、HIF-1α的表达水平与结直肠癌的浸润程度、淋巴结转移、Dukes分期、组织学分级相关(均P<0.05),与患者的年龄、性别及肿瘤的大小则无相关性.在结直肠癌组织中E2F3与MCM2的表达呈正相关(r=0.440,P<0.01),与HIF-1α的表达呈正相关(r=0.375,P<0.05);HIF-1α与MCM2的表达呈正相关(r=0.383,P<0.05).结论:E2F3、MCM2及HIF-1α在结直肠癌组织中均为高表达且呈正相关,提示在结直肠癌的发展过程中,三者可能通过各自不同功能作用于肿瘤细胞,还可能通过一种或多种途径协同促进肿瘤的发展演变.检测结直肠癌组织中三者的表达,可为结直肠癌早期诊断、评价预后提供理论依据,为防癌普查及基因靶向治疗提供一种新的途径.

TGFβ1和HIF-1α在唾液腺黏液表皮样癌中的表达

目的研究转化生长因子B1（transforminggrowthfactor-1α，TGFpl）、缺氧诱导因子-1α（hypoxiainduciblefactor-1α，HIF-1α）在唾液腺黏液表皮样癌（mucoepidermoidcarcinoma，MEC）中的表达和相关性。方法应用免疫组织化学SP法检测25例正常唾液腺组织、36例唾液腺黏液表皮样癌（20例高分化、16例低分化）中TGFβ1和HIF-1α的表达。结果TGFβ1和HIF-1α的阳性表达率在正常唾液腺组织、高分化MEC及低分化MEC中的表达均依次增强，组间差异均有统计学意义，P〈0．05；MEC中TGFβ1随着HIF-1α表达的增强而升高，P〈0．05。结论TGFβ1和HIF-1α的高表达在唾液腺黏液表皮样癌的分化及增殖过程中可能起重要作用。

低氧诱导因子-1和脑红蛋白在中老年阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者执行功能障碍评估中的应用

目的观察老年阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者低氧诱导因子-1(HIF-1)和脑红蛋白(Ngb)水平变化,分析其在老年OSAHS患者执行功能障碍评估中的意义。方法以2013年12月至2014年12月唐山市丰润区人民医院确诊的OSAHS患者121例为观察对象,选取121例同期健康体检的非OSAHS人群为对照组。采用执行缺陷综合征的行为评价标准(BADs)评测执行功能;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清HIF-1及Ngb水平。结果 OSAHS组BADs各项评分低于对照组,而血清HIF-1和Ngb水平高于对照组(P<0.05);OSAHS组血清HIF-1和Ngb水平与睡眠呼吸暂停低通气指数(AHI)和微觉醒指数(M-AI)呈正相关,与LSa O2和MSa O2呈负相关(P均<0.01);血清HIF-1和Ngb水平分别与BADs总分呈负相关(P均<0.05);血清HIF-1水平预测OSAHS患者执行功能障碍的ROC曲线下面积为0.815(P<0.05),灵敏度为0.837,特异度为0.888;Ngb水平预测OSAHS患者执行功能障碍的ROC曲线下面积为0.785(P<0.05),灵敏度为0.898,特异度为0.606。结论 OSAHS患者血清HIF-1和Ngb水平可用于评估执行功能障碍。

二氮嗪预处理对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞HIF-1α mRNA表达及增殖的影响

目的:观察二氮嗪(DZ)预处理对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)增殖和HIF-1 α mRNA表达的影响。方法:培养SD大鼠MMECs,随机分为4组(n=24):正常对照组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、二氮嗪组(DZ组)、DZ+Mito KATP特异性阻断剂5-羟葵酸(5-HD)预处理组(DZ+5-HD组)。DZ组加入100μmol/L DZ,DZ+5-HD组加入100μmol/L DZ前2 h加入100μmol/L 5-HD预处理2 h,然后和缺氧复氧组同样进行缺氧2 h复氧2 h。Hoechst染色观察凋亡细胞形态,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测HIF-1α mRNA转录水平。结果与N组比较,细胞增殖率H/R组显著降低(P<0.01),HIF-1α显著升高(P<0.01);与H/R组比较,DZ组细胞增殖率显著升高(P<0.05),HIF-1α显著升高(P<0.01);DZ+5-HD组与H/R组比较差异无统计学意义。结论:DZ可上调HIF-1αmRNA的表达,促使细胞增殖,从而实现促进心肌微血管的新生。

电针干预后透镜诱导型近视豚鼠巩膜形态改变及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和脯氨酰羟化酶2(PHD-2)表达的变化

目的探讨电针干预后透镜诱导型近视(LIM)豚鼠巩膜形态变化及巩膜中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和脯氨酰羟化酶2(PHD-2)表达变化。方法将90只2周龄豚鼠随机分为正常对照(NC)组、LIM组和电针+透镜诱导型近视(LIM+EA)组,每组30只。NC组正常饲养,不干预;LIM组和LIM+EA组豚鼠右眼配戴-6.0 D透镜片,建立近视模型;LIM+EA组戴镜同时给予针刺合谷穴和太阳穴30 min。造模后2周和4周测量各组豚鼠的屈光度和眼轴长度,同时通过实时荧光定量PCR(q-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组豚鼠巩膜中HIF-1α和PHD-2的mRNA相对表达及蛋白含量。另外,于造模后4周利用电镜观察各组豚鼠巩膜超微结构变化。结果造模后2周和4周,与NC组(2.20±0.48)D、(1.63±0.41)D;(8.22±0.03)mm、(8.40±0.04)mm相比,LIM组(-4.23±0.43)D、(-5.88±0.49)D;(8.36±0.05)mm、(8.57±0.06)mm和LIM+EA组(-3.63±0.49)D、(-2.55±0.48)D;(8.32±0.03)mm、(8.51±0.03)mm豚鼠右眼屈光度均增加,眼轴均延长(均为P<0.05);与LIM组相比,LIM+EA组豚鼠右眼屈光度均减小,眼轴延长均减慢(均为P<0.05)。电镜观察结果显示,与NC组(82.94±26.03)nm相比,LIM组(48.90±23.38)nm和LIM+EA组(62.83±21.72)nm豚鼠巩膜胶原纤维直径变小(均为P<0.05);与LIM组相比,LIM+EA组巩膜胶原纤维直径变大(P<0.05)。q-PCR及ELISA检测结果表明,造模后2周和4周,与NC组相比,LIM组后极部巩膜HIF-1αmRNA和蛋白表达水平均增加(均为P<0.05),PHD-2 mRNA和蛋白表达水平均下降(均为P<0.05);与LIM组相比,LIM+EA组巩膜HIF-1αmRNA和蛋白表达水平均显著下降(均为P<0.05),PHD-2 mRNA和蛋白表达水平均上升(均为P<0.05)。结论电针干预近视豚鼠可影响巩膜胶原纤维直径及HIF-1α和PHD-2的表达水平,进而延缓近视的发展。

超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡抑制乏氧巨噬细胞HIF-1α表达

目的探讨超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡对乏氧巨噬细胞HIF-1α表达的影响。方法 CoCl_2化学诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7乏氧模型,将乏氧巨噬细胞分成6组(n=13):对照组、紫杉醇组(6×10^(-6)mol/L)、超声组(0.5 W/cm^2,30 s)、携氧微泡组(25μL)、携氧载紫杉醇脂质微泡组(25μL)和超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡组(25μL;0.5 W/cm^2,30 s)。MTT测定巨噬细胞活性、RT-PCR和Western blot检测各组干预后HIF-1α的表达,ELISA试剂盒测定干预后上清液TNF-α和IL-6的含量。结果 CoCl_2100μmol/L作用12 h细胞活性抑制率低于8%,可成功诱导乏氧状态;超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡抑制乏氧巨噬细胞HIF-1α基因和蛋白的表达并抑制TNF-α和IL-6的分泌(P<0.05)。结论超声介导携氧载紫杉醇脂质微泡能抑制乏氧巨噬细胞HIF-1α表达,从而改善其乏氧状态。

间歇性低氧在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的保护机制

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子2(VEGF-2)在间歇性低氧对大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的表达及保护机制。方法选取72只大鼠随机分为假手术组(n=18)、I/R+间歇性低氧(I/R+IH)组(n=18)、I/R组(n=18)、I/R+IH+磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂组(I/R+IH+PI3K抑制剂组)(n=18),将大鼠暴露于低氧循环制作间隙性低氧动物模型,采用球囊结扎冠脉方法制作心肌缺血/再灌注动物模型。通过试剂盒检测心肌组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,通过超声心动图监测大鼠舒张末期容积、收缩末期容积、左心室射血分数,通过Western blot法检测蛋白激酶B(AKt)、HIF-1α、VEGF-2表达。结果与假手术组比较,I/R组的MDA、CK-MB高于假手术组,GSH低于假手术组,左心室舒张末期容积及收缩期末期容积高于假手术组,左心室射血分数低于假手术组,AKt蛋白及HIF-1α、VEGF-2表达低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。I/R+IH组反映氧化损伤的MDA、CK-MB低于I/R组,GSH高于I/R组;左心室舒张末期容积及收缩期末期容积低于I/R组,左心室射血分数高于I/R组,AKt蛋白及HIF-1α、VEGF-2表达高于I/R组,差异有统计学意义(P<0.05)。I/R+IH+PI3K抑制剂组的MDA、CK-MB高于I/R+IH组,GSH低于I/R+IH组;左心室舒张末期容积及收缩期末期容积高于I/R+IH组,左心室射血分数低于I/R+IH组,AKt、HIF-1α、VEGF-2蛋白表达低于I/R+IH组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 IH在心肌缺血损伤中具有心脏保护作用,其保护机制与激活磷脂酰肌醇酯3-激酶信号通路及促进HIF-1α、VEGF-2表达有关。

miR-186-5p靶向HIF-1α对人骨肉瘤细胞存活、侵袭和迁移的影响

目的:探讨miR-186-5p与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:检测miR-186在骨肉瘤组织和细胞系中的表达水平。将Agomir-186-NC、Agomir-186转染至U2OS细胞,将细胞随机分为3组:Control(对照)组、Agomir-186-NC组和Agomir-186组。检测过表达miR-186对U2OS细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响;确认miR-186-5p与HIF-1α的靶向关系。将Agomir-186和shHIF-1α单独或共转染至U2OS细胞,将细胞随机分为4组:Control(对照)组、Agomir-186组、shHIF-1α组和Agomir-186+shHIF-1α组,检测miR-186靶向HIF-1α对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及相关蛋白表达的影响。结果:miR-186在人骨肉瘤组织和细胞系中低表达(P<0.01)。与对照组相比,Agomir-186组U2OS细胞增殖倍数、侵袭细胞数量、划痕闭合率均明显降低(P<0.01),而细胞凋亡率则明显上升(P<0.01)。miR-186-5p与HIF-1α存在直接靶向作用关系。与shHIF-1α组相比,Agomir-186和sh-HIF-1α共转染组增殖倍数、侵袭细胞数目、划痕闭合率及Ki67、N-cadherin、Vimentin蛋白表达均明显降低,细胞凋亡率及Caspase-3、E-cadherin蛋白表达均明显增加(P<0.01)。结论:miR-186-5p可靶向HIF-1α,抑制人骨肉瘤细胞存活、侵袭和迁移。

硫化氢对心肺复苏后大鼠心肌缺氧诱导因子-α的影响

目的研究心肺复苏后大鼠心肌细胞缺氧诱导因子-α（hypoxia-induciblefactor-α，HIF-α）的变化及外源性硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）的干预作用。方法实验在华中科技大学同济医学院附属同济医院动物实验室进行，雄性SD大鼠45只，采用窒息法建立大鼠心搏骤停模型，随机（随机数字法）分为3组，每组15只：（1）对照组，仅行麻醉、气管插管及动静脉插管操作；（2）CPR组，进行模型制备及复苏；（3）CPR＋硫氢化钠（NaHS）组，以NaHS作为H2S供体，在CPR开始前1min经股静脉给予50μg/kg NaHS，其余操作同CPR组。观察各组血流动力学参数，留取6h心肌组织，采用RT-PCR法检测HIF-1α mRNA表达，采用MPO测定试剂盒测定各组心肌组织MPO含量，三组动物于24h处死取心肌组织行病理学检查。采用单因素方差分析，组间比较采用t检验。结果CPR组和CPR＋NaHS组的血流动力学指标差异无统计学意义（P〉0．05）。与对照组相比，CPR组和CPR＋NariS组HIF-1α基因表达均上升，CPR＋NaHS组上升更为显著（P〈0．05），与CPR组比较，CPR＋NariS组HIF-1α基因表达升高（P〈0．05）；与对照组相比，CPR组和CPR＋NariS组心肌MPO活性出现不同程度升高（P〈0．05），与CPR组比较，CPR＋NariS组心肌MPO活性下降（P〈0．05）；通过对心肌苏木精-伊红（HE）染色切片观察显示，CPR组和CPR＋NariS组出现不同程度的病理损伤，CPR＋NariS组的病理损伤轻于CPR组。结论HIF-1α mRNA在心肺复苏后大鼠心肌细胞的表达增强，硫化氢可能通过上调HIF-lα的表达，对心肺复苏后心肌起保护作用。

缺氧诱导因子-1α蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的 检测肝癌及癌旁组织中缺氧诱导因子-1 α(HIF-1 α)基因蛋白的表达及临床意义。方法 用免疫组织化学、western blot和RT—PCR技术检测35例肝细胞癌、26例肝硬化组织及15例正常肝组织中HIF-1 α蛋白和基因的表达情况,并分析其与临床病理特点之间的关系。 结果 免疫组织化学显示HIF-1α蛋白在肝硬化和肝癌组织中普遍表达,在肝硬化组织中的表达明显高于正常肝脏组织中的表达;但肝癌组织中因大片状坏死后伴大量纤维结缔组织增生的肝细胞条索中HIF-1 α蛋白的表达强度高于肝硬化组织,肝硬化组织HIF-1α蛋白的表达强度明显高于肝癌组织(54％与31％,x2=4.09,P<0.05);westernblot和RT-PCR结果与免疫组化结果相似。HIF-1α蛋白在肝癌组织中的表达强度与分化程度有关(x2=4.64,P<0.05),与有无肝内外转移有关(x2=7.15,P<0.05);但HIF-1α的表达与门静脉有无癌栓、预后及HBsAg表达无关。 结论 HIF-1 α蛋白在肝癌和肝硬化组织中普遍表达,且只受缺氧因素的影响,与肿瘤的分化程度和肝癌的转移有关,但与有无门静脉癌栓、HBsAg表达及预后无关,为肝癌的治疗提供新的思路。

岩藻糖基化海参硫酸软骨素抑制肿瘤血管新生作用的研究

目的从美国肉参(Isostichopus badionotus)中分离纯化岩藻糖基化海参硫酸软骨素(sea cucumber chondroitin sulfate,SC-CHS),体外研究其对肿瘤诱导血管生成的抑制作用。方法采用MTT法检测SC-CHS对95D细胞增殖活性的影响;小管形成实验研究SC-CHS对脐静脉内皮细胞(HUVEC)小管形成能力的抑制作用;采用鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管模型,研究其对血管生成的影响;通过RT-PCR和WesternBlot法检测其对肿瘤诱导血管生成相关因子缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,Hif-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA和蛋白的表达。结果结果显示SC-CHS能显著抑制95D细胞的增殖,能抑制HUVEC的小管形成作用和CAM血管新生。RT-PCR和Western Blot检测结果表明,高剂量SC-CHS能显著降低95D细胞中Hif-1α和VEGF mRNA的表达,减少VEGF蛋白的合成。结论SC-CHS体外能显著抑制肿瘤血管生成,这可能是通过影响肿瘤细胞中VEGF的合成发挥作用。

促甲状腺素抗氧化传导通路与甲状腺乳头状癌侵袭力的关系

目的探讨促甲状腺素受体（thyroid-stimu1ating hormone receptor，TSHR）、抗氧化酶1（peroxiredoxin1，Prx1）、硫氧还蛋白1（thioredoxin1，Trx1）、缺氧诱导因子1（hypoxia inducib1e factor-1，HIF-1）α在甲状腺乳头状癌侵袭、转移中的作用。方法选取2003至2007年于天津市肿瘤医院手术切除的34例典型甲状腺乳头状癌石蜡包埋标本、39例高细胞型甲状腺乳头状癌石蜡包埋标本，以癌旁正常甲状腺组织作对照，采用免疫组织化学SP法，检测TSHR、Prx1、Trx1、HIF-1α在甲状腺乳头状癌中的表达，并将检测结果结合患者的临床资料（性别、年龄、肿瘤大小、局部侵犯、颈淋巴转移、组织学亚型、T分期）等进行分析。结果甲状腺乳头状癌中的Prx1、Trx1、HIF-1α的阳性表达率均高于癌旁正常甲状腺组织（X2值分别为5．49、6．16、40．48，P值均〈0．05）。甲状腺乳头状癌中的TSHR的阳性表达率低于癌旁正常甲状腺组织（X2=15．70，P〈0．05），高细胞型甲状腺乳头状癌的TSHR的阳性表达率低于典型甲状腺乳头状癌（X2=4．24，P〈0．05）。肿瘤侵犯甲状腺被膜外、有颈淋巴转移、高细胞型、T3-T4期甲状腺乳头状癌的Prx1、Trx1、HIF—1α的阳性表达率更高，差异有统计学意义（P值均〈0．05）。甲状腺乳头状癌中Trx1与Prx1、Trx1与HIF—1α的阳性表达具有关联性（列联系数分别为0．664和0．652，P值均〈0．05）。结论甲状腺乳头状癌中Prx1、Trx1和HIF—1α的高表达与肿瘤的侵袭和转移有关，TSH可能通过Prx1—Trx1-HIF-1信号传导通路促进甲状腺癌的发展。

缺氧诱导因子1α特异性小干扰RNA对早期糖尿病大鼠视网膜白细胞黏附及髓样细胞活性的影响

目的观察缺氧诱导因子1α特异性小干扰RNA（HIF-1α siRNA）对早期糖尿病大鼠视网膜白细胞黏附及髓样细胞活性的影响。方法实验研究。构建HIF-1α siRNA表达载体pSUPERHl-siHIFlα。通过链脲佐菌素腹腔内注射诱导大鼠糖尿病模型。建模成功后2个月，取27只大鼠随机分为糖尿病＋磷酸盐缓冲液（PBS）玻璃体腔注射组（B组）、糖尿病＋pSUPERHl-siHIFlα玻璃体腔注射转染组（c组）、糖尿病＋pSUPER空载体玻璃体腔注射组（D组），每组9只大鼠。取9只月龄匹配的正常大鼠为对照组（A组）。分别以丫啶橙视网膜白细胞造影和髓过氧化物酶（MPO）酶联免疫吸附试剂盒检测视网膜白细胞黏附数量及髓样细胞活性。四组间均数的差异比较采用单因素方差分析，均数间差异的多重比较采用LSD—t检验。结果丫啶橙视网膜造影检测结果显示，A、B、C、D组视网膜白细胞黏附数量分别为（47．00±3．60）、（155．33±9．01）、（76．00±9．05）、（142．66±10．26）个，差异有统计学意义（F=116．25，P=O．00），C组视网膜白细胞黏附数量显著低于B组（LSD—t检验，P=0．00，95％可信区间为3．56—95．10）。4个组大鼠视网膜上清液中MPO的浓度分别为（17．24±1．13）、（31．32±2．53）、（21．35±1．06）、（31．33±1．26）μg／L，差异有统计学意义（F=58．68，P=0．00），C组视网膜中MPO水平显著低于B组（LSD—t检验，P=0．00，95％可信区间为6．92—13．01）。结论HIF-10lsiRNA对早期糖尿病大鼠视网膜白细胞黏附及髓样细胞活性有一定的调节作用。