表皮葡萄球菌icaA和icaD基因表达及其与黏质物形成的关系

目的了解临床分离的表皮葡萄球菌所携带的icaA和icaD操纵子表达情况及其与黏质物形成之间的关系。方法收集ICU临床分离的表皮葡萄球菌62株,采用刚果红法检测其黏质物形成,PCR法检测icaA、icaD基因表达,卡方检验法进行统计学处理。结果 62株表皮葡萄球菌中产黏质物菌株有26株(41.9%);产黏质物菌株中icaA、icaD基因表达阳性的菌株分别为22株(84.6%)和19株(73.1%),icaA、icaD基因表达均为阳性有17株(65.4%),明显高于非产黏质物菌株(P<0.01);icaA、icaD基因表达均阴性为2株(7.7%),明显低于非产黏质物菌株(P<0.01)。结论 icaA、icaD基因表达对表皮葡萄球菌的黏质物产生具有重要影响,但并不是其唯一的影响因素。

130例表皮葡萄球菌临床分离株的耐药性分析和mecA/icaA/icaD基因研究

目的了解蚌埠医学院第一附属医院2013年检出130株表皮葡萄球菌的临床分布特征,研究其耐药性和mec A/ica A/ica D基因的携带等情况,为临床合理使用抗生素提供实验依据。方法 130株表皮葡萄球菌采用法国梅里埃VITEK2-compact全自动细菌鉴定药敏分析仪和配套的药物敏感复合板,血培养系统采用美国BD公司的全自动血培养仪进行菌种鉴定和药物敏感试验。研究数据采用SPSS 18.0软件进行统计分析;用PCR方法检测mec A/ica A/ica D基因。结果本年度,共检出130株表皮葡萄球菌,主要来自于外科32株(24.61%),ICU科23株(17.69%),儿科18株(13.85%)和感染科16株(12.31%);以血液,脑脊液,骨髓来源为主(113株,86.92%)。检出耐甲氧西林的表皮葡萄球菌(MRSE 110株,84.62%),明显高于甲氧西林敏感的表皮葡萄球菌(MSSE),其差异有统计学显著性(P<0.05)。对MRSE敏感率较高的抗生素主要为:利奈唑胺(100%),万古霉素(100%),呋喃妥因(98.18%),利福平(77.27%),莫西沙星(72.73%)和庆大霉素(70.00%)等。mec A/ica A/ica D基因在血培养来源(20株),分别与非血培养来源(10株)和环境皮肤来源(9株)表皮葡萄球菌的检出率,结果比较无显著性差异。结论我院分离的表皮葡萄球菌,以MRSE为主,未发现耐万古霉素表皮葡萄球菌,表皮葡萄球菌mec A阳性率极高,ica A和ica D基因阳性率较低。

儿科血液和脑脊液来源表皮葡萄球菌的抗生素敏感性和mecA/icaA/icaD基因研究

目的了解儿科血液和脑脊液来源表皮葡萄球菌的临床分布特征、抗生素敏感性和mecA/icaA/icaD基因的携带等情况,为临床表皮葡萄球菌感染的诊断和治疗提供一定的实验依据。方法儿科临床分离的表皮葡萄球菌采用VITEK 60全自动微生物分析仪结合GPI卡和GPS卡做常规鉴定和药敏,并运用WHONET5.4和SPSS13.0软件进行统计分析评价;用PCR方法检测mecA、icaA和icaD基因。结果 2010.01—2011.12期间,共检出442株表皮葡萄球菌,主要来自新生儿科110株(24.89%)、消化科72株(16.29%)、ICU 68株(15.38%)和呼吸科58株(13.12%);以血液来源为主(382株,86.43%)。所有表皮葡萄球菌中检出耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)378株(85.52%),总的β-内酰胺酶阳性率为86.43%。除万古霉素、利奈唑胺和利福平外,MRSE对克林霉素、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、苯唑西林、复方磺胺甲噁唑、莫西沙星、红霉素、呋喃妥因、左氧氟沙星、青霉素G、四环素的抗生素敏感率低于甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE),其差异有统计学意义(P<0.05)。对MRSE敏感率高的抗生素主要为:利奈唑胺(100%)、万古霉素(100%)、利福平(95.8%)、呋喃妥因(98.7%)、莫西沙星(72.8%)、左氧氟沙星(72%)等,而对MSSE敏感率高的抗生素主要为:利奈唑胺(100%)、万古霉素(100%)、苯唑西林(100%)、呋喃妥因(100%)、利福平(98.4%)、氨苄西林/舒巴坦(98.4%)、莫西沙星(92.2%)、左氧氟沙星(92.2%)等。未发现万古霉素和利奈唑胺耐药的表皮葡萄球菌。血/脑脊液组(412株)和非血/脑脊液组(31株)、2010年(256株)和2011年组(186株)不同来源组表皮葡萄球菌对上述所有抗生素敏感率差异均无统计学意义。mecA、icaA、icaD基因在血培养来源(50株)分别与非血培养来源(23株)和环境皮肤来源(22株)表皮葡萄球菌中的检出率比较无显著性差异。结论儿科临床分离的表皮葡萄球菌主要源自血液标本,以新生儿、消化科、ICU等科室检出率高;以MRSE和耐β-内酰胺酶阳性株为主,往往呈多重耐药,但尚无耐万古霉素和利奈唑胺的表皮葡萄球菌发现;MRSE和MSSE对大部分抗生素敏感性有差异,不同年份、不同标本组来源表皮葡萄球菌对常用抗生素敏感性尚较为稳定;表皮葡萄球菌mecA阳性率极高,icaA和icaD基因阳性率较低。

表皮葡萄球菌icaA/icaD基因与前列腺液中性粒细胞弹性蛋白酶检测的临床意义

目的探讨表皮葡萄球菌ica A/ica D基因和前列腺液中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)联合检测的临床意义。方法选取2013年1月至2015年12月在黄河三门峡医院就诊的表皮葡萄球菌性前列腺炎患者657例,收集患者分离出的657株表皮葡萄球菌检验结果以及临床资料。采用聚合酶链反应方法检测表皮葡萄球菌ica A/ica D基因水平,酶联免疫吸附试验法检测前列腺液NE含量。结果657株表皮葡萄球菌的ica A阳性率为19.6%(129株),ica D阳性率为21.3%(140株)。657例患者中,273例(41.6%)前列腺液中NE含量≤800μg/L;63例(9.6%)前列腺液中NE含量>800且<1000μg/L;321例(48.9%)前列腺液中NE含量≥1000μg/L。ica A阳性的表皮葡萄球菌感染者中NE≥1000μg/L者比例为72.1%(93/129),ica D阳性的表皮葡萄球菌感染者中NE≥1000μg/L的比例为72.9%(102/140)。结论表皮葡萄球菌ica A/ica D基因和前列腺液中NE联合检测对表皮葡萄球菌性前列腺炎诊疗方案的制定有一定的指导意义。

儿科表皮葡萄球菌的临床分布、抗生素敏感性和mecA/icaA/icaD基因研究

目的了解儿科表皮葡萄球菌(表葡菌)的临床分布特征、抗生素敏感性和mecA/icaA/icaD基因的携带等情况,为临床表葡菌感染的诊断和治疗提供实验依据。方法儿科临床分离的表葡菌采用VITEK 60全自动微生物分析仪结合GPI卡和GPS卡做常规鉴定和药敏,并进行统计分析;用PCR方法检测mecA、icaA和icaD基因。结果 2010年1月～2011年12月期间,共检出442株表葡菌,主要来自新生儿科110株(24.89%)、消化科72株(16.29%)、ICU 68株(15.38%)和呼吸科58株(13.12%);以血液来源为主(382株,86.43%),检出甲氧西林耐药表葡菌(MRSE 378)株(85.52%),总的β-内酰胺酶阳性率为86.43%。MRSE对抗菌药物敏感率低于甲氧西林敏感表葡菌(MSSE),其差异有统计学显著性(P【0.05)。对MRSE敏感率高的抗生素主要为:利奈唑胺(100%)、万古霉素(100%)、利福平(95.8%)、呋喃妥因(98.7%)、莫西沙星(72.8%)、左氧氟沙星(72%)等,而对MSSE敏感率高的抗生素主要为:利奈唑胺(100%)、万古霉素(100%)、呋喃妥因(100%)、利福平(98.4%)、氨苄西林/舒巴坦(98.4%)、莫西沙星(92.2%)、左氧氟沙星(92.2%)等。mecA、icaA、icaD基因在血培养来源(50株)分别与非血培养来源(23株)和环境皮肤来源(22株)表葡菌中的检出率比较无显著性差异。结论儿科临床分离的表葡菌主要源自血液标本,新生儿科检出率高,以MRSE和耐β-内酰胺酶阳性株为主,未发现耐万古霉素表葡菌表葡菌mecA阳性率极高,icaA和icaD基因阳性率较低。

家蚕细胞凋亡相关基因BmICAD的克隆、序列和功能分析及其在精巢中特异表达的初步研究

DREP-1基因在果蝇的细胞凋亡过程中对DNA的降解有重要调控作用。本研究将该基因序列在家蚕EST数据库中进行同源性检索,把检索到的EST序列进行电子延伸和克隆重叠群拼接,根据拼接结果设计引物进行PCR扩增并克隆测序验证,首次成功克隆了家蚕第一个ICAD基因BmICAD的cDNA:该cDNA全长844 bp,ORF长522 bp,编码含有174个氨基酸的蛋白;预测分子量为19.6 kDa,等电点为4.23,所编码蛋白与果蝇DREP-1的一致性(identity)为36%;虽然Northern印记杂交未检测到信号,但是RT-PCR结果显示,该基因在精巢中特异表达。

智能设计中的基因模型

分析综述了智能设计的层次、研究现状和发展趋势 ,提出和研究了智能设计的知识模型 ,即符号模型、神经网络模型和基因模型 ,并对基因模型进行了重点阐述 。

临床分离表皮葡萄球菌相关基因与生物膜表型的关系

目的分析临床分离表皮葡萄球菌icaA、aap、atlE、sarA基因与生物膜表型的关系。方法收集临床分离的表皮葡萄球菌78株,采用PCR法扩增icaA、aap、atlE、sarA基因,组织细胞培养板黏附法检测生物膜表型,χ2检验分析上述基因与生物膜表型的关系,Wilcoxon符号秩检验分别分析icaA+菌及icaA-菌在胰酶大豆肉汤(TSB)与TSB+3%氯化钠中生物膜表型光密度(OD)值的差异。结果 78株表皮葡萄球菌icaA、aap、atlE、sarA基因阳性率分别为24.4%(19/78)、79.5%(62/78)、73.8%(57/78)、82.1%(64/78)。产生物膜株阳性率为51.3%(40/78),其中高产生物膜16株,均携带icaA基因;弱产生物膜24株。经统计学分析,上述基因与生物膜表型之间有相关性,icaA基因与高产生物膜表型有相关性。icaA+菌及icaA-菌在TSB与TSB+3%氯化钠中生物膜OD值的差异有统计学意义(P<0.05)。结论表皮葡萄球菌生物膜表型涉及多种因子参与,而icaA基因有助于高产生物膜表型形成。环境因素也可影响表皮葡萄球菌生物膜表型。

金黄色葡萄球菌生物膜形成及相关基因分析

目的探讨金黄色葡萄球菌生物膜表型与相关基因的关系。方法收集100株临床分离的金黄色葡萄球菌,用刚果红培养基法进行生物膜筛选;用电子显微镜观察生物膜的形成;用PCR方法检测生物膜相关基因。结果 100株金黄色葡萄球菌中,79株产生生物膜,阳性率为79.0%。ebh、icaA、icaD、fnbA的检出率分别为53.2%、94.9%、94.9%、81%。金黄色葡萄球菌生物膜阳性菌株和生物膜阴性菌株之间生物膜相关基因ebh、icaA、icaD、fnbA的阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。结论ebh、icaA、icaD、fnbA 4种基因与金黄色葡萄球菌生物膜形成密切相关。

动物医院环境源性葡萄球菌耐药性分析与毒力基因检测

为了解动物医院环境源性葡萄球菌耐药情况及毒力基因携带率,一年内连续多次对北京3家大型动物医院进行空气和物表采样,分离得到137株葡萄球菌。通过纸片扩散法药敏试验调查葡萄球菌的耐药情况,并结合毒力基因检测对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)进行鉴定。结果阿奇霉素、复方新诺明的耐药率最高,分别为54.01%和48.91%;其次为克林霉素及氨苄西林,耐药率分别为37.96%和34.31%;庆大霉素及阿米卡星的耐药率非常低,敏感率达到100%和99.27%。共检测出32株耐甲氧西林葡萄球菌(MRS),其中25株存在mec A耐药基因。另外,在所有葡萄球菌中,pvl毒力基因的携带率为27.01%,ica D基因携带率为27.74%。表明动物医院环境源性葡萄球菌耐药性严重,毒力基因携带率较高,应予以重视。

乳腺外科表皮葡萄球菌icaA、icaD及聚集相关蛋白基因对细菌生物膜形成的影响

目的探讨乳腺外科表皮葡萄球菌icaA、icaD和聚集相关蛋白（accumulation．associatedprotein，aap）基因对细菌生物膜形成的影响。方法于2011年12月-2013年1月乳腺外科收治的无感染症状女性患者临床标本中分离获得44株表皮葡萄球菌。PCR检测菌株icaA、icaD、aap基因，并根据基因表达结果将其分为icaA- icaD＋／aap＋组（A组）、icaA＋icaD＋／aap-组（B组）、icaAicaD-／aap＋组（C组）及icaA-icaDTaap组（D组）。取4组菌株制备硅胶材料表面细菌生物膜体外模型，于孵育8、12、24、30、36h采用结晶紫染色法半定量检测细菌黏附能力，孵育12、24h激光共聚焦显微镜观测形成的生物膜厚度，孵育24h扫描电镜观察细菌生物膜超微结构。结果PCR检测结果示，44株表皮葡萄球菌中，13株为icaA＋ icaD＋／aap＋（A组），12株为icaAqcaD＋／aap（B组），16株为icaAicaD-／aap＋（C组），3株为icaAicaD-／aap-（D组）。共29株（65．9％）形成细菌生物膜，其中A组13株，B组7株，C组9株，D组0株。半定量黏附实验示：孵育8h，4组细菌黏附能力比较差异无统计学意义（P〉0．05）；12～36h时，A、B、C组黏附能力均显著高于D组，A组显著高于B、C组（P〈0．05），B、C组间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。激光共聚焦显微镜观察示，12、24h时A、B、C组细菌生物膜厚度均大于D组，A组明显大于B、C组（P〈0．05）；B、C组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。扫描电镜观察示，孵育24h时A、B、C组硅胶片表面均可见成熟的细菌生物膜结构，其中A组细菌生物膜分布最广泛、结构最致密、层次最丰富，B、C组细菌生物膜结构相似；D组无明显细菌生物膜形成。结论icaA、icaD基因及aap基因对表皮葡萄球菌在硅胶表面的细菌生物膜形成均起重要作用，其中aap基因与icaA、icaD基因同时表达的菌株具有最强的细菌生物膜形成能力。

葡萄球菌属生物膜检测与icaA/icaD基因分析

目的评价金黄色葡萄球菌(SAU)、凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的两种细菌生物膜表型检测法,探讨生物膜表型特点与icaA/icaD基因的关系。方法 2007年8月-2014年12月共收集90株SAU和168株CNS,采用刚果红琼脂平皿和半定量生物膜检测法确定生物膜表型,PCR法检测icaA/icaD基因。结果刚果红试验的168株CNS中生物膜阳性32株,阳性率为19.0%;90株SAU中生物膜阳性32株,阳性率为35.6%;半定量检测的CNS中生物膜阳性38株;SAU中生物膜阳性36株;两种检测方法比较差异无统计学意义;PCR检测结果表明icaA/icaD基因两者同时含有或同时缺乏,尚未发现单一携带者,红色变异体的icaA/icaD基因阴性。结论可采用更简便、更直观的刚果红法筛查生物膜,icaA、icaD基因是生物膜产生的基础。

表皮葡萄球菌临床株生物被膜形成及其icaA基因的分析

目的检测表皮葡萄球菌临床株生物被膜的形成能力，了解icaA基因及其表达与生物被膜形成的关系。方法收集205株临床分离表皮葡萄球菌，刚果红平板试验检测其黏附性，半定量黏附试验检测其生物被膜的形成能力，扫描电镜观察生物被膜形态，PCR方法扩增icaA基因片段，RT—PCR方法分析icaA基因表达情况。结果205株表皮葡萄球菌中刚果红平板试验阳性24株，半定量黏附试验阳性22株，28株检测到icaA基因。半定量黏附试验阳性菌株的icaA基因表达水平呈现高于半定量黏附试验阴性菌株的趋势。结论表皮葡萄球菌临床株具有一定的形成生物被膜的能力，icaA基因的存在及其正常表达是表皮葡萄球菌形成生物被膜的重要分子生物学基础，icaA基因表达尚有其他因素调控。

乳源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌icaA/D基因缺失株的构建及其生物被膜形成能力与耐药性分析

【背景】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin Resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是一种具有多重耐药性的人畜共患病原菌,常引起奶牛乳房炎等疾病。形成生物被膜是MRSA重要的耐药机制之一。研究发现ica操纵子调控的胞间多糖黏附素(Polysaccharide Intercellular Adhesin,PIA)通过促进MRSA的黏附与聚集介导生物被膜形成,icaA和icaD基因共表达可显著提高MRSA的N-乙酰葡聚糖转移酶活性,但icaA/D蛋白对MRSA生物被膜形成和耐药性的影响仍不清楚。【目的】探讨icaA/D基因、MRSA生物被膜形成及耐药性三者之间的相关性,为寻找药物作用新靶点提供科学依据。【方法】以具有多重耐药性且生物被膜形成能力强的乳源MRSA M5分离株为研究对象,利用同源重组技术构建其icaA/D基因缺失株;利用FITC-ConA染色结合激光共聚焦显微镜观察野生株与icaA/D基因缺失株的生物被膜形成过程与能力;采用微量肉汤稀释法测定14种抗菌药物对野生株与icaA/D基因缺失株的最小抑菌浓度(MinimumInhibitoryConcentration,MIC)。【结果】构建了MRSA M5的icaA/D基因缺失株。激光共聚焦显微镜下观察到野生株在培养16 h后形成了一层厚的成熟生物被膜,随后开始解离,直至120 h完全解离;而icaA/D基因缺失株在培养后16 h仅形成一薄层生物被膜,48h完全解离。10种受试抗菌药物对缺失株的MIC较野生株减小,而且缺失株对8种药物的敏感性由原来的耐药或中介转变为中介或敏感。【结论】icaA/D基因缺失可明显降低MRSA的生物被膜形成能力与耐药性。

血培养中表皮葡萄球菌与ica、mecA基因研究

目的从基因水平探索如何区分血培养中分离的表皮葡萄球菌(SEP)是污染菌或致病菌,为临床医师正确诊断提供科学依据。方法将73株来源于阳性血培养,导管相关性感染(CRBSI)以及从临床健康医护人员手部、鼻黏膜分别检出的12、70、55株SEP,运用法国生物梅里埃公司全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定,PCR法检测icaA、icaB和mecA基因,比较ica基因和mecA基因在不同标本来源中的检出率。结果血培养中同时携带ica和mecA基因占52.0%,同时,94.6%的菌株被检测出mecA基因;CRBSI的12株SEP中,有75.0%同时存在mecA和ica基因;从健康人手部皮肤分离的菌则很少同时具有ica和mecA基因,仅有15.8%的菌株携带mecA;健康人鼻黏膜定植的菌同时具有ica和mecA基因的占21.8%,高于手部皮肤分离率,而ica及mecA基因的携带率分别为60.0%、30.9%,明显高于皮肤定植的SEP。结论血培养中分离到SEP时,通过检测ica和mecA的存在与否对于区分污染菌和致病菌有重要作用。

桃柁酚对金黄色葡萄球菌生物膜及icaA表达的抑制作用

为研究桃柁酚对金黄色葡萄球菌生物膜及icaA表达的抑制作用,用微量肉汤稀释法测定桃柁酚对10株金黄色葡萄球菌浮游菌和生物膜的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,并利用激光共聚焦显微镜观察桃柁酚抑制生物膜的情况;通过实时荧光定量RT-PCR技术检测桃柁酚对细菌生物膜形成过程中相关基因的水平变化;采用斑点免疫印迹法检测细胞间多糖黏附素在生物膜形成过程中的作用。结果显示,桃柁酚对金黄色葡萄球菌浮游菌和生物膜的最小抑菌浓度值范围分别为1～2μg/mL和4～16μg/mL;能杀灭和清除已形成的生物膜;桃柁酚可通过影响agr和sar调控系统,抑制细胞间多糖黏附素合成基因icaA的表达进而抑制细胞间多糖黏附素的合成。表明桃柁酚能有效抑制金黄色葡萄球菌浮游菌和生物膜,是一种抑制金黄色葡萄球菌生物膜的有效药物。

CAD与ICAD的最新研究进展

在细胞凋亡中 ,除了人们早期研究发现的可导致DNA断裂的DNaseⅠ、DNaseⅡ、DNaseγ以及cy clophilins等因素以外 ,最近人们又发现了一种新的可导致DNA断裂和染色质固缩的分子———CAD及其抑制剂I CAD。本文详细介绍了CAD与ICAD的基因结构、分子生物学特性 ,以及CAD、ICAD之间的相互作用机理 ;同时对CAD的活化方式及其在细胞凋亡中作用的最新研究进展进行了详细的概述 。

凝固酶阴性葡萄球菌及其ica操纵子检测的临床研究

目的评价凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)及致病物质在临床感染中的意义。方法对医院的114株CNS标本进行菌种鉴定,同时PCR扩增icaD基因。结果表皮葡萄球菌分离率最高(41.2%);分离的CNS,其ica操纵子携带率以深静脉置管(44.4%)、伤口分泌物(42.1%)和血液(36.8%)较高,而呼吸道标本占24.0%,尿液占14.1%;ica操纵子阳性菌株的比率以表皮葡萄球菌最高(42.6%),溶血葡萄球菌为19.0%。结论ica操纵子可出现在多种CNS中,以表皮葡萄球菌为主;CNS存在于不同部位具不同意义,呼吸道和尿标本中检出的CNS应慎重评价,血液中分离的CNS污染的可能性大;以PCR技术扩增ica操纵子,方法简单易行,能够满足临床要求。