三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。

人α-干扰素基因在转基因草鱼中的表达

为提高草鱼对出血病的抗性 ,采用显微注射法 ,将克隆在鲤 β-肌动蛋白基因启动子下游的人 α-干扰素基因转移到草鱼受精卵中 ,获得了大量转基因个体 .抽取转基因鱼血浆 ,以酶联免疫吸附法检测了转基因草鱼中人α-干扰素基因的表达情况 .从 6 72尾转基因草鱼中检测出 15 8尾有 α-干扰素的表达 ,阳性率为 2 3.5 1% ,其中表达水平最高个体血浆中α-干扰素质量浓度为 145 0 pg/ m L .

硫代磷酸二乙酯类农药半抗原设计及抗体识别特性

通过分析硫代磷酸二乙酯类农药的结构特点,设计并合成了系列半抗原;采用活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了系列免疫原和包被原;通过免疫新西兰大白兔获得了相应抗硫代磷酸二乙酯类农药的类特异性抗体.建立检测硫代磷酸二乙酯类农药的间接竞争酶联免疫分析(ELISA)方法,分析探讨了免疫半抗原结构对抗体特性的影响,并阐述了包被半抗原结构对ELISA灵敏度的影响规律.结果表明,手臂取代位置在苯环对位且手臂较短的免疫原具有较好的免疫效果,同时异源包被可以显著提高ELISA方法的灵敏度.由抗体PAb-H1和包被原H6-OVA建立的间接竞争ELISA方法可以同时检测7个广泛使用的有机磷农药,其半抑制浓度(IC50)分别为蝇毒磷(0.013 mg/L)、对硫磷(0.348 mg/L)、喹硫磷(0.022 mg/L)、三唑磷(0.035 mg/L)、甲拌磷(0.751 mg/L)、除线磷(0.850 mg/L)及辛硫磷(1.301mg/L),最低检测限符合国内外相关有机磷药物最大允许残留限量标准(MRLS)的检测要求.

IL-17和CRP在慢性阻塞性肺疾病中的作用及相关性

目的:探讨白细胞介素(IL)-17和C反应白蛋白(CRP)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用。方法:取100例健康体检者(健康对照组)、100例COPD急性加重期及100例稳定期患者空腹静脉血,采用双抗体酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清中IL-17及CRP水平。并对全部研究对象进行肺功能检查,计算出第1秒用力呼气容积占预计值百分率(FEV1%)。结果:COPD急性加重期患者血清IL-17、CRP明显高于稳定期患者和健康对照组(P<0.05)。COPD急性加重期患者血清IL-17与FEV1%呈负相关,与血清CRP呈正相关(r分别为-0.437和0.582,均P<0.05);COPD稳定期患者血清IL-17与CRP呈正相关(r=0.481,P<0.05)。结论:IL-17可能参与COPD的发病,IL-17与CRP可作为监测COPD的病情活动的相关性指标之一。

北京地区孕妇TORCH感染的检测

目的通过北京地区孕妇TORCH感染的筛查，分析其与妊娠年龄的关系．方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA），对高龄（35～50岁）与适龄（20～34岁）的妊娠妇女分别进行弓形虫（TOX）、风疹病毒（RV），巨细胞病毒（CMV）和单纯疱疹病毒（HSVI＋I）IgM抗体检测。结果孕妇TOX，RV，CMV和HSVI＋I的阳性率分别为0．17％（19／11275），O．38％（48／12596），0．41％（56／13717）和0．36％（39／10974），其中高龄孕妇组TORCH—IgM抗体的阳性率（0．65％，0．73％，0．77％和0．73％）均显著高于适龄孕妇组（O．06％，0．30％，0．32％和0．27％）（X^2检验，P〈0．05）．结论高龄是孕妇发生TORCH感染的一个独立高危因素，应加强高龄孕妇的产前筛查，提高出生人口的质量．

胃癌患者血清中骨桥蛋白和CD44v6检测的临床意义

目的检测胃癌患者血清中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和CD44v6(CD44 splice variant 6)的表达水平,探讨二者在胃癌诊断和病情监测方面的价值。方法应用酶联免疫吸附试验检测60例胃癌患者(胃癌组),42例胃溃疡患者(胃溃疡组),33例健康体检正常者(健康体检组)血清中OPN和CD44v6的水平。结果胃癌组血清中OPN和CD44v6的水平均高于溃疡组及健康体检组,差异均有统计学意义(P<0.01);胃癌患者血清OPN和CD44v6的水平均与胃癌的临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移及远处转移相关(P<0.05)。胃癌患者血清中OPN与CD44v6的水平呈正相关(r=0.8645,P<0.01);二者联合检测敏感性提高至92.5%。结论血清OPN和CD44v6的水平可作为胃癌诊断和病情监测的临床指标,二者联合检测提高了胃癌诊断敏感性,可作为筛查指标用于胃癌的筛检。

2型糖尿病合并肥胖患者脂联素水平与胰岛素抵抗的相关性

目的研究2型糖尿病合并肥胖患者脂联素水平和胰岛素抵抗之间的相关性,探讨脂联素在2型糖尿病合并肥胖患者发生胰岛素抵抗中的作用。方法选择30例2型糖尿病合并肥胖患者、25例2型糖尿病患者及25例非糖尿病对照人员(其中13例为肥胖者),检测体质指数、腰/臀比值、空腹血糖、糖化血红蛋白、血清空腹胰岛素、血脂、脂联素水平,计算胰岛素抵抗指数和胰岛素敏感指数。分析血清脂联素与胰岛素抵抗的相关性。结果⑴糖尿病肥胖组的检测体质指数、糖化血红蛋白、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、血清空腹胰岛素、腰/臀比值均高于对照肥胖组,脂联素、胰岛素敏感指数低于对照肥胖组(P<0.05)。⑵糖尿病非肥胖组甘油三酯、糖化血红蛋白、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、血清空腹胰岛素均高于对照非肥胖组,胰岛素敏感指数、脂联素低于对照非肥胖组(P<0.05)。(3)糖尿病肥胖组甘油三酯、胆固醇、体质指数、糖化血红蛋白、空腹血糖、胰岛素抵抗指数、血清空腹胰岛素、腰/臀比值均高于糖尿病非肥胖组,胰岛素敏感指数、脂联素低于糖尿病非肥胖组(P<0.05)。结论脂联素与2型糖尿病肥胖患者的胰岛素抵抗发生有关,脂联素降低易导致胰岛素抵抗,脂联素水平可作为2型糖尿病合并肥胖患者发生胰岛素抵抗的监测标准。

乳腺癌患者血液中PGRMC1浓度与临床相关性

目的本研究通过检测乳腺癌患者血液中孕激素受体膜组分1(progesterone receptor membrane component 1,PGRMC1)表达浓度来评价其在乳腺癌诊断中的临床价值。方法选取2016年9月至2018年1月期间因乳腺疾病就诊于首都医科大学附属北京妇产医院乳腺外科、中国医学科学院肿瘤医院乳腺外科以及解放军263医院乳腺外科的患者140例,检测其血清及全血标本,其中乳腺癌组90例。根据临床分期早期50例:Ⅰ期(n=24)、Ⅱ期(n=26),晚期40例:Ⅲ期(n=20)、Ⅳ期(n=20)。乳腺良性肿瘤组50例。采用数字表法随机抽取同期门诊健康体检者30例作为对照组。全血样本处理后采用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组PGRMC1浓度,化学发光免疫分析法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)测定各组血清CA125、CA153和CEA表达浓度。ROC曲线评价PGRMC1在乳腺癌诊断中的应用价值。结果 PGRMC1浓度在乳腺癌、乳腺良性疾病患者及正常对照人群中差异有统计学意义(P=0.000)。乳腺癌患者中PGRMC1浓度随临床分期增加而逐渐升高,明显高于乳腺良性疾病组及对照组浓度[Ⅱ期(60.89±16.86)ng/L,Ⅲ期(95.54±16.79)ng/L,Ⅳ期(113.78±41.20)ng/L vs良性肿瘤组(42.77±29.81)ng/L,对照组(39.36±25.10)ng/L],组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与乳腺良性疾病组与正常对照组相比,乳腺癌晚期组3种肿瘤标志物明显升高(Ⅲ期:CA125:χ2=12.26,P=0.000;CA153:χ2=28.19,P=0.000;CEA:χ2=6.52,P=0.011;Ⅳ期:CA125:χ2=16.46,P=0.000;χ2=42.19,P=0.000;CEA:χ2=14.29,P=0.000)。与乳腺癌早期组比较,差异无统计学意义(P>0.05);乳腺良性疾病组与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析显示晚期组PGRMC1的曲线下面积(area under the ROC,AUC)为82.7%(P<0.05),CA125、CA153、CEA的AUC分别为78.3%(P<0.05)、86.8%(P<0.05)、77.3%(P<0.05)。早期组中,CA125、CA153和CEA的AUC均小于60%(P>0.05)。而PGRMC1的AUC为86.6%(P<0.05),敏感度为94.0%,特异度为50.0%。结论乳腺癌患者全血中PGRMC1表达含量高,且表达程度随乳腺癌期别的增加而增高;PGRMC1对早晚期乳腺癌诊断均有一定的临床参考价值,有望成为激素治疗前乳腺癌风险常规筛查的血液学标志物。

尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶在兔体内的药物动力学

本文采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测(ELISA)技术,研究家兔一次快速iv 75,150及300μg/kg的凝血酶样酶(thrombin—like enzymes,TLEs)后24 h内血浆药物代谢动力学。结果表明,TLEs在家兔的血浆浓度时间过程以三室模型模拟较为合适,三种剂量的各参数的均数之间经F检验除中央室表观分布容积外无显著差别。其t_(1/2α)为3.86～5.12min,t_(1/2β)为43.3～59.8min,t_(1/2γ)为17.6～19.5h。

毒死蜱残留检测间接竞争ELISA试剂盒的研制

在多克隆抗体的基础上研制一种适用于检测样品中毒死蜱残留的间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定。结果表明,研制的试剂盒最低检测限为0.5μg/L,线性检测范围为1.8～1000μg/L,供试样品检测结果的批内、批间变异系数均低于8%,回收率均高于85%。试剂盒在4℃或-20℃条件下至少可保存6个月。

hMAM水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及临床意义研究

目的探讨血清人乳腺珠蛋白(hMAM)水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测64例乳腺癌患者、32例其他癌患者(直肠癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌患者各8例)、34例良性乳腺相关疾病肿瘤患者和36例体检正常的女性(正常对照组)的血清人乳腺珠蛋白水平并做比较。将64例乳腺癌患者分别按临床TNM分期、雌激素受体(ER)表达程度、腋窝淋巴结的转移程度及绝经与否分组并做比较。通过受试者的工作特征曲线(即ROC曲线)确定乳腺癌患者的hMAM的Cut-off值。结果血清hMAM的ROC曲线面积为0.855,即乳腺癌诊断结果的可信度为85.5%;血清hMAM的Cut-off值为8.54 ng/ml,其特异性和敏感度分别为83.2%和75.9%。在血清hMAM水平和阳性率的比较中,乳腺癌组明显高于其他三组(P<0.05),且其他三组间差异无显著性(P>0.05)。Ⅲ和Ⅳ期乳腺癌患者的血清hMAM阳性率(62.50%、75.00%)明显高于Ⅰ和Ⅱ期患者(31.25%、37.50%,P<0.05),但hMAM水平无显著性差异(P>0.05)。存在腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者的血清hMAM的阳性率(90.91%)明显高于无转移的患者(25.00%)(P<0.05),但hMAM水平无显著性差异(P>0.05)。乳腺癌患者的血清中是否存在ER以及是否绝经对hMAM及阳性率均无显著性差异(P>0.05)。结论乳腺癌临床TNM分期及腋窝淋巴结转移程度与hMAM的表达存在相关性;在乳腺癌高危人群的血清检验中,hMAM的检测有助于提高乳腺癌早期诊断的临床意义,在诊断乳腺癌早期微转移与治疗中具有关键性作用。

血液病毒核酸检测单独阳性标本研究

目的对酶联免疫吸附检测(ELISA)阴性而核酸检测(NAT)阳性的NAT单独阳性献血标本进行研究分析,评价不同NAT方法检测结果的差异。方法对献血标本进行ELISA的同时,采用转录介导扩增技术(TMA)进行NAT。对NAT单独阳性标本分别进行NAT(TMA)鉴别检测,乙肝血清学标志物检测,HBs Ag确证实验和基于聚合酶链式反应(PCR)的NAT。结果在47004例献血标本中,NAT(TMA)联检(HBV、HIV、HCV)出ELISA阴性的NAT阳性标本108例,其中40例鉴别检测为HBV,68例为鉴别阴性,未发现HIV和HCV,HBV的NAT的单阳性率为0.85‰。选取13例NAT(TMA)鉴别为HBV的标本中有9例NAT(PCR)也为HBV;选取30例NAT(TMA)鉴别阴性标本中有2例NAT(PCR)为HBV。选取鉴别阳性13例,阴性30例共计43例NAT(TMA)联检单阳性标本进行乙肝血清学标志物检测,其乙肝血清学标志物中HBc Ab阳性率最高,HBs Ag确证检测结果均为不确定。结论由于NAT单独阳性标本中大多为隐匿性HBV感染(OBI),可能给不同NAT方法的检测结果带来一定的差异。

铜陵地区2845例孕妇TORCH感染状况分析

目的了解铜陵地区孕妇TORCH感染状况,分析其与妊娠年龄的关系。方法对2010年1月至2012年11月进行孕检的2 845例孕妇抽取血样,用酶联免疫吸附法对TORCH-IgM抗体进行检测。结果孕妇TORCH-IgM总阳性率2.601%,弓形虫(TOX),风疹病毒(RV),巨细胞病毒(CMV)和单纯疱疹病毒(HSVⅡ)IgM抗体阳性率分别为0.141%,0.211%,1.617%,0.738%;其中高龄(35～50岁)孕妇组TORCH-IgM总阳性率和CMV-IgM阳性率(6.178%,5.405%)均明显高于适龄(20～34岁)组(2.243%,1.237%)(P<0.01)。结论铜陵地区孕妇TORCH-IgM阳性率较低,高龄是孕妇发生CMV感染的一个高危因素,应加强孕妇的产前筛查,提高人口质量。

进口大豆上菜豆荚斑驳病毒的免疫捕获巢式RT-PCR检测

利用DASELISA对进口大豆上BPMV进行检测发现,从美国进口的部分大豆样品对BPMV的多抗血清呈阳性反应;利用免疫吸附电镜观察发现,ELISA检测阳性的大豆种皮病汁液中存在直径约30nm的球状病毒粒子。根据BPMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计了2对嵌合引物,建立了BPMV的高灵敏的免疫捕获巢式RTPCR(ICnestedRTPCR)检测方法。该方法经免疫捕获、反转录和2轮PCR扩增,能从带毒大豆种子中扩增到预期大小的DNA条带。序列测定与分析表明此条带的序列为BPMV部分CP基因,在系统关系树上与BPMV的其它分离物形成一簇亲缘关系很近。实验表明从进境大豆上检测到了BPMV。

聚合酶链反应在检测脑性瘫痪患儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)在检测脑性瘫痪 (CP)患儿人巨细胞病毒 (HCMV)感染中的意义。方法 对 5 6例CP患儿用PCR检测尿巨细胞病毒 (CMV)DNA ,病毒分离检测尿标本 ,观察CMV特征性致细胞病变效应 (CPE) ,ELISA检测血清CMVIgM和IgG。结果 PCR检测CMVDNA阳性率为 5 3 .6% ,9例CMV病毒分离结果阳性 ;CMVIgM、IgG阳性率分别为 12 .5 %、3 7.5 % ;病毒分离 :CMVIgM阳性与CMVDNA阳性的符合率分别为 10 0 %、10 % ,前两者与后者比较均有显著差异 (P <0 .0 1) ;CMVIgG阳性与PCR阳性符合率为 6.7% ,两者无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 PCR检测CMVDNA能够早期快速检测到CP患儿CMV感染 ,可应用于CP患儿中CMV感染的检测 ,为早期干预提供可靠依据。

增生性玻璃体视网膜病变患者血清和眼内液HGF水平检测

目的 检测视网膜脱离 (RD)和 /或伴有增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)患者血清和玻璃体液、视网膜下液(SRF)中肝细胞生长因子 (HGF)的含量 ,并探讨其相互关系。方法 同时收集 3 5例RD患者血清和玻璃体液、SRF标本 ,酶联免疫吸附分析 (ELISA)方法检测HGF质量浓度 ,其中 9例不伴有PVR的单纯黄斑孔 (MH)患者作为对照组。结果 各组患者血清HGF质量浓度无明显差异 (P >0 0 5) ,明显低于同组眼内液的质量浓度 (P <0 0 1) ,且二者无相关性 (P >0 0 5)。PVR玻璃体内HGF质量浓度 (10 91± 3 87)ng/ml,均比对照组 (3 42± 0 85)ng/ml高 (P <0 0 1) ,但PVRC级和D级之间差异不明显 :(7 88± 3 83 )ng/ml,(10 2 4± 4 0 7)ng/ml,P >0 0 5。SRF外引流 (14 68± 1 16)ng/ml或内引流 (10 3 5± 6 94)ng/ml的HGF质量浓度均高于玻璃体内水平 (P <0 0 5)。结论 PVR眼内HGF高质量浓度不是通过血 -视网膜屏障弥散 ,可能来自眼组织细胞的分泌 ;玻璃体内HGF随着PVR的发展而增高 。

IFA和ELISA检测J亚群禽白血病病毒的比较研究

为比较3种禽白血病病毒（ALV）抗原检测ELISA试剂盒的特异性和灵敏度,将J亚群禽白血病病毒（ALV-J）传染性克隆rNX0101株以病毒原液（9×103 TCID50）、10倍病毒稀释液（9×102 TCID50）、100倍病毒稀释液（90 TCID50）接种培养于6孔板的DF1细胞,每孔均提前放入灭菌的细胞爬片,于接种后第1～6天每天取上清用3种ELISA试剂盒（A、B、C）检测ALV p27抗原,同时在接种后的第3天和第6天取出细胞爬片进行间接免疫荧光法（IFA）检测.结果表明,IFA方法对高、中、低剂量接种3d后均可检出ALV-J的感染,而ELISA试剂盒中只有A试剂盒在高剂量接种时才能检出,试剂盒B和试剂盒C最早要在第4天才可捡出;中、低剂量接种,3种试剂盒在第4～5天才能检出;第6天时,由于病毒的明显复制,无论IFA方法还是3种ELISA试剂盒都可检出ALV-J的感染.本研究结果为正确选择商品化禽白血病抗原检测试剂盒提供了借鉴.

运用单样本核酸扩增检测技术对提高深圳地区HIV检出率的效果分析

目的分析运用单样本核酸扩增检测技术(SS-NAT)对提高深圳地区HIV检出能力的效果,探讨SS-NAT对降低输血感染HIV残余风险的作用。方法采用Procleix Tigris单样本核酸检测系统和第三代、第四代两种酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂对2015年1月至2017年8月采集的269 228份无偿献血者血液标本进行平行检测。对ELISA检测无反应性而SS-NAT有反应性的标本进行HIV鉴别试验,并对鉴别有反应性的献血者进行追踪检测。所有ELISA或SS-NAT HIV鉴别试验有反应性的样本均送到深圳市疾病预防控制中心(CDC)做免疫印迹法(WB)确证试验。结果 269 228份样本HIV第三代ELISA试剂检测有反应性188份,有反应性率为0.698‰(188/269 228),第四代ELISA试剂检测有反应性340份,有反应性率为1.263‰(340/269 228),两种ELISA试剂共检测有反应性422份,有反应性率为1.567‰(422/269 228),SS-NAT检测有反应性共103份,有反应性率为0.383‰(103/269 228),其中有4份ELISA无反应性而SS-NAT有反应性标本,对应献血者随访追踪血液标本ELISA和SS-NAT均呈有反应性。所有ELISA或SS-NAT HIV鉴别试验有反应性标本经CDC确认有103份标本呈阳性。ELISA检测后HIV窗口期检出率为1∶67 307(4/269 228)。结论 SS-NAT应用于血液筛查可提高HIV检出率,缩短HIV检测窗口期,降低输血感染HIV残余风险,从而有效提高输血安全性。

弓形虫-IgM诊断试剂的研制

目的 对间接酶联免疫吸附法 (EL ISA)法检测人弓形虫 (TOXO) - Ig M的试剂进行优化改良。方法 以自制原材料采用间接 EL ISA法研制 TOXO- Ig M检测试剂 ,对试剂的特异性、精密性、灵敏度以及稳定性进行鉴定。结果 质量检定结果表明 ,该试剂特异性强、本底低 ,能有效消除类风湿因子等干扰因素的影响 ;灵敏度>1∶ 16 0 ;精密性好 ,变异系数 (C.V )均 <15 % ;试剂稳定 ,37℃存放 6天 ,各项指标的变化率不超过 15 %。结论 本试剂盒有较好的特异性、敏感性和稳定性 。

检测莠去津残留的间接竞争ELISA试剂盒的研制

在制备多克隆抗体的基础上,研制用于检测莠去津残留的间接竞争ELISA试剂盒。结果表明:莠去津抑制率回归曲线为y=19.762x+5.6026,相关系数R2=0.981,线性检测范围为1~5000μg·L-1,最低检测限为5.35μg·L-1,IC50为176.44μg·L-1。莠去津多克隆抗体的交叉反应率小于20%,莠去津试剂盒的添加回收率均高于75%,供试样品检测结果的批内和批间变异系数均低于10%。试剂盒在4℃或-20℃下贮存270d仍有效。