iPLA2β通过调控铁死亡减轻高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤

目的探讨钙离子非依赖型磷酸酯酶A2β(iPLA2β)在高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中的表达,iPLA2β与铁死亡的关系以及iPLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护机制。方法用30 mmol/L葡萄糖刺激HK-2细胞,iPLA2β质粒转染构建过表达模型,铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)和铁死亡激活剂erastin作为铁死亡对照组。干预36 h后,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、铁含量,DCF免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)水平。Western blot法检测铁死亡指标ACSL4、GPX4、LPCAT3、TFR1的表达。结果高糖刺激可以降低HK-2细胞内iPLA2β的表达,HK-2细胞内ROS、MDA水平升高,GSH、SOD水平降低。Western blot结果显示ACSL4、LPCAT3、TFR1表达增高,GPX4表达降低。Fer-1干预后上述指标改善。过表达iPLA2β后,可降低KIM-1表达,减轻HK-2细胞损伤。进一步研究发现,过表达iPLA2β后可抑制高糖诱导的HK-2细胞的氧化应激和铁死亡。另外,erastin减弱了iPLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用。结论iPLA2β通过调控铁死亡减轻高糖诱导的HK-2细胞损伤。

iPLA2β对老年性黄斑病变的可能性调节作用

目的研究钙离子非依赖型磷酸酯酶A2,IVA亚型(iPLA2β)在视网膜色素上皮细胞(Retina pigment epitheli-um,RPE)吞噬光感受器脱落膜盘(photoreceptor outer segments,POS)过程中所起到的作用,继而探讨其对老年性黄斑病变(Age-related macular degeneration,AMD)的发病过程影响。方法应用western Blotting方法检测ARPE-19细胞吞噬牛POS后iPLA2β表达含量的变化。利用RNA干扰技术,即iPLA2β干扰RNA的质粒构建的ARPE-19细胞进行吞噬功能检测,从而评价iPLA2β在RPE细胞吞噬过程中所起的作用。结果我们发现ARPE-19细胞吞噬POS后,iPLA2β的蛋白表达增强。经iPLA2βSiRNA转染的ARPE-19细胞吞噬功能明显降低。结论iPLA2β对于RPE细胞的吞噬作用起着重要的调节作用,它可能在光感受器细胞的更新和良好视力的维持过程中起到重要的作用。RPE细胞的功能缺陷又是AMD的主要发病原因,对于iPLA2β的功能和它在RPE细胞吞噬作用中所起到的作用的理解可以对此类疾病的治疗提供非常有价值的线索。

麻鸭钙非依赖性磷脂酶A2ε(iPLA2ε)的克隆和表达纯化

肉品风味与肌内磷脂的水解密切相关,磷脂酶A2对肌内磷脂的水解起主导作用,其中钙非依赖性磷脂酶A2ε(i PLA2ε)是重要的一种。采用逆转录PCR技术,从麻鸭肌肉中克隆到i PLA2ε的编码基因。该基因开放阅读框长1 425 bp,编码474个氨基酸,分子量约为54 ku,理论等电点为7.86。生物信息学分析表明,i PLA2ε蛋白含有2个明显的跨膜区,为疏水性膜蛋白;i PLA2ε的氨基酸序列包含1个Patatin样磷脂酶结构域,该结构域中含有保守的丝氨酸-天冬氨酸催化水解二元体。采用大肠杆菌p Cold1表达系统构建i PLA2ε基因的重组表达质粒,并在i PLA2ε基因的5'端连接大肠杆菌mal E基因,该基因编码的麦芽糖结合蛋白能提高在原核中过量表达的真核融合蛋白的溶解性,最终在大肠杆菌中实现了i PLA2ε的可溶性表达。结果显示,利用蛋白C端的组氨酸标签亲和纯化法及凝胶过滤层析法获得了i PLA2ε的纯化蛋白,表明该研究为进一步研究肉品中i PLA2ε的功能奠定了工作基础。

胡蜂蜇伤患者早期血清钙非依赖磷脂酶 A2水平的变化及其临床研究

目的：探讨秦巴山区胡蜂蜇伤患者血清钙非依赖磷脂酶A2（iPLA2）水平的变化及其临床意义。方法将34例来我院就诊的胡蜂蜇伤患者，依据实验室检查分为非溶血组、溶血组，采集血清备用；另以10例健康体检者血清作为正常对照组。依据实验室检查和临床指征，比较非溶血组、溶血组患者多器官功能障碍综合征（MODS）的发生情况。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清 iPLA2、前列腺素 E2（PGE2）和血栓素 A2（TXA2）水平，各组之间比较并进行统计学分析。结果溶血组患者发生MODS比例明显高于非溶血组（16/19 vs.5/15，P＜0.01）。胡蜂蜇伤患者血清TXA2水平均明显高于正常对照组（P＜0.01）；溶血组TXA2水平高于胡蜂蜇伤非溶血组患者，但差异无统计学意义（P＞0.05）。溶血组患者血清 PGE2水平明显高于非溶血组患者（P＜0.01）。溶血组患者血清iPLA2水平明显高于胡蜂蜇伤非溶血组和正常对照组（P＜0.01）。胡蜂蜇伤患者iPLA2水平与PGE2水平呈正相关（r＝0.867，P＝0.000），也与TXA2水平呈正相关（r＝0.543，P＝0.004）。结论胡蜂蜇伤患者发生溶血是引起MODS重要因素之一。胡蜂蜇伤溶血患者血清iPLA2明显升高，它可能参与胡蜂蜇伤重症患者MODS的发生、发展，动态监测iPLA2水平的变化，可以评估患者病情、指导治疗及帮助判断患者的预后。

单纯性胰腺创伤后大鼠胰腺磷脂酶A2活性及其亚型表达特点

目的构建大鼠单纯性胰腺创伤模型并观察大鼠血清与胰腺组织中磷脂酶A2(PLA2)活性及其亚型表达特点。方法将120只Wistar大鼠按1:2随机分为对照组及撞击组,并分别分为6h、24h、72h、7d 4个亚组,对照组每个时间点10只,撞击组每个时间点20只。各撞击组采用BIM-Ⅲ生物撞击机构建胰腺创伤大鼠模型;对照组仅行开腹手术,翻动胰腺数次后关腹。检测各组大鼠血清与胰腺组织PLA2活性及PLA2各亚型在胰腺组织中的表达与分布特点。结果撞击组大鼠血清与胰腺组织中PLA2活性在创伤后6h开始升高,血清PLA2于72h达高峰,胰腺组织PLA2于24h达高峰,7d时血清与胰腺组织PLA2活性仍高于对照组(P<0.05)。胰腺组织中分泌型磷脂酶A2(sPLA2)在RNA水平及蛋白水平表达均高于胞质型磷脂酶A2(cPLA2)与钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)。结论胰腺创伤后,血清与胰腺组织PLA2活性均显著增高,PLA2各亚型中,sPLA2在胰腺表达增强最为显著。胰腺创伤后6h^7d均可检出血PLA2活性,有助于胰腺创伤的辅助诊断。