诱生性一氧化氮合酶cRNA探针的制备及敏感性检测

目的制备地高辛标记的大鼠诱生性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｃＲＮＡ探针。方法首先对携带大鼠ｉＮＯＳｃＤＮＡ的ＰＭＯＳＢｌｕｅ质粒进行转化扩增。然后提取扩增的质粒ＤＮＡ并用ＢａｍＨⅠ内切酶酶切处理使其线性化。以线性化的ｃＤＮＡ为模板，在Ｔ７ＲＮＡ聚合酶的作用下，体外转录带有地高辛的ｉＮＯＳｃＲＮＡ探针。结果该地高辛标记的ｃＲＮＡ探针用点杂交法能检出相应ＤＮＡ的敏感性可达０．１μｇ／Ｌ。结论该ｉＮＯＳｃＲＮＡ探针可用作检测组织细胞内ｉＮＯＳｍＲＮＡ的表达。