硫化氢对再生肝细胞中细胞周期蛋白D1和p21Cip／WAK-1的影响

目的观察肝细胞增殖时硫化氢对细胞周期蛋白D1（CyclinD1）和v21Cip／WAK-1的影响。方法肝穿刺获取慢性乙型肝炎患者肝组织，并分离培养肝细胞。所获肝细胞分为4组，前3组分别给予促肝细胞生长素（HGF组），炔丙基甘氨酸（PPG）和HGF（PPG＋HGF组），硫氢化钠（NariS）＋HGF（NaHs＋HGF组），剩余1组作为空白对照组。肝细胞培养24h后行台盼兰拒染实验及MTY比色法测定细胞增殖，利用去蛋白法检测细胞上清液中的硫化氢，免疫印迹（Western）检查细胞内p21Cip／WAK-1和CyclinD1变化情况。细胞洗涤后，提取各组细胞DNA，判定硫化氢对DNA的影响。结果培养后肝细胞的活性均超过90％。MTF比色法测定结果显示：与对照组比较，HGF组肝细胞增殖明显增强（0．713±0．207：0．411±0．113），且差异有统计学意义（t=6．943，P〈0．01）；与HGF组相比，PPG＋HGF组细胞增殖明显增强（0．965±0．329：0．713±0．207），差异有统计学意义（t=4．017，P〈0．05），NariS＋HGF组细胞增殖明显减弱（O．513±0．156：0．713±0．207），差异有统计学意义（t=5．328，P〈0．05）。Western实验结果显示，PPG＋HGF组p21cip／WAK-1表达增加而CychnDI表达降低，NaHS＋HGF组两者表达量呈相反趋势。HGF组和PPG＋HGF组DNA复制明显增加，而NaHS＋HGF组DNA无明显复制。结论硫化氢可能通过抑制细胞CyclinD1和增加p21Cip／WAK-1表达抑制肝细胞增殖。