大鼠肠道菌群对ilexsaponin A_(1)体外代谢转化的影响

目的考察大鼠肠道菌群对毛冬青三萜皂苷ilexsaponin A_(1)体外代谢转化的影响。方法采用HPLC-ESI-QTOF-MS/MS法检测ilexsaponin A_(1)体外肠道菌孵育样品,条件为Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈(含0.1%甲酸)-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源(ESI);负离子模式。对代谢产物进行筛查鉴定,结合二级质谱图,推测代谢产物及其可能的生物转化途径。结果鉴定出14个代谢产物(M1~M14),ilexsaponin A_(1)发生了去糖基化、氧化、还原等代谢反应(M1~M2、M4~M5、M7~M8),其脱糖生成的苷元ilexgenin A进一步发生氧化、羟甲基化、还原等生物转化反应(M3、M6、M9~M11、M13~M14)。结论ilexsaponin A_(1)在大鼠肠道菌群中发生代谢转化,该成分在体内发挥药效并不完全以原型物吸收入血,其苷元ilexgenin A或脱糖后的代谢转化物为其可能的药效物质。

加速溶剂萃取/HPLC-MS对毛冬青药材中Ilexgenin A与Ilexsaponin A_1含量的测定

建立了加速溶剂萃取／高效液相色谱-质谱法（ASE／HPLC—MS）测定毛冬青药材中活性成分ilexgenin A和ilexsaponin A1含量的方法。采用ASE萃取毛冬青药材中的活性成分ilexgenin A和ilexsaponin A1，萃取溶剂为甲醇，萃取温度100℃，压力1．0×10^7 Pa，静态萃取模式，循环3次，每次萃取10min。采用HPLC—MS对萃取液中ilexgenin A和ilexsaponin A1进行定量分析，色谱柱选用Dikma Diamonsil C18（4．6mm×250mm，5μm），以水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，大气压化学电离源（APCI），定量离子m／z485。ilexgenin A和ilexsaponin A1的线性范围为1．0～200．0mg／L，对毛冬青试样的定量下限分别为19．5和35．0μg/g，RSD分别为6．7％和7．8％，回收率分别为87％～96％和93％-102％。将建立的方法用于分析11个不同产地的毛冬青药材，ilexgenin A含量为0．42～6．3mg／g，ilexsaponin A1含量为0．80～8．9mg／g。

毛冬青皂苷ilexsaponin A1的制备及其药理活性研究

目的:分离制备毛冬青三萜皂苷ilexsaponin A1(IPTS-1),并探讨其药理活性,为阐明毛冬青的活性成分提供实验依据。方法:综合运用色谱法和重结晶法等分离纯化方法进行化合物的制备,采用薄层对照及核磁波谱分析的方法对化合物的结构进行鉴定。通过凝血时间、出血时间、小鼠耳廓微循环实验和大鼠FeCl3诱导血栓实验对IPTS-1的抗凝、活血、抗血栓作用进行评估和探讨。结果:与对照组比较,IPTS-1各剂量均能显著延长小鼠出血时间和凝血时间(P<0.05),且作用呈剂量相关性。IPTS-1可加速小鼠耳廓微循环血流速度,减少FeCl3诱导的大鼠腹主动脉血栓生成质量。结论:毛冬青三萜皂苷IPTS-1具备一定的抗凝、活血、抗血栓作用,可能为毛冬青心血管药理作用的物质基础之一。

毛冬青三萜皂甙Ilexsaponin B3糖部分的核磁共振法分析

采用1H、13C、DEPT(无畸变极化转移增益法)、1H-1H COSY(氢-氢化学位移相关谱)、1H-1HTCOSY(氢-氢化学位移全相关谱)、HSQC(异核单量子相关谱)、HMBC(异核多键相关谱)等多种NMR分析方法,首次对毛冬青三萜皂甙Ilexsaponin B3的1H和13C NMR信号进行了全归属,特别是应用1H-1H COSY和1H-1HTCOSY相结合的分析方法,对该化合物中氢谱信号严重重叠的糖部分进行了详细的分析,提出了一套对三萜皂甙糖部分信号进行全归属的核磁共振法。

毛冬青中IlexgeninA和IlexsaponinA1的分离和NMR归属

从岭南地区习用药毛冬青Ilex pubescens Hook．Et．Am．根的乙酸乙酯提取物中分离得到2个化合物，经理化鉴定及波谱技术分析，并结合文献对照，鉴定为乌苏烷型三萜——毛冬青皂苷元A（ilexgenin A，1）和乌苏烷型三萜皂苷——毛冬青皂苷A1（ilexsaponin A1，2）。首次利用2DNMR（^1H-^1H COSY，HMBC和HMQC）技术对此两个化合物的^1H和^13CNMR数据进行了全归属。

HPLC-VWD-ELSD法同时测定消炎宁胶囊中7个成分的含量

目的 采用高效液相色谱-紫外检测器-蒸发光散射检测器(HPLC-VWD-ELSD)法同时测定消炎宁胶囊中苦玄参苷IA、异嗪皮啶、迷迭香酸、金丝桃苷、甘草苷、冬青素A和毛冬青皂苷A1的含量。方法 采用Waters Symmetry C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为乙腈(A)-0.15%醋酸水溶液(B),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1)。苦玄参苷IA、异嗪皮啶、迷迭香酸、金丝桃苷、甘草苷采用VWD进行检测,切换波长分别为270 nm及342 nm;冬青素A和毛冬青皂苷A1采用ELSD进行检测,漂移管温度为85℃,载气流速3.5 L·min^(-1)。结果 苦玄参苷IA、异嗪皮啶、迷迭香酸、金丝桃苷、甘草苷、冬青素A和毛冬青皂苷A1进样量分别在1.764~35.28μg、0.6903~13.81μg、0.9524~19.05μg、0.4067~8.134μg、0.2136~4.272μg、0.9182~18.36μg和0.7665~15.33μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.9991),平均回收率及RSD分别为100.01%(0.81%)、99.14%(0.84%)、99.40%(0.92%)、99.34%(1.02%)、99.20%(1.04%)、98.83%(1.09%)、98.99%(1.08%)。4批消炎宁胶囊中上述7个成分的含量测定结果分别为6.812~6.901 mg·g^(-1)、1.726~1.789 mg·g^(-1)、2.391~2.422 mg·g^(-1)、1.134~1.155 mg·g^(-1)、0.6087~0.6105 mg·g^(-1)、2.306~2.324 mg·g^(-1)和1.995~2.016 mg·g^(-1)。结论 所建立的方法简捷,重复性好,可用于消炎宁胶囊中7个成分的含量测定,为消炎宁胶囊全面的质量控制提供科学依据。

HPLC-ELSD法同时测定毛冬青中3种五环三萜的含量

目的：首次建立同时测定毛冬青中Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2和Ilexgenin A含量的方法并将其运用到同属植物三萜的检测中。方法：采用Cemini C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.5%醋酸水,流速1.0 mL/min,蒸发光散射检测器：漂移管温度为107℃,气体流速为3.0 L/min。结果：Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2和Ilexgenin A线性范围分别为0.25-2.50μg（r1=0.9992）、0.03-0.30μg（r2=0.9995）和0.07-0.70μg（r3=0.9998）,平均回收率（n=6）分别为101.08%、100.13%和100.16%。毛冬青及其同属植物中3种五环三萜Ilexsaponin B1、Ilexsaponin B2和Ilexgenin A的含量差异较大,其中在毛冬青中的含量最高。结论：该方法操作准确、有效,可为冬青属药材的来源和开发利用提供依据,同时测定3种五环三萜的方法可用于冬青属特别是毛冬青药材的质量控制。

毛冬青药材中毛冬青皂苷甲和毛冬青皂苷B_2的含量测定的研究

目的建立毛冬青药材的含量测定方法。方法采用Lichrospher-C18色谱柱(4.0 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液(37∶63),流速1 ml/min,蒸发光散射检测器:漂移管温度107℃,气体流速2.6 L/min。结果毛冬青皂苷甲在5.19～64.88μg浓度范围内线性关系良好,r=0.999 8(n=6),平均回收率为100.26%,RSD=1.09%(n=6);毛冬青皂苷B2在0.9～11.25μg浓度范围内线性关系良好,r=0.999 7(n=6),平均回收率为101.39%,RSD=1.46%(n=6)。结论该法操作快速、准确,可作为毛冬青药材的质量控制方法。

连钱草正丁醇部位化学成分研究

目的:研究连钱草的化学成分。方法:利用硅胶、Sephadex LH-20、ODS、MPLC等柱色谱方法进行分离纯化,根据理化性质、波谱方法进行结构鉴定。结果:从连钱草正丁醇部位分离得到12个化合物,分别鉴定为:2-(3′,4′-二羟苯基)-1,3-胡椒环-5-醛(1)、β-蜕皮甾酮(2)、(6R,9R)-3-oxo-α-ionol-9-O-β-D-glucopyranoside(3)、(E)-6-[9-(β-D-glucopyranosyloxy)butylidene]-1,1,5-trimethyl-4-cyclohexen-3-one(4)、丁香酚-O-β-芹糖-(1→6)-O-β-葡萄糖苷(5)、鹅掌楸碱(6)、丁香脂素(7)、杜仲树脂酚(8)、迷迭香酸正丁酯(9)、3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-[β-D-glucopyranosyl-(1→3)]-β-D-fucopyranosyl-3β,16α,23,28,29-pentahydroxyoleana-11,13(18)-diene(10)、lucihirtin A(11)、毛冬青三萜B1(12)。结论:以上化合物均为首次从该植物中分离得到。

毛冬青苷对高脂血症大鼠血脂的影响及其作用机制

目的考察毛冬青苷对高脂血症大鼠血脂的影响。方法采用高脂乳剂灌饲方式建立大鼠高脂血症模型,除正常组、模型组外各组预防给药30 d后,测定大鼠血清中总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白AⅠ(apo AⅠ)、载脂蛋白B100(apo B100)和全血黏度、血浆黏度等血液流变学指标。结果毛冬青苷高剂量组能降低高脂血症大鼠TG、TC、LDL-C、apo B100含量(P<0.01),升高HDL-C、apo AⅠ含量(P<0.01),能有效改善全血黏度(高切、低切),血浆黏度,红细胞(RBC)压积多项血液流变学指标(P<0.01)。中剂量组对以上指标改善作用明显(P<0.05)。低剂量组能改善全血黏度(高切、低切)(P<0.05)。结论毛冬青苷对实验性高脂血症大鼠的血脂具有一定的调节作用,其降脂的作用机制可能是通过调节载脂蛋白和改善血液流变学来实现的。

RP-HPLC法测定毛冬青药材中毛冬青皂苷B_1的含量

目的测定毛冬青药材中毛冬青皂苷B1的含量，首次建立毛冬青药材的专属性含量控制方法。方法采用C18色谱柱；以乙腈-2mL·L^-1 H3PO4（39：61）为流动相，柱温：30℃；流速：0．8mL·min^-1；检测波长：203nm；进样量5μL。结果毛冬青皂苷B1的分离度良好，线性范围为0．5～12．5μg，平均回收率98．24％。结论方法专属性强，重复性好，结果准确，为毛冬青药材的质量控制提供了科学、专属性的质量控制方法。

海南冬青的化学成分研究

目的：进一步阐明海南冬青的化学成分。方法：理化性质和光谱数据鉴定。结果：分离得到４个化合物，为乌索酸，冬青素Ａ，冬青皂甙Ａ１和胡萝卜甙。结论：均为首次从该植物中分得。

HPLC波长切换法同时测定心舒宁片中有效成分的含量

目的:建立HPLC波长切换法时测定心舒宁片中槲皮素、葛根素、山柰素、异鼠李素、毛冬青皂苷B2、毛冬青皂苷A1、毛冬青皂苷B1和冬青素A的含量。方法:采用Inertsil ODS-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min^-1,进样量为10μl,柱温为25℃,检测波长为360 nm(槲皮素、山柰素、异鼠李素)、250 nm(葛根素)、210 nm(毛冬青皂苷B2、毛冬青皂苷A1、毛冬青皂苷B1、冬青素A)。结果:槲皮素、葛根素、山柰素、异鼠李素、毛冬青皂苷B2、毛冬青皂苷A1、毛冬青皂苷B1和冬青素A的线性范围分别为10.406~208.120μg·ml^-1,15.426~308.520μg·ml^-1,2.358~47.160μg·ml^-1,5.352~107.040μg·ml^-1,2.688~53.760μg·ml^-1,6.620~132.400μg·ml^-1,5.784~115.680μg·ml^-1,21.604~432.080μg·ml^-1(r≥0.9994);平均加样回收率为98.4%~101.3%(RSD<2.0%,n=6);精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD<2.0%(n=6)。结论:所建立的方法稳定、可靠,可用于心舒宁片的质量控制。

毛冬青皂苷在大鼠体内的药物动力学研究

目的研究毛冬青皂苷(ilexsaponin A1)静脉给药后在大鼠体内的药物动力学特性。方法大鼠尾静脉注射给予毛冬青皂苷ilexsaponin A1(30 mg/kg),用HPLC法测定血药浓度,采用DAS2.0软件分析其药代动力学参数。结果大鼠静脉给药后,ilexsaponin A1在体内呈二室模型分布,主要药代动力学参数为:t1/2(α)=3.542min,t1/(2β)=17.636 min,CL=0.02 L.min-1.kg-1,AUC(0→)t=1096 mg.min.L-1,tmax=5 min,Cmax=52.972 mg.L-1。结论该法可用于大鼠血浆中ilexsaponin A1的检测及其体内药物动力学研究;静脉给药后,ilexsaponin A1在大鼠体内分布和消除迅速。

毛冬青皂苷B_3的抗血栓作用研究

目的从毛冬青根中分离、鉴定毛冬青皂苷B3,研究其抗血栓作用。方法色谱法、重结晶法分离、精制毛冬青皂苷B3,薄层色谱对照及波谱分析法对毛冬青皂苷B3进行结构鉴定。采用体内血栓形成试验、体外血凝块溶解试验及二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集试验,观察毛冬青皂苷B3的抗血栓作用。结果体内抗血栓试验显示,毛冬青皂苷B3对胶原蛋白-肾上腺素诱发的血栓形成所致小鼠的偏瘫和死亡及FeCl3诱导的大鼠腹主动脉血栓形成均有明显的抑制作用;在体外实验中,对家兔血凝块无明显的溶解作用,对ADP诱导的离体家兔血小板聚集也无明显的抑制作用。结论毛冬青皂苷B3可能为毛冬青抗血栓作用的物质基础之一,其体内抗血栓形成的作用可能与其促进血凝块溶解和抗ADP诱导的血小板聚集无关。

HPLC法同时测定毛冬青药材中2个三萜皂苷类成分的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定毛冬青药材中2个三萜皂苷类成分(毛冬青皂苷B1和毛冬青皂苷B2)的含量。方法:采用Phenomenex C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长203 nm。结果:毛冬青皂苷B1和毛冬青皂苷B2线性范围分别为2.57～12.82μg(r=0.9998)和4.51～22.52μg(r=0.9999),平均回收率(n=6)分别为100.6%(RSD=0.94%)和100.7%(RSD=1.5%)。结论:6批样品的测定结果表明,该方法简便、准确,可用于毛冬青药材中毛冬青皂苷B1和毛冬青皂苷B2的含量测定。

毛冬青根中的新三萜皂苷

目的研究毛冬青Ilex pubescens根的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱法对毛冬青根中的化学成分进行分离纯化,应用谱学技术和化学方法鉴定化合物的结构。结果分离鉴定了1个三萜苷皂类化合物3-O-β-D-吡喃木糖基-3β,19α,24-三羟基齐墩果酸(1)。结论化合物1为新的化合物,命名为毛冬青皂苷D。

HPLC-ELSD法测定艾可清胶囊中毛冬青皂苷甲的含量

目的:建立艾可清胶囊中毛冬青皂苷甲的硅胶薄层色谱(TLC)鉴别方法和高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)检测的含量测定方法。方法:自药材中分离鉴定毛冬青皂苷甲;确定TLC条件;采用ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)及保护柱,以甲醇-0.2%冰醋酸(67∶33)为流动相,ELSD检测器,漂移管温度95℃,载气流速2.5 L.min-1,柱温30℃,流速1.0 mL.min-1作为HPLC条件。结果:设立的TLC条件可以从复方制剂中检出毛冬青皂苷甲;建立的HPLC含量测定方法,毛冬青皂苷甲在1.92～9.60μg呈良好线性关系(r=0.999 5),平均回收率为99.85%,RSD 1.04%。结论:建立的毛冬青皂苷甲的硅胶TLC鉴别方法和HPLC-ELSD含量测定方法具有操作快捷、方法准确的特点,可作为毛冬青药材及其复方制剂的质量控制方法。

一测多评法测定复方毛冬青片中3种皂苷类成分的含量

目的建立复方毛冬青片中3种皂苷类成分一测多评的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱:YMC-Pack Pro-C_(18) RS(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速:1.0mL·min^(-1);检测波长:203 nm;柱温:25℃。以人参皂苷Rb_1为内参物,建立人参皂苷Rb_1与人参皂苷Rg_1及毛冬青皂苷甲的相对校正因子(RCF),并利用RCF计算人参皂苷Rg_1、毛冬青皂苷甲的含量,同时利用外标法测定3种成分的含量,比较两者的差异,验证一测多评法的准确性和科学性。结果不同条件下各成分RCF重现性良好(RSD<5.00%),采用一测多评法计算的含量值与外标法实测值之间无明显差异。结论以一测多评法对复方毛冬青片进行质量控制是稳定、可行的。

HPLC-ELSD测定壮药山绿茶中3对三萜同分异构体含量

建立山绿茶中海南冬青皂苷D、冬青皂苷A1、3β,19α-dihydroxyolean-12-ene-24,28-dioic acid（命名为ilexhainanin E）、冬青素A、齐墩果酸、熊果酸等3对齐墩果烷型、乌苏烷型三萜同分异构体HPLC-ELSD含量测定方法,用于指导山绿茶药材的质量控制。以6种三萜成分为对照品,采用Waters XBridge C（18）色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,甲醇（A）-0.5%甲酸水溶液（B）为流动相,梯度洗脱（0～18 min,70%～85%A;18～20 min,85%～95%A;20～35 min,95%A）,流速1.0 m L·min^-1;柱温30℃;ELSD漂移管70℃,载气为N2,流速2.8 L·min^-1。进样量10μL。6批山绿茶药材中海南冬青皂苷D、冬青皂苷A1、ilexhainanin E、冬青素A、齐墩果酸、熊果酸质量分数分别为3.7～8.5,10.3～22.1,2.8～5.9,7.8～14.1,2.6～3.8,8.8～11.9 mg·g^-1。该研究可用于山绿茶药材中三萜成分的含量测定,为该药材质量标准的完善提供参考。