iNOS通路生成的NO对人成骨细胞生长影响的实验研究

目的：探讨iNOS通路产生的NO对人成骨细胞生长的影响及其在骨愈合中的作用。方法：从流产胎儿的颅骨分离培养人成骨细胞分为3组：对照组：TNF－α、INF－r、IL－1β组；TNF－α、INF－r、IL－1β加L－NMMA组。通过细胞计数，流氏细胞仪检测DNA含量及透射电镜观察超微结构的变化。结果：细胞计数加入TNF－α、INF-r、IL-1β组数量明显少于对照组（P＜0．05）及加入L－NMMA组（P＜0．05），TNF－α、IMF-r、IL-1β组S期DNA含量明显减低；电镜可见线粒体减少，粗面内质网减少。结论：高浓度NO对成骨细胞具有明显的细胞毒性作用，而iNOS选择抑制剂L－NMMA能有效减轻NO对成骨细胞的影响。

柚皮素磷脂复合物对实验性脉络膜新生血管NF-κB/iNOS通路的影响

目的探讨柚皮素磷脂复合物(NPC)对实验性脉络膜新生血管NF-κB/iNOS通路的影响。方法建立大鼠脉络膜新生血管模型,随机分为空白对照组、溶媒组、柚皮素(Nar)治疗组、NPC高、中、低治疗组,眼底血管荧光造影(FFA)检查分析评估CNV形成率,脉络膜铺片荧光显微镜观察CNV面积,实时荧光定量聚合酶链锁反应(RT-qPCR)和Western blot分别检测眼后节组织中NF-κB、iNOS、COX-2、VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达。结果FFA检查可见空白对照组,溶媒组显示有强荧光渗漏,荧光素渗透面积分别扩大180点、175点,占总光凝数192点的93.75%、91.14%;Nar组荧光信号减弱,渗透范围扩大161点,占总光凝点数的83.85%,与空白对照组相比CNV形成率差异有统计学意义(X^2=9.454,P=0.000);NPC低、中、高剂量组较空白对照组荧光信号显著减弱,渗透范围分别为143点、120点、105点,分别占总光凝数的74.47%、62.5%、54.68%,光凝4周后CNV形成率差异均有统计学意义(X^2NPC低=26.681、X^2NPC中=54.857、X^2NPC高=76.555,均P=0.000)。治疗4周后,空白对照组、溶媒组新生血管面积最大,两组之间无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,Nar组和NPC组CNV面积明显减少,差异有统计学意义(tNar=15.165,tNPC低=21.411,tNPC中=29.815,tNPC高=34.129,均P=0.000);NPC低、中、高三组组间比较总体差异有统计学意义(F=35.117,P=0.000)。NPC高剂量组CNV面积显著小于低、中剂量组(tNPC低=8.275,PNPC低=0.000;tNPC中=3.529,PNPC中=0.002)。与Nar相比,NPC低、中、高剂量组CNV面积明显减少(tNPC低=8.824,tNPC中=13.920,tNPC高=17.724,均P=0.000);与空白对照组相比,溶媒组6项观察指标mRNA表达水平均无统计学意义(P>0.05);Nar组COX-2、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平与空白组相比有统计学意义(tcox-2=10.824,tMMP-2=6.346,tMMP-9=14.710,均P=0.000);NPC低、中、高剂量三组组间在NF-κB、COX-2、VEGF mRNA有统计学意义(FNF-κB=95.681,Fcox-2=65.732,FVEGF=86.90,均P=0.000),NPC低剂量组6项观察指标mRNA表达水平较Nar组降低(tNF-κB=9.824,tiNOS=6.824,tcox-2=9.357,tVEGF=5.824,tMMP-2=5.914,tMMP-9=4.560;均P=0.000),NPC组高剂量组NF-kB、VEGF mRNA水平较低剂量组降低(tNF-κB=35.461,tVEGF=28.175,均P=0.000)。与空白对照组相比,溶媒组6项观察指标蛋白表达水平两组间均无统计学意义(P>0.05);Nar组6项观察指标蛋白水平与空白组相比有统计学意义(tNF-κB=4.261,tiNOS=4.750,tcox-2=3.824,tVEGF=5.432,tMMP-2=3.376,tMMP-9=10.722;均P=0.000);NPC组低剂量组iNOS、COX-2、VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白水平与Nar组比较有统计学意义(tiNOS=12.117,tcox-2=3.227,tVEGF=5.972,tMMP-2=3.631,tMMP-9=4.932;均P=0.000),NPC高剂量组COX-2、VEGF蛋白表达水平较中剂量降低(tcox-2=10.753,tVEGF=6.148,均P=0.000)。结论NPC影响NF-κB、iNOS的表达,其可能通过NF-κB/iNOS通路影响实验性脉络膜新生血管的形成。

基于TLR4/NF-κB/iNOS通路的截断逆挽方药物血清对L02细胞氧化应激损伤的影响

目的观察截断逆挽方药物血清对D-氨基半乳糖(D-GaLN)诱导的L02细胞氧化应激损伤的影响,从TLR4/NF-κB/iNOS通路探讨其作用机制。方法体外培养L02细胞,D-GaLN诱导L02细胞损伤模型,将细胞分为正常组、模型组、截断逆挽方药物血清组、N-乙酰半胱氨酸组。CCK-8法检测细胞存活率,丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒检测细胞MDA和GSH含量,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)含量,Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组L02细胞存活率明显降低(P<0.01),ROS、MDA含量明显增加,GSH含量明显减少,TLR4、NF-κB p65、iNOS蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,截断逆挽方药物血清组L02细胞存活率明显升高(P<0.01),ROS、MDA含量明显减少,GSH含量明显增加,TLR4、NF-κB p65、iNOS蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论截断逆挽方药物血清能抑制TLR4/NF-κB/iNOS通路介导的氧化应激,减轻D-GaLN诱导的L02细胞损伤。

健脾理气方对功能性消化不良模型大鼠十二指肠TLR9/NF-κB/iNOS通路的影响

目的观察健脾理气方对功能性消化不良模型大鼠十二指肠toll样受体9(TLR9)、核转录因子(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。方法 36只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组及中药治疗组各12只,以夹尾应激法建立功能性消化不良(FD)动物模型,给予正常组及模型组生理盐水灌胃,中药治疗组健脾理气方水煎剂灌胃。取大鼠十二指肠组织进行HE染色观察组织形态,同时应用定量PCR(q PCR)和Western blot检测TLR9、NF-κB mRNA及iNOS蛋白表达情况。结果 HE染色显示3组大鼠十二指肠形态学未见异常,模型组大鼠十二指肠NF-κB及TLR9 mRNA及iNOS蛋白表达明显高于正常组(P<0.05),中药治疗组十二指肠以上指标的水平较模型组明显降低(P<0.01)。结论健脾理气方通过抑制TLR9/NF-κB/iNOS信号通路进而改善十二指肠的微炎症表达,可能是健脾理气方治疗FD的机制之一。

PS-MPs和DEHP联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞自噬的作用机制研究

【目的】探究聚苯乙烯微塑料(PS-MPs)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞(MCEC)自噬的作用机制。【方法】依据CCK-8法测定的PS-MPs和DEHP对MCEC的半数抑制浓度(IC 50),将MCEC分为5组:对照组、PS-MPs组、DEHP组、联合组和抑制组,各组MCEC分别用培养基及含有200μg/L PS-MPs、100μmol/L DEHP、200μg/L PS-MPs+100μmol/L DEHP、200μg/L PS-MPs+100μmol/L DEHP+5 nmol/L硼替佐米(PS-341)的培养基处理24 h后,采用生化试剂盒检测NO含量及iNOS活性,通过MDC法检测自噬小体,利用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blotting检测自噬,以及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。【结果】PS-MPs和DEHP均可抑制MCEC的活力,且IC 50分别为2315μg/L和1477μmol/L。与对照组相比,PS-MPs、DEHP、联合组细胞中NO含量、iNOS活性及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),MDC法与免疫荧光染色的荧光强度均显著增强(P<0.05),MCEC的自噬相关基因(Beclin1、ATG5、LC3-B)的mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.05);PS-341可显著缓解PS-MPs和DEHP对MCEC暴露引起的上述检测指标的变化。【结论】联合暴露于PS-MPs和DEHP可激活iNOS,使NO含量激增,上调NO/iNOS/NF-κB通路,从而诱导小鼠结肠上皮细胞自噬。

蒙医温针对慢性疲劳大鼠iNOS信号通路及海马、下丘脑细胞因子表达的影响

目的研究蒙医温针治疗过程中iNOS信号通路对氧化应激及细胞因子的表达影响。方法将SD大鼠随机分为正常组、对照组、模型组和温针组,力竭游泳3周造模。Morris水迷宫评估大鼠学习记忆能力、疲劳情况;ELISA检测海马和下丘脑IL-1β、IL-6、TNF-α及iNOS的含量。结果Morris水迷实验,与模型组比温针组平均速度明显增高(P<0.05),潜伏期时间减少(P<0.05);疲劳模型大鼠海马和下丘脑IL-1β、IL-6、TNF-α及iNOS含量明显升高(P<0.05),温针组海马和下丘脑IL-1β、TNF-α及iNOS及海马IL-6含量明显降低(P<0.05)。结论慢性疲劳综合征可能涉及海马和下丘脑过度的炎症反应和潜在的炎症损伤;蒙医温针可减轻炎症反应的损害,具有抗炎作用。蒙医温针的疗效可能是通过抑制iNOS信号通路、增强抗氧化应激能力,改善认知功能障碍的。

氟代柠檬酸抑制缺血后适应对树鼩脑缺血后海马HIF-1α/iNOS信号通路调控的脑损伤机制

目的:观察缺血后适应(PC)对树鼩脑缺血时海马HIF-1α/i NOS信号通路的调控作用,探讨抑制星形胶质细胞(AS)代谢加重脑损伤的机制。方法:光化学法建立血栓性脑缺血动物模型,氟代柠檬酸盐(FC)作为AS代谢抑制剂,于脑缺血后4 h闭/开缺血侧颈总动脉5 min,共3个循环以建立缺血PC模型。67只雄性树鼩随机分为对照组(n=9)、缺血4 h组(n=9)、缺血24 h组(n=9)、缺血PC 4 h组(n=9)、缺血PC 24 h组(n=9)、FC预处理4 h组(n=11)和FC预处理24 h组(n=11)。采用TTC染色观察树鼩脑梗死体积的变化,通过HE染色观察海马神经元病理学改变,用激光多普勒监测缺血区区域性脑血流(r CBF),免疫组化及Western blot检测海马i NOS表达,用分光光度计测定海马NO产量,用ELISA分析海马HIF-1α水平的变化。结果:脑梗死体积随缺血时间延长而增大,以缺血24 h为显著(P <0. 05);脑缺血后4 h和24 h皮层r CBF均下降(P <0. 05);而海马HIF-1α和i NOS表达增强,NO生成显著升高(P <0. 05)。缺血PC可增加皮层r CBF(P <0. 05),显著缩小脑梗死体积(P <0. 05),下调海马i NOS表达并减少NO的生成(P <0. 05)。而FC预处理组r CBF显著低于缺血组(P <0. 05),海马神经元损伤程度较缺血组加重,脑梗死体积随之增大(P <0. 05)。结论:缺血PC通过调控HIF-1α和i NOS表达而减轻缺血性脑损伤,抑制AS功能可削弱缺血PC介导的保护效应而加重脑损伤。

汉黄芩苷对肾缺血/再灌注损伤大鼠肾功能及NF-κB/iNOS/NO通路的影响

目的观察汉黄芩苷对肾缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠肾功能及对NF-κB/iNOS/NO通路的影响并探讨其机制。方法制备肾I/R模型大鼠,按随机数字表法分为模型组、乌司他丁组及汉黄芩苷低(5 mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(75 mg/kg)剂量组,模型组及假手术组给予等量0.9%氯化钠注射液灌胃。再灌注后24 h,检测各组大鼠肾功能,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学变化,试剂盒检测肾组织中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(iNOS)活性、还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及一氧化氮(NO)水平,蛋白印迹(WB)法检测肾组织中NF-κB表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾功能显著下降,血液中血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)含量显著升高,肾组织出现肾小管上皮细胞水肿、脱落、小管腔坏死等病理变化,组织病理评分明显升高,CAT、SOD、GSH活性显著下降,MDA含量显著升高,NF-κb蛋白核转移水平明显增加,iNOS活性、NO水平显著增高;与模型组比较,汉黄芩苷低、中、高剂量组大鼠肾功能均明显恢复,肾组织病理变化均显著改善,组织病理评分显著降低,CAT、SOD、GSH活性显著升高,MDA含量显著下降,NF-κb蛋白核转移水平明显减少,iNOS活性、NO水平显著降低,均呈剂量依赖效应(均P<0.05)。结论汉黄芩苷具有提高肾功能,保护缺血/再灌注所致肾损伤的功能,其机制可能是通过抑制氧化应激反应和NF-κB/iNOS/NO通路的激活而实现。

黄芩苷对肝星状细胞iNOS/PUMA信号通路的影响

目的研究黄芩苷通过iNOS/PUMA信号通路促进肝星状细胞凋亡的作用。方法MTT检测细胞增殖抑制率,Western Blot检测iNOS、PUMA蛋白表达,real-time PCR检测PUMA mRNA表达,一氧化氮检测试剂盒检测NO含量,iNOS抑制剂L-NAME预处理后检测细胞增殖抑制率和PUMA表达,Hoechst 33342核染色检测细胞凋亡。结果50 mM黄芩苷引起肝星状细胞活化诱导性死亡;黄芩苷促进肝星状细胞PUMA mRNA、蛋白表达;iNOS抑制剂L-NAME预处理后PUMA表达降低、细胞凋亡减少。结论黄芩苷能通过iNOS/PUMA信号通路促进肝星状细胞凋亡。

清感冬饮通过调控NF-κB/iNOS/NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

[目的]通过构建脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,探讨清感冬饮(QGDY)的抗炎作用及其机制。[方法]采用CCK-8法和LDH法检测不同浓度的清感冬饮对HEK293T细胞和RAW264.7巨噬细胞的细胞活力及LDH漏出量的影响。分别建立抗氧化反应元件(ARE)和核因子-κB(NF-κB)双荧光素酶报告系统,考察清感冬饮对HEK293T细胞ARE、NF-κB表达情况的影响。建立LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞体外炎症模型,将RAW264.7巨噬细胞随机分为空白对照组、LPS模型组、清感冬饮低、中、高剂量组(1、10、100μg/mL),倒置显微镜下观察各组细胞的形态差异;采用Griess法和ELISA法测定各组细胞上清中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;采用qRT-PCR法检测各组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平;利用免疫荧光法观察核因子-κB p65(p65)核移位情况;采用Western blot法检测各组细胞一氧化氮合酶(iNOS)和p65蛋白表达情况。[结果]0.01~10μg/mL清感冬饮对HEK293T细胞活力无显著影响,1~10μg/mL清感冬饮明显抑制TNF-α诱导的NF-κB启动子的活性,清感冬饮对ARE启动子的活性无显著影响。初步证明清感冬饮具有抗炎作用,而无明显抗氧化作用。0.01~100μg/mL清感冬饮干预24 h对RAW264.7巨噬细胞无细胞毒性作用。与模型组相比,1~100μg/mL清感冬饮显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞中NO及炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放;10~100μg/mL清感冬饮显著下调TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平,抑制p65核移位;100μg/mL清感冬饮显著抑制总蛋白iNOS、核蛋白p65表达,显著促进浆蛋白p65表达。[结论]清感冬饮可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,该抗炎作用可能与调控NF-κB/iNOS/NO信号通路、抑制促炎因子释放有关。

循经取穴对缺氧诱导心肌损伤大鼠HIF-1α、iNOS及NO表达的影响

[目的]探讨循手厥阴心包经取穴(内关穴)对缺氧诱导心肌损伤大鼠心肌组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA和蛋白水平,以及心肌组织中一氧化氮(NO)表达的影响。[方法]将100只SD大鼠随机分为对照组、模型组、循经取穴组、非循经取穴组、非经非穴组,每组20只。模型组、循经取穴组、非循经取穴组、非经非穴组持续吸入低氧混合气体制备缺氧模型,对照组吸入空气。循经取穴组、非循经取穴组、非经非穴组在造模后进行电针治疗,每日1次,每次30 min,连续5 d。运用实时定量PCR法检测各组大鼠心肌组织HIF-1α、iNOS mRNA的表达量;Western Blot法测定HIF-1α、iNOS的蛋白水平,硝酸还原酶法测定心肌组织NO的表达水平。[结果]大鼠在造模后HIF-1α、iNOS的mRNA和蛋白的表达量明显增加(P<0.01),循经取穴组HIF-1α的mRNA和蛋白表达量显著高于模型组、非循经取穴组和非经非穴组(P<0.01),iNOS的mRNA的表达量显著低于模型组、非循经取穴组、非经非穴组(P<0.01),心肌组织NO水平显著低于模型组、非循经取穴组和非经非穴组(P<0.01)。[结论]循手厥阴心包经取穴具有对抗缺氧诱导心肌损伤的作用,作用机制可能与介导HIF-1α的iNOS/NO通路调控相关。

A型流感病毒通过激活HIF-1α/iNOS/VEGF信号通路诱导肺上皮细胞铁死亡的机制

【背景】已发现A型流感病毒(influenza A virus,IAV)可激活多种程序性细胞死亡途径,这些途径在宿主细胞防御系统中起着重要作用。铁死亡是一种新型的非凋亡细胞死亡,主要由铁依赖性脂质过氧化介导。【目的】探讨HIF-1α/iNOS/VEGF信号通路在IAV感染诱导的细胞铁死亡中的作用机制。【方法】使用IAV感染小鼠肺上皮细胞(MLE-12)构建细胞损伤模型后检测细胞病毒滴度和炎性因子分泌;使用荧光探针法和比色法检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总铁离子和亚铁离子;透射电镜观察细胞超微结构;检测细胞铁死亡标志物mRNA和蛋白表达;生物信息学预测流感病毒诱导铁死亡潜在作用机制;激光共聚焦观察IAV对细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达影响,并检测其信号通路相关元件mRNA和蛋白表达;构建HIF-1α敲低模型,探讨HIF-1α/iNOS/VEGF信号通路在IAV诱导细胞铁死亡中的作用。【结果】铁死亡抑制剂能降低IAV感染细胞的病毒载量和炎性因子的分泌,并能抑制细胞ROS、总铁离子和亚铁离子含量,促进细胞SOD活性,修复细胞线粒体损伤,逆转铁死亡标志物mRNA和蛋白表达;生物信息学预测发现HIF-1α/iNOS/VEGF信号通路在IAV诱导的铁死亡中具有重要的相关性;试验验证IAV感染能促进细胞HIF-1α的激活和易位入核,并激活HIF-1α、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的mRNA和蛋白表达。【结论】IAV感染可以诱导细胞发生铁死亡,其作用机制可能是通过激活HIF-1α/iNOS/VEGF信号通路发挥作用。

清脑止痛胶囊对偏头痛大鼠核因子-κB/诱导型一氧化氮合酶/环氧化酶2信号通路及痛觉敏感性的影响

目的探究清脑止痛胶囊(QNZTJN)对偏头痛大鼠核因子-κB/诱导型一氧化氮合酶/环氧化酶2(NF-κB/iNOS/COX2)信号通路及痛觉敏感性的影响。方法吉林大学实验动物中心提供的健康雄性SPF级Wistar大鼠随机分为6组:空白组(NC组)、模型组(M组)、阳性药物正天丸组(ZTW组)、QNZTJN低(QNZTJN-L组)、中(QNZTJN-M组)、高(QNZTJN-H组)剂量组。给药7 d后,皮下注射硝酸甘油复制大鼠偏头痛模型,观察造模后大鼠行为学反应及痛觉阈值变化,大鼠脑组织中一氧化氮(NO)、5-羟色胺(5-HT)表达水平及NF-κB p65、iNOS、COX2蛋白表达量。研究起止时间2019年2—6月。结果与NC组比较,M组、ZTW组、QNZTJN-L组、QNZTJN-M组、QNZTJN-H组大鼠行为学评分、痛觉阈值、脑组织NO含量[(3.97±0.48)mol/L(1.83±0.27)mol/L(2.91±0.25)mol/L(1.85±0.18)mol/L(1.79±0.22)mol/L比(1.42±0.21)mol/L]、NF-κB p65[(0.87±0.15)(0.21±0.04)(0.76±0.09)(0.14±0.03)(0.15±0.04)比(0.12±0.02)]、iNOS[(0.62±0.07)(0.19±0.02)(0.54±0.06)(0.16±0.03)(0.16±0.04)比(0.14±0.02)]、COX2蛋白表达量[(0.65±0.08)(0.21±0.04)(0.52±0.07)(0.17±0.03)(0.17±0.04)比(0.15±0.03)]增加(P<0.05),脑组织5-HT含量[(3.12±0.69)ng/mg(4.73±0.76)ng/mg(3.95±0.71)ng/mg(4.81±0.82)ng/mg(4.86±0.84)ng/mg比(5.84±0.95)ng/mg]降低(P<0.05);与M组比较,ZTW组、QNZTJN-L、QNZTJN-M组、QNZTJN-H组大鼠行为学评分、痛觉阈值、脑组织NO含量、NF-κB p65、iNOS、COX2蛋白表达量降低(P<0.05),脑组织5-HT含量升高(P<0.05),其中QNZTJN-M组、QNZTJN-H组上述各指标均优于QNZTJN-L组(P<0.05),而QNZTJN-M组与QNZTJN-H组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 QNZTJN可降低NO水平、升高5-HT水平,缓解偏头痛大鼠行为学症状,升高其痛觉阈值,并在一定剂量范围内呈剂量依赖性,可能是通过抑制NF-κB/iNOS/COX2信号通路激活实现的。

基于NF-κB/iNOS/NO信号通路探讨生脉散加减对老年心肌梗死患者心功能的保护作用

目的:探究生脉散加减对老年心肌梗死患者心功能的保护作用并探讨核转录因子-κB/诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮(NF-κB/iNOS/NO)信号通路在其中的作用机制。方法:前瞻性对2019年12月至2021年12月青海省中医院老年心肌梗死患者136例进行研究,按照随机数字表法分为观察组、对照组,各68例。对照组实施常规西药治疗,观察组实施常规西药+生脉散加减治疗,两组患者均给予经皮冠状动脉介入治疗进行血运重建。比较两组患者心功能相关指标,血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,超声心动图指标,心功能分级,NF-κB/iNOS/NO信号通路变化,氧化应激指标变化及不良心血管事件(MACE)发生情况。结果:与本组治疗前比较,两组患者的N末端B型利钠肽原(NT-pro BNP)、血清炎症指标、左室收缩末期容积(LVESV)、左室舒张末期容积(LVEDV)、NO、iNOS、NF-κB p65及丙二醛(MDA)水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),左室射血分数(LVEF)及超氧化物歧化酶(SOD)均明显升高(P<0.05)。治疗后与对照组比较,观察组NT-pro BNP、血清炎症指标、LVESV、LVEDV、NO、iNOS、NF-κB p65及MDA水平均明显降低(P<0.05),LVEF及SOD均明显升高(P<0.05)。两组患者纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级比较差异无统计学意义。观察组MACE发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论:生脉散加减可明显降低老年心肌梗死患者NT-pro BNP、血清炎症指标水平,改善超声心动图指标,可调控NF-κB/iNOS/NO信号通路变化及降低氧化应激指标,减少不良心血管事件发生率,具有较好的心功能保护作用。

基于p38 MAPK/iNOS信号通路探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛作用机制

目的:探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛的作用机制。方法:将72只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组(硝酸甘油,10 mg·kg^(-1))、利扎曲坦组(0.89 mg·kg^(-1))、加味散偏汤高、中、低剂量组(12.96、6.48、3.24 g·kg^(-1))。腹腔注射硝酸甘油建立大鼠偏头痛模型。测试大鼠眼眶和足底痛觉敏感[机械痛阈值(MPT)]行为学实验;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子水平;免疫组化法(IHC)检测大鼠三叉神经脊束核尾核(TNC)诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠TNC区磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和iNOS蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠TNC区iNOS、p38 MAPK和IL-1βmRNA表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠机械痛阈值显著降低(P<0.01);血清NO、TNF-α、IFN-γ和IL-1β炎症因子水平显著升高(P<0.01),TNC区脑组织p38 MAPK、iNOS和IL-1β等炎症因子表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠MPT水平均明显提升(P<0.05,P<0.01),且加味散偏汤中剂量组效果最为显著(P<0.01)。与模型组比较,经加味散偏汤治疗后,大鼠TNC区组织iNOS、p38 MAPK和IL-1βmRNA及p-p38 MAPK、iNOS蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),血清中NO、TNF-α、IFN-γ和IL-1β等表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:加味散偏汤可通过抑制p38 MAPK/iNOS通路,减少NO、TNF-α、IFN-γ和IL-1β等促炎因子表达,减轻神经源性炎症反应,发挥治疗偏头痛的作用。

回药复方软化动脉胶囊对糖尿病并发动脉粥样硬化的影响

目的:研究回药复方软化动脉胶囊对糖尿病并发动脉粥样硬化大鼠的iNos/PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将40只糖尿病并发动脉粥样硬化大鼠随机分为正常对照组、模型对照照、阳性对照组、回药低剂量组、回药高剂量组,治疗后,分析iNos/PI3k/Akt表达的变化。结果:经透射电镜观察,回药组与阳性对照组可改善主动脉血管超微结构;与模型组比较,回药复方软化动脉胶囊可下调iNos/PI3K/Akt信号通路以延缓糖尿病并发动脉粥样硬化进程。结论:回药复方软化动脉胶囊可以改善动脉血管超微结构,且回药高剂量组的疗效优于回药低剂量组和阳性对照组,其机制可能与其抑制iNos/PI3K/Akt信号通路有关。

蝉芩颗粒含药血清对脂多糖诱导人支气管上皮细胞神经源性炎症的干预机制

【目的】探讨蝉芩颗粒对脂多糖诱导人支气管上皮细胞神经源性炎症的干预机制。【方法】将人支气管上皮细胞16HBE随机分为空白组,模型组,蝉芩颗粒高、中、低剂量组,N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)组,除空白组均采用脂多糖诱导构建体外神经源性炎症细胞模型,造模后分别给予相应含药血清干预。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)、环磷酸鸟苷(cGMP)依赖性蛋白激酶(PKG)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、P物质(SP)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的m RNA表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞iNOS、sGC、PKG的蛋白表达,荧光分光光度法检测细胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]i)。【结果】与空白组比较,模型组细胞活力下降,iNOS、sGC、PKG、TRPV1、SP、IL-6、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达增高,iNOS、sGC、PKG蛋白表达增高,[Ca^(2+)]i水平升高(均P<0.01)。与模型组比较,蝉芩颗粒高剂量组及L-NAME组细胞活力增加,上述分子指标均被有效抑制(P<0.01),中剂量组iNOS、sGC、TRPV1、SP、IL-6、ICAM-1 m RNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01),低剂量组SP mRNA表达水平降低(P<0.01)。【结论】蝉芩颗粒可能通过下调人支气管上皮细胞中iNOS/NO-cGMP-PKG通路、抑制TRPV1通道减少速激肽SP及炎症因子释放,从而减轻神经源性炎症。

盐酸羟考酮在大鼠胃癌根治术中的超前镇痛效果评价及对应激反应的影响

目的观察盐酸羟考酮通过核转录因子κB(NF-κB)/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)/一氧化氮(NO)通路在大鼠胃癌根治术中的超前镇痛效果及对应激反应的影响。方法取40只大鼠,其中30只采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导大鼠胃癌模型,剔除造模过程中死亡大鼠及术后组织鉴定非胃癌病变的大鼠共5只,25只大鼠随机分为模型组8只,前给药组8只,后给药组9只,剩余10只为对照组,各组均在水合氯醛腹腔麻醉下施行胃癌根治术。开腹前30 min,对照组、模型组腹腔注射生理盐水,前给药组腹腔注射盐酸羟考酮注射液;开腹后30 min,后给药组腹腔注射盐酸羟考酮注射液。比较各组大鼠术后24、48、72 h机械性缩足阈值(PWMT)、热缩足反射潜伏期(PWTL),血清一氧化氮(NO)、P物质(SP)浓度,脊髓组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,脊髓组织iNOS、NF-κB p65蛋白相对表达量。结果与对照组比较,模型组、前给药组、后给药组PWMT均增大,血清NO、SP浓度,脊髓组织MDA含量、iNOS、NF-κB p65蛋白相对表达量均升高,PWTL均延长,脊髓组织GSH-Px、SOD活力均下降(P<0.05);与模型组比较,前给药组、后给药组PWMT均减小,血清NO、SP浓度,脊髓组织MDA含量、iNOS、NF-κB p65蛋白相对表达量均降低,PWTL均缩短,脊髓组织GSH-Px、SOD活力均升高(P<0.05);前给药组PWMT小于后给药组,血清NO、SP浓度,脊髓组织MDA含量、iNOS、NF-κB p65蛋白相对表达量低于后给药组,PWTL长于后给药组,脊髓组织GSH-Px、SOD活力高于后给药组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论盐酸羟考酮在大鼠胃癌根治术中具有超前镇痛作用,其作用机制可能是通过抑制NF-κB/iNOS信号通路发挥镇痛作用。