乙型肝炎肝硬化患者外周血iNKT细胞活化标志物CD38和HLA-DR表达水平与肝损伤程度相关性

目的探讨乙型肝炎肝硬化(LC)患者血清iNKT细胞数量、活化标志物CD38和HLA-DR表达水平与肝损伤程度的关系。方法采用流式细胞仪检测LC患者外周血iNKT细胞频率及CD38和HLA-DR分子在iNKT细胞上的表达水平,分析其与LC患者肝功能Child-Pugh分级、MELD评分及临床肝功能指标相关性。两组数据比较采用MannWhitney U检验,相关性分析采用Spearman rank检验。结果与健康对照组相比,LC患者组iNKT细胞频率为0.106%,显著降低(P=0.026),CD4^+iNKT细胞比例为66.7%,显著升高(P<0.01),CD4-iNKT细胞比例为31.2%,显著降低(P<0.01);CD38和HLA-DR在iNKT、CD4^+iNKT和CD4-iNKT细胞上表达水平分别为14.2%、24.9%,18.8%、19.1%,18.4%、36.9%,明显升高(P<0.05),随着Child-Pugh分级有逐渐升高的趋势,但分级之间差异无统计学意义。CD4^+iNKT细胞上CD38和HAL-DR分子表达水平与ALB呈显著负相关(r=-0.496,P=0.019;r=-0.501,P=0.018)。结论 LC患者iNKT细胞频率明显降低;活化水平显著升高,且与肝功能损害程度相关,提示iNKT细胞可能参与LC肝损伤。

CD24调节iNKT细胞介导的小鼠急性肝损伤的实验研究

目的:探讨小鼠急性肝损伤中CD24分子对不变的自然杀伤T(iNKT)细胞的调控作用。方法:小鼠腹腔注射α-半乳糖甘油酰胺(α-GalCer)特异活化iNKT细胞,诱导小鼠急性肝损伤。HE染色观察小鼠肝脏炎症损伤程度,血清学方法检测转氨酶变化,免疫荧光染色观察肝内iNKT细胞的数量变化,流式细胞术检测肝内总iNKT细胞、iNKT细胞亚型数量、比例及iNKT细胞活性的变化,定量-PCR(Q-PCR)检测肝组织中iNKT细胞相关细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)的表达。结果:注射α-GalCer后,CD24基因敲除(CD24-/-)小鼠肝脏炎性细胞浸润比野生型(WT)小鼠少(F=10.10,P<0.01),血清谷丙转氨酶(ALT)水平比WT小鼠低(F=10.11,P<0.01)。免疫荧光染色结果表明,正常生理状态及α-GalCer模型中,CD24-/-小鼠肝内iNKT细胞数量显著低于WT小鼠(F=13.27,P<0.01)。流式细胞术分析发现,正常生理状态下,CD24-/-小鼠肝内总iNKT细胞和其亚型的数量显著低于WT小鼠(F=6.841,P<0.05);注射α-GalCer后,小鼠肝内总iNKT细胞数量显著增多(F=33.01,P<0.001);进一步分析iNKT细胞亚型发现,NKT1、NKT2细胞数明显增多(F=37.12、40.55,均P<0.05),但CD24-/-小鼠仍低于WT小鼠(F=40.07、12.53,均P<0.05),NKT17细胞无变化(P>0.05)。Q-PCR结果表明,注射α-GalCer后,CD24-/-小鼠肝组织中IFN-γ和IL-4 mRNA表达水平明显低于WT小鼠(F=14.34、19.77,均P<0.01),流式细胞术检测胞内细胞因子结果表明,α-GalCer模型中,CD24-/-小鼠iNKT细胞分泌的IFN-γ和IL-4明显低于WT小鼠(F=25.600、5.574,均P<0.05)。结论:肝内iNKT细胞与小鼠急性肝损伤密切相关,CD24分子可以通过调节肝内iNKT细胞的数量和活性影响急性肝损伤进程。

3种品系小鼠iNKT细胞组织特异性分布

目的比较3种品系小鼠外周血、胸腺、脾脏和肝脏中iNKT细胞频率及胸腺、脾脏、肝脏iNKT细胞中iNKT1、iNKT2亚群比例的差异。方法分别以DBA/1、NOD/Lt J及C57BL/6J 3种品系小鼠为研究对象,分离健康小鼠外周血、胸腺、脾脏和肝脏的淋巴细胞,采用FCM检测各组织器官中TCRβ和CD1d四聚体双阳性的iNKT细胞频率,并根据核内PLZF和T-bet的表达水平确定iNKT1和iNKT2亚群。结果 (1) 3种品系小鼠外周血中iNKT细胞频率最低,肝脏中iNKT细胞频率最高,脾脏和胸腺iNKT细胞频率介于两者之间。其中,C57BL/6J小鼠胸腺iNKT细胞频率显著低于DBA/1及NOD/Lt J小鼠,肝脏iNKT细胞频率显著高于其他2品系小鼠; NOD/Lt J小鼠脾脏、肝脏iNKT细胞频率显著低于C57BL/6J及DBA/1小鼠。(2) 3种品系小鼠胸腺iNKT细胞中iNKT2亚群占比较高,脾脏、肝脏中iNKT细胞以iNKT1亚群为主。其中,C57BL/6J小鼠胸腺iNKT2亚群比例最低; NOD/Lt J小鼠胸腺iNKT2亚群比例最高,脾脏、肝脏iNKT1亚群比例较高。结论 DBA/1、NOD/Lt J及C57BL/6J 3种品系小鼠,同一品系小鼠不同组织器官iNKT细胞频率及亚群比例,不同品系小鼠同一组织器官iNKT细胞频率及亚群比例存在很大差异。

活动性结核病人PBMCs中转录因子PLZF的表达降低与iNKT细胞的减少相关

目的:比较活动性结核病人和健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子PLZF(Promyelocytic leukemiazinc finger)的表达和iNKT细胞含量的差异,研究活动性结核病人PBMCs中PLZF的表达与iNKT细胞含量的相关性。方法:采集活动性结核病人和健康人新鲜的抗凝血,淋巴细胞分离液分离PBMCs。每个样本的PBMCs分两份,一份细胞用Trizol法提取总RNA,荧光定量PCR检测PLZF mRNA的相对表达量;另一份细胞用特异性抗体标记iNKT细胞,流式细胞仪检测iNKT细胞的含量。统计学软件分析两组样本PLZF的表达和iNKT细胞含量的差异,以及PLZF的表达与iNKT细胞含量的相关性。结果:活动性结核病人PMBCs中PLZF的表达和iNKT细胞含量均显著低于健康对照(P值分别为0.010 2和0.001 2),PLZF的表达与iNKT细胞的含量成正相关(r=0.480 4,P=0.027 5)。结论:活动性结核病人PLZF的表达降低与iNKT细胞百分含量的减少相关。

慢性乙型肝炎患者iNKT细胞PD-1表达的变化

目的检测慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中iNKT细胞比例、细胞因子分泌能力以及其表面程序性死亡因子1(programmed death 1,PD-1)的表达情况。方法采集慢性乙型肝炎患者外周血,利用CD3、TCR Vα24、TCR Vβ11、CD279单克隆抗体标记后经流式细胞术直接检测iNKT细胞比例及其PD-1表达比例;采用PMA+Ionomycin体外活化iNKT细胞后流式细胞术检测其胞内IFN-γ分泌情况。结果慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞比例[(0.09±0.04)%]与健康对照者[(0.11±0.07)%]相比无明显差异,但体外活化后胞内IFN-γ分泌量减少[(24.64±7.71)%vs(42.35±11.60)%],且iNKT细胞PD-1表达升高[(36.7±9.7)%vs(16.2±5.4)%]。结论慢性乙型肝炎患者外周血iNKT细胞功能的下降可能与其表面负性刺激分子PD-1表达上调密切相关。

慢性HBV感染者血清IL-15和外周血iNKT细胞水平变化及相关性研究

目的探讨慢性乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者血清IL-15和外周血恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,i NKT)细胞水平的变化。方法收集54例慢性HBV感染者和15名健康者外周血,分离血清和外周血单个核细胞(PBMC);ELISA法检测血清中IL-15水平;流式细胞术检测i NKT细胞占T细胞的比例,PMA、BFA和ionomycin处理PBMC后,流式细胞术检测i NKT分泌的IFN-γ和TNF-α水平,并利用Pearson法进行相关性分析。结果与正常对照者相比,免疫清除期患者血清中IL-15水平明显升高(P<0.05),免疫耐受期患者高于正常对照者,低于免疫清除组,差异无统计学意义(P>0.05);免疫清除期和免疫耐受期患者血清ALT水平和HBV DNA载量与IL-15水平无明显相关性(P>0.05)。免疫清除期患者外周血i NKT细胞比例显著降低,免疫耐受期患者略升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。免疫耐受期和清除期患者外周血i NKT细胞分泌IFN-γ和TNF-α的细胞比例略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。免疫耐受期和免疫清除期患者i NKT细胞分泌IFN-γ水平与IL-15水平呈正相关;免疫耐受期和免疫清除期患者i NKT细胞分泌TNF-α水平与IL-15水平无相关性(P>0.05)。结论慢性HBV感染者血清中IL-15水平升高,且外周血i NKT细胞数量减少,且不同感染状态患者血清IL-15水平和外周血i NKT细胞数量呈动态变化。

结核病患者外周血中iNKT细胞的数量显著降低

目的:比较结核病患者和健康对照外周血iNKT细胞数量的差异,分析结核病患者伴发糖尿病对外周血iNKT细胞数量的影响。方法:采集37例结核病患者和12例健康志愿者的静脉血,用特异性抗体anti-Vα24-PE/anti-Vβ11-FITC标记iNKT细胞,流式细胞术(FCM)检测外周血中iNKT细胞的含量。结果:结核病患者和健康对照外周血iNKT细胞的百分含量分别为0.01%(0.24%/0.00%)和0.08%(0.19%/0.00%),差异显著(P<0.01)。伴发糖尿病的结核病患者和非糖尿病的结核病患者iNKT细胞的百分含量分别为0.015%(0.09%/0.00%)和0.01%(0.24%/0.00%),差异无统计学意义(P>0.05)。结论:结核病患者外周血中iNKT细胞数量明显减少,伴发糖尿病对结核病患者外周血iNKT细胞数量没有显著影响。

含噻唑烷-4-酮的免疫刺激剂CH2a增强人iNKT细胞的功能

目的研究含噻唑烷-4-酮的糖类衍生小分子免疫刺激剂CH2a对人iNKT细胞功能的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),经α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)和IL-2体外扩增后,利用磁珠分选分离纯化得到恒定型自然杀伤T细胞(iNKT细胞)。5(6)-羧基二乙酸荧光黄琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记的纯化iNKT细胞,与CH2a共孵育后,流式细胞术检测细胞增殖和分代,IFN-γ和IL-4的表达;MTT法定量检测细胞增殖率及对K562细胞的杀伤活性。ELISA检测CH2a处理细胞培养基中IFN-γ和IL-4水平。结果 CH2a能显著促进IL-2引起的iNKT细胞体外增殖;提高IFN-γ和IL-4的生成量及IFN-γ/IL-4的比值;并显著增强iNKT细胞的杀伤活性。结论 CH2a有可能通过诱导iNKT分泌Th1类的细胞因子,调节T细胞向Th1分化,从而增强细胞免疫功能;同时显著提高iNKT的细胞毒功能。

含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂对RA患者iNKT细胞免疫调节功能的影响

目的:研究新型合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂(CH1b)对活动期RA患者iNKT细胞免疫调节功能的影响。方法:从RA患者外周血中分离得到单个核淋巴细胞(PBMC),α-Galcer和IL-2体外刺激扩增后,经磁珠分选(MACS)得到纯化的iNKT细胞,分成对照组(IL-2)、α-Galcer组(IL-2+α-Galcer)、CH1b组(IL-2+CH1b)。采用MTT法测定各组RA患者iNKT细胞增殖率;MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine kit检测各组RA患者iNKT细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的水平;采用RT-PCR方法检测各组RA患者iNKT细胞中IFN-γmRNA和IL-4 mRNA的表达水平。结果:与对照组和α-Galcer组相比,CH1b组iNKT细胞增殖率明显增加(P<0.05);与对照组相比,α-Galcer组IFN-γ和IL-4分泌水平明显增加(P<0.05),CH1b组IFN-γ和IL-4的分泌量也明显增加,IFN-γ/IL-4明显降低(P<0.05);与对照组相比,α-Galcer组IFN-γmRNA与IL-4 mRNA表达均明显增高,CH1b组IFN-γmRNA表达差异不明显,IL-4 mRNA的表达明显增高。结论:新型合成的免疫调节剂(CH1b)可促进活动期RA患者活化的iNKT细胞增殖,并促进IL-4的分泌,上调IL-4 mRNA的表达,诱导iNKT细胞向Th2方向分化,对恢复RA病人体内免疫平衡具有重要意义。

中药软肝饮对HBV转基因小鼠iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1表达的影响

目的:研究中药软肝饮对HBV转基因小鼠iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1表达的影响,探讨中药软肝饮对HBV转基因小鼠抗病毒的作用机制。方法:将50只雌雄各半HBV转基因小鼠随机分为治疗组(高、中、低剂量软肝饮)、模型组、阳性对照组(恩替卡韦分散片)等5组,另用10只非HBV转基因小鼠作为空白对照。药物干预灌胃4周后处死小鼠,观察各组小鼠外周血及肝脏中iNKT细胞及其表面PD-1、PD-L1的表达。结果:与空白对照组相比,模型组小鼠外周血iNKT细胞表达明显降低,iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达水平明显增高,差异有显著性意义(P<0.01);与模型组相比,治疗后软肝饮高剂量组和阳性对照组小鼠外周血iNKT细胞表达明显增高,iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达水平有一定程度的降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);软肝饮中剂量组小鼠外周血iNKT细胞表达有一定增加,有一定差异性(P<0.05),而iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达水平无明显变化,无明显差异性;软肝饮低剂量组小鼠外周血iNKT细胞表达及iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达无明显变化,无明显差异性(P>0.05)。HBV转基因小鼠肝脏中细胞iNKT的表达明显低于空白对照组,iNKT细胞表面PD-1、PD-L1的表达明显高于空白对照组,均有统计学意义(P<0.05);结论:中药软肝饮调控HBV转基因小鼠的免疫机制可能通过阻断iNKT细胞上PD-1/PD-L1信号通路,调控iNKT细胞功能发挥抗HBV作用。

iNKT细胞在脂多糖诱导的早产中的作用

目的探讨恒定自然杀伤T(iNKT)细胞在脂多糖(LPS)诱导的早产中的作用。方法野生型C56BL/6小鼠和缺乏iNKT细胞的Jα18-/-小鼠腹腔注射LPS建立炎症诱导性早产小鼠模型;计算早产率和死胎率;流式细胞术检测蜕膜活化型免疫细胞百分率和树突状细胞共刺激分子的表达。结果与野生型小鼠比较,LPS处理的Jα18-/-小鼠早产率和死胎率显著降低,蜕膜树突状细胞共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达显著下降,蜕膜活化型树突状细胞、T细胞和NK细胞百分率明显减少。结论 iNKT细胞可能在LPS诱导的早产发生中具有重要作用。

真核表达hCD1d二聚体的纯化及其对iNKT细胞的刺激效应

目的建立真核表达的人CD1d(hCD1d)二聚体的纯化方法,并制备人工抗原提呈细胞,研究其对iNKT细胞的刺激效应。方法提取pFastBacTMDual+[β2m+CD1d/IgG1-Fc]昆虫杆状病毒质粒并转染至sf9细胞中,收集病毒感染上清,通过ELISA法鉴定融合蛋白中人IgG-Fc、人CD1d和人β2m等组分并测定hCD1d二聚体浓度。探索保持hCD1d二聚体完整构象的亲和层析条件,对hCD1d二聚体进行纯化和浓缩。应用加载α-GalCer的hCD1d二聚体制备人工抗原提呈细胞刺激健康个体外周血单个核细胞(PBMC),检测Th1、Th2、Th17细胞因子分泌水平与iNKT细胞的扩增效率。结果收集的第4代病毒感染上清中目的蛋白表达量较高。抗Ig-Fc抗体ELISA、抗CD1d抗体与抗β2m抗体双抗夹心ELISA检测显示sf9细胞表达的hCD1d二聚体构象正确,两种方法检测的蛋白浓度分别为(1.05±0.20)μg/mL和(0.85±0.01)μg/mL。亲和层析纯化结果显示用pH2.5的0.1 mol/L柠檬酸可较好地实现hCD1d二聚体有效纯化。健康个体iNKT细胞经人工抗原提呈细胞刺激3 d后主要产生Th1型细胞因子,上清中IFN-γ、TNF-α含量分别为(1876.26±96.73)pg/mL和(1186.25±98.63)pg/mL,明显高于对照组(79.98±18.52)pg/mL和(29.96±4.43)pg/mL,差异具有统计学意义(均P<0.01),其余Th2型(IL-4)、Treg型(IL-10)和Th17型(IL-17)细胞因子未见明显升高,差异均无统计学意义(均P>0.05),与iNKT细胞接收刺激后分泌细胞因子谱基本一致。健康个体PBMC接受刺激后,iNKT细胞迅速扩增,刺激第7天iNKT细胞占PBMC(4.17±0.76)%,而未包被hCD1d二聚体的微球对照组iNKT细胞占PBMC的比例仅为(0.41±0.09)%。这些结果说明包被有hCD1d二聚体的人工抗原提呈细胞可特异性地刺激iNKT细胞分泌Th1型细胞因子并有效扩增。结论成功制备hCD1d二聚体,并建立基于人工抗原提呈细胞的iNKT细胞有效的刺激与扩增体系,为后续对iNKT细胞深入研究打下了基础。

Tim-3、PD-1和CD28表达与慢性乙肝患者肝脏iNKT细胞功能的关系

目的研究慢性乙肝患者肝脏中恒定自然杀伤T(invariant nature killer T,iNKT)细胞的功能与其表面Tim-3、PD-1、CD28表达的关系。方法无菌分离人体肝脏单个核细胞,建立α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)诱导慢性HBV感染后的iNKT细胞体外诱导扩增模型,以流式细胞术检测体外培养基线水平0 h和72 h的iNKT细胞的表面Tim-3、PD-1、CD28的表达以及IL-4、IFN-γ的分泌情况;用ELISA法检测培养上清中IL-4、IFN-γ的水平;阻断PD-1、Tim-3及活化CD28信号通路,以流式和ELISA法检测IL-4+iNKT与IFN-γ+iNKT。结果慢性乙肝患者(实验组)肝脏中的iNKT细胞的比例明显低于正常人(对照组)(P<0.05);iNKT表面Tim-3、PD-1的表达明显增多(P<0.05),而CD28的表达则明显减少(P<0.05);iNKT细胞分泌IL-4、IFN-γ的功能明显降低(P<0.05);单一α-GalCer刺激培养72 h后,实验组IL-4+iNKT、IFN-γ+iNKT的表达没有明显变化(P>0.05),而阻断PD/PDL1、Tim-3/Tim-3L和(或)活化CD28/CD80信号通路后,IL-4+iNKT、IFN-γ+iNKT细胞的表达明显提高(P<0.05)。结论慢性乙肝患者肝脏iNKT细胞功能存在明显的缺陷,并提示负向调控因子Tim-3、PD-1表达的增加和正向调控因子CD28表达的降低可能与iNKT细胞功能的下调密切相关。

探讨慢性HBV感染者外周血iNKT细胞水平变化

目的探讨慢性HBV感染者外周血i NKT细胞水平变化。方法选取2015年1月—2018年9月我院收治的确诊为慢性HBV感染者48例,分别处于免疫耐受期(13例)和免疫清除期(35例),另选取同期在我院的正常体检人群39例,采用流式细胞术检测iNKT细胞占T细胞的比例,经过PAM、BFA等处理后,检测i NKT分泌的TNF-γ和TNF-α水平。结果耐受期组和清除期组患者i NKT细胞占CD3^+T细胞的比例低于正常体检组,耐受期组患者的iNKT细胞占CD3+^+细胞的比例高于正常体检组(P> 0.05),清除期组患者iNKT细胞占CD3^+T细胞的比例低于耐受期组和正常体检组;耐受期组患者比例高于清除期组和正常体检组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论慢性HBV感染患者机体可通过iNKT细胞分泌的IFN-γ和TNF-α来抑制HBV的复制过程,感染过程中外周血i NKT细胞有所数量减少。

mTOR对iNKT细胞发育和分化的影响

iNKT细胞是最近发现的一类具有重要免疫功能的特殊T细胞亚群。其发育分化受多种因素的影响,最新研究发现mTOR在iNKT细胞的发育分化中起关键作用。mTORC1控制着iNKT细胞阶段1、2、3的发育转变,且与PLZF互相调节影响iNKT细胞的发育分化,mTORC2在iNKT细胞由阶段1到2转变过程中起重要作用。促进mTORC1与mTORC2活化的主要有RasGRP1、PDK1和Rhe B。旨在阐明mTOR对iNKT细胞发育分化的影响。

影响iNKT细胞分化的信号通路研究进展

iNKT细胞是一群连接固有免疫和适应性免疫的特殊桥梁细胞,在胸腺中发育并分化。近年研究发现,E蛋白家族(E2A、HEB)和早幼粒白血病锌指蛋白(PLZF)是调控iNKT细胞分化最早最基础的转录因子,在此基础之上,通过激活细胞内不同信号通路包括丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、TGF-β/SMAD通路、PI3K/Akt/mTOR通路等,iNKT细胞可分化为五个亚群,至今研究较为透彻的为iNKT1、iNKT2、iNKT17亚群。就上述三条通路对iNKT细胞分化的影响展开综述。

结核病患者外周血iNKT细胞数量与功能缺陷

目的通过对比分析结核病患者与健康个体外周血中恒定自然杀伤T细胞(invariant nature killer T cells,iNKT)的比例、表型以及功能,认识iNKT细胞在结核病患者体内的功能状态,为探讨基于iNKT细胞的干预措施在结核病防治中的应用奠定基础。方法收集武汉市新洲区人民医院收治的21例结核病患者及14例健康体检者外周血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。对PBMC进行细胞表面染色,用流式细胞仪分别测定iNKT细胞的比例和表面分子CD69、CD62L、CD122以及CD161的表达;用丙二醇甲醚醋酸酯/离子霉素(phorbol-12-myristate-13-acetate/Ionomycin,PMA/ION)刺激PBMC,通过胞内细胞因子染色,测定iNKT细胞潜在的合成分泌IFN-γ和IL-4的能力;并用α-半乳糖神经酰胺(α-Galactosylceramide,α-GalCer)刺激培养1周,测定结核病患者iNKT细胞的反应性及扩增效率。结果相对于健康个体,结核病患者外周血中的iNKT细胞百分比明显降低;结核病患者iNKT细胞的CD69表达水平显著高于健康个体,而其CD62L、CD122及CD161的表达量与健康个体无明显差异;结核病患者和健康个体的iNKT细胞在PMA/ION刺激后分泌IFN-γ和IL-4的能力无明显差异;然而结核病患者的iNKT细胞对α-GalCer的反应能力明显减弱,表现为被α-GalCer刺激后的扩增能力低于健康个体。结论结核病患者体内iNKT细胞的数量与功能异常,提示恢复iNKT细胞数量与功能是促进iNKT细胞抗结核效应的关键因素。

MiR-150特异调控胸腺iNKT细胞的发育和成熟

目的:探讨miR-150在胸腺传统T细胞和恒定型自然杀伤性T细胞(iNKT)发育和成熟中的作用。方法:采用Real-time PCR检测miR-150在胸腺传统T细胞和iNKT细胞中的表达,流式细胞术检测miR-150基因敲除小鼠胸腺传统T细胞和iNKT细胞的发育和成熟。结果:miR-150在胸腺传统T细胞和iNKT细胞中均有表达,且在iNKT细胞发育成熟过程中表达逐渐增加,缺失miR-150不影响传统T细胞发育,但导致iNKT细胞发育和成熟障碍。结论:miR-150特异调控小鼠胸腺iNKT细胞的发育和成熟。

不同剂量链脲佐菌素诱导C57BL/6小鼠1型糖尿病模型的复制与iNKT细胞的检测

目的腹腔注射不同剂量链脲佐菌素(STZ)于雌性C57BL/6小鼠,诱导建立与人类1型糖尿病相似的动物模型,研究最适链脲佐菌素(STZ)建模剂量。方法 35只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(n=5)和模型一、二、三组(STZ剂量分别为40、50和60 mg/kg),每组10只。模型组连续5 d腹腔注射不同剂量STZ,测定注射前、注射后1、2、3、4和5周的空腹血糖和体重,小鼠胰岛素自身抗体(IAA)阳性率,观察小鼠饮食、饮水和排尿情况。流式细胞技术(FACS)分析血和脾细胞悬液中恒定自然杀伤T细胞(i NKT)细胞比例;HE染色观察胰岛病理。结果与对照组比较,模型三组饮水量、进食量和排尿量增加,体重减轻。与对照组比较,模型三组血糖变化明显,注射STZ后第1周迅速升高,第4周达高峰,随后下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,模型组3组胰岛萎缩,胰岛细胞不规则,数目减少。模型二组和模型三组IAA阳性率分别达到30%和90%。与对照组比较,模型三组外周血CD4+NK1.1+淋巴细胞和脾CD4+NK1.1+淋巴细胞比例减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论诱导建立雌性C57BL/6小鼠1型糖尿病模型的最适STZ剂量为60 mg/kg。