Preparation and Application of an Immunoaffinity Column for Direct Extraction of Morphine and its Analogs from Opium

A rapid, simple and accurate method using an immunoaffinity column (IAC) and capillary electrophoresis (CE) for the analysis of the major alkaloids in opium is developed. The IAC was synthesized by coupling specific morphine polyclonal antibodies to CNBr-actived Sepharose 4B. The IAC showed high selectivity and obvious enrichment to morphine, codeine, dionin and thebaine. The extraction solution was analyzed by CE with β-cyclodextrin as an additive. Recoveries of the four alkaloids from PBS were between 93%-105% with RSD value less than 5.0%. The result showed that this method was practical for the determination of morphine analogs in opium.

粮食中呕吐毒素含量的免疫亲和柱净化超高效液相色谱法快速测定

建立了免疫亲和柱净化/超高效液相色谱法快速测定粮食中呕吐毒素(DON)的检测方法。样品经纯水提取后,用免疫亲和柱净化、浓缩,Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱分离,以甲醇-水(10∶90)为流动相,流速为0.1 mL/min,进样量1μL,用Acquity紫外检测器在220 nm处进行检测,保留体积不足0.5 mL,整个分析过程用时不足45 min。呕吐毒素在0.5～10.0 mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r2)为0.999 96;检出限(S/N=3)为0.15 ng,定量下限(S/N=10)为0.5 ng,加标回收率为84%～98%,相对标准偏差为2.9%～5.9%。该方法简便快速、灵敏度高、重现性好、溶剂用量少且环保,适用于原粮中呕吐毒素的快速测定。

环丙沙星免疫亲和柱的制备及优化

制备环丙沙星(Cip)抗生素的免疫亲和柱(IAC),研究优化IAC柱的鉴定和洗脱条件,并测试其最佳性能,最终洗脱液选择4ml50%的甲醇,在重复使用5次后,其柱容量仍能达到开始柱容量的25%左右,采用高效液相色谱荧光检测器(HPLC-FLD)对IAC进行回收率测定,以0.05%的甲酸水溶液-甲醇体系作为流动相,梯度洗脱,HPLC-FLD方法的线性范围10～1000ng/ml,相关系数大于0.99,测定出IAC柱对环丙沙星的回收率为74.38%～105.552%。

高效液相色谱法同时检测粮食中常见8种真菌毒素的含量

建立免疫亲和柱净化-高效液相色谱法同时测定粮食中黄曲霉毒素B1(aflatoxins,AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)、呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)和T-2毒素的检测方法。样品经乙腈-水提取后,用免疫亲和柱净化,Agilent Elipse Plus C18(100 mm×4 mm,3.5μm)色谱柱分离,以甲醇-乙腈-水-乙酸为流动相,流速1 m L/min,柱温35℃,进样量20μL,检测系统为可变波长检测器串联光化学衍生器串联荧光检测器。根据信噪比为3的峰响应值,确定各真菌毒素的检出限为:AFB1 0.446 ng/m L、AFB2 0.152 ng/m L、AFG1 0.523 ng/m L、AFG2 0.334 ng/m L、ZEN 7 ng/m L、OTA 0.7 ng/m L、DON 200 ng/m L、T-2毒素100 ng/m L。样品中各真菌毒素的平均加标回收率,玉米为80.0%~104.5%,小麦为83.2%~102.8%,方法精密度为2.6%~10.2%。从样品前处理到分析整个过程耗时约2 h。本方法简便、快速、灵敏度高,适用于粮食中多种真菌毒素的快速测定。

免疫亲和固相萃取-超高效合相色谱-串联质谱法同时测定牛奶中6种玉米赤霉醇类化合物残留

建立了免疫亲和固相萃取(IAC-SPE)-超高效合相色谱-串联质谱(UPC2-MS/MS)同时测定牛奶中α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮和玉米赤霉酮残留的分析方法。样品用去离子水稀释,经IAC-SPE富集净化后,采用Waters ACQUITY UPC2 Torus 2-PIC色谱柱(50 mm×3.0 mm,1.7μm)分离,以超临界CO_2和0.1%(v/v)甲酸甲醇溶液为流动相,经梯度洗脱后在ESI-模式下检测。经过稀释离心的牛奶样品采用免疫亲和柱净化后没有明显的基质效应,6种目标化合物在1～200 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r^2)≥0.995 7;6种目标化合物在3个加标水平下的平均回收率为75.9%～106.5%,日内和日间精密度均≤11.4%。该法专属性好,操作简便,有机溶剂使用量小,与已有的样品测定方法比较更绿色环保,可用于牛奶中α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮的残留检测。

超高效液相色谱法快速检测粮食中玉米赤霉烯酮的含量

建立了免疫亲和柱净化—超高效液相色谱法快速测定粮食中玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）的方法.ZEN的保留体积为0.47 mL,检出限为5 pg,在10～500.0 pg范围内呈线性相关,相关系数R2值为0.999 9;在小麦、玉米样品中的加标回收率分别为85％～ 102％和83％～ 112％,精密度为2.7％～6.9％.本方法从样品前处理到分析整个过程小于45 min,简便快速、灵敏度高、重现性好、溶剂用量少,适用于粮食中玉米赤霉烯酮的快速测定.

花生中乙草胺残留的免疫亲和柱净化-高效液相色谱分析

建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱-紫外检测器测定花生中乙草胺含量的方法。样品经过纯甲醇提取浓缩,用含有乙草胺抗体的免疫亲和柱(IAC)净化,甲醇洗脱。以C18柱为分离柱,乙腈-水(体积比75∶25,pH值3)为流动相对洗脱液进行高效液相色谱分离及紫外检测,紫外检测波长为215nm。结果表明:乙草胺IAC柱的吸附容量为0.556μg;仪器的检测限为15μg/L,方法检测限为3μg/L;乙草胺的质量浓度为20～500μg/L时与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.9969;在5～50μg/kg添加水平下,经过IAC柱浓缩净化提取物,测得回收率在94.06%～102.5%之间,变异系数在2.55%～7.95%之间。

烯唑醇免疫亲和色谱柱的制备及其在样品前处理中的应用

将四甲氧基硅烷(TMOS)水解后与烯唑醇抗体聚合,采用溶胶-凝胶法合成了烯唑醇免疫亲和色谱(IAC)柱固定相,并用其制备了对烯唑醇具有特异性亲和力的IAC柱。对IAC柱条件进行了优化,选择超纯水作为吸附与平衡介质,30%～50%(体积分数)甲醇水溶液作为洗脱剂。结果表明:在优化条件下,IAC柱对烯唑醇的动态柱容量达125.4μg/g。在河水样品和水果样品中添加烯唑醇,经IAC柱净化富集,洗脱液采用高效液相色谱检测,河水中烯唑醇的平均回收率为90.36%～100.14%,相对标准偏差(RSD)为2.03%～6.08%;水果中烯唑醇的平均回收率为85.55%～94.02%,RSD为3.38%～6.78%。本研究为烯唑醇在河水、水果等样品中的残留分析提供了一种新的高效前处理手段。

免疫亲和柱净化-UPLC-MS/MS测定鱼虾肉中的3种氨基糖苷类抗生素

将庆大霉素(gentamicin,GEN)、卡那霉素(kanamycin,KAN)和安普霉素(apramycin,APR)的抗体同时偶联到溴化氰活化的琼脂糖凝胶上,制备成复合型免疫亲和柱(immunoaffinity column,IAC)。建立鱼虾肉中3种氨基糖苷类抗生素的免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱分析方法。采用BEH Amide(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,以0.05%甲酸溶液和乙腈为流动相梯度洗脱,电喷雾正离子多反应模式监测。结果表明,所制备的IAC对GEN、KAN和APR的柱容量分别为1 127、1 368、925 ng/mL,洗脱液选用0.1%甲酸-甲醇溶液。GEN的线性范围为80.0～500μg/L,KAN和APR的线性范围为20～500μg/L,相关系数均大于0.995。鱼虾肉基质中3种物质的平均回收率为71.7%～96.8%,相对标准偏差为4.2%～10.9%(n=6),检出限和定量限分别为10～40μg/kg和20～80μg/kg。为水产品中氨基糖苷类药物残留监控提供一种有效的技术手段。

以聚苯乙烯-二乙烯苯为载体的多目标免疫亲和柱的制备及应用

选取3 种不同聚苯乙烯-二乙烯苯基材,通过硝基化、氨基化、活化、偶联抗体等步骤制备免疫亲和柱,用于4 种镰刀菌毒素（玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、HT-2毒素）的同时纯化,并将3 种基材制备的免疫亲和柱进行比较.以Cleanert PS型聚苯乙烯-二乙烯苯为基材制备的免疫亲和柱与抗体偶联的偶联率为97.64%,且其空白柱对样品的吸附作用最小,3 个加标水平下的回收率为66.16%～112.80%,相对标准偏差为3.09%～12.25%,可应用于实际样品的纯化.