以马尔尼菲篮状菌肺炎起病的X连锁高IgM综合征婴儿1例

X连锁高IgM综合征(X-linked hyper-immunoglobulin M syndrome,XHIGM)是罕见的原发性免疫缺陷病,该病以反复感染为特征,易感染机会致病微生物。临床上以马尔尼菲篮状菌肺炎起病的XHIGM更为罕见。该文回顾性分析1例以马尔尼菲篮状菌肺炎起病的X连锁高IgM综合征婴儿的临床资料,实验室、影像学检查结果和诊疗经过并探讨其基因型,结合最新文献复习,以提高对该疾病的认识。

EB病毒IgM、IgG及DNA检测在儿童呼吸道感染性疾病中的诊断研究

目的探析爱泼斯坦-巴尔病毒(EB病毒,EBV)免疫球蛋白(Ig)M、IgG及脱氧核糖核酸(DNA)检测在儿童呼吸道感染性疾病中的诊断价值。方法选取400例呼吸道感染性疾病患儿作为观察组,同时选取100例无呼吸道感染患儿作为对照组。对两组患儿EBV-IgM、EBV-IgG及EBV-DNA进行检测。比较观察组不同年龄段患儿EBV-IgM、EBV-IgG及EBV-DNA阳性率,两组EBV-IgM、EBV-IgG及EBV-DNA检测结果;分析各项指标的诊断价值。结果观察组不同年龄段患儿EBV-IgM、EBV-IgG阳性率比较,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组不同年龄段患儿EBV-DNA阳性率比较无明显差异(P>0.05)。EBV-IgM检测中,观察组化学发光值(11.39±2.12)高于对照组的(9.54±1.35),阳性率50.50%(202/400)高于对照组的5.00%(5/100),差异有统计学意义(P<0.05);EBV-IgG检测中,观察组吸光度值(11.33±2.15)高于对照组的(9.03±1.06),阳性率58.00%(232/400)高于对照组的12.00%(12/100),差异有统计学意义(P<0.05);EBV-DNA检测中,观察组循环数Ct值(34.13±4.88)低于对照组的(43.75±11.62),阳性率57.00%(228/400)高于对照组的6.00%(6/100),差异均具有统计学意义(P<0.05)。EBV-DNA对呼吸道感染性疾病患儿的诊断价值最高[曲线下面积(AUC)=0.644],其次依次是EBV-IgM(AUC=0.618)、EBV-IgG(AUC=0.584),EBV-IgM对呼吸道感染性疾病患儿的诊断特异度最高,为96.12%。结论EBV-IgM、EBV-IgG、EBV-DNA检测在儿童呼吸道感染性疾病的诊断中具有重要的指导意义。

弥漫大B细胞淋巴瘤合并淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症伴IgM及IgG共存的临床研究

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤合并淋巴浆细胞淋巴瘤/华氏巨球蛋白血症(LPL/WM)伴免疫球蛋白M(IgM)及免疫球蛋白G(IgG)共存的发病机制、诊断标准、治疗方案及预后。方法 分析1例弥漫大B细胞淋巴瘤合并LPL/WM伴IgM及IgG共存患者的临床资料,以“弥漫大B细胞淋巴瘤”“免疫球蛋白”“单克隆”“IgM”“IgG”“淋巴浆细胞淋巴瘤”“华氏巨球蛋白血症”“diffuse large B-cell lymphoma”“immune globulin”“monoclonal”“lymphoplasmacytic lymphoma”“Waldenstr9m macroglobulinemia”为检索词,对中国知网数据库、万方知识服务平台及PubMed数据库中2017年1月至2023年6月发表的文献进行检索。结果 该例患者明确诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤合并LPL/WM伴IgM及IgG共存,确诊后经环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松(CHOP)方案、环磷酰胺+长春新碱+泼尼松(COP)方案治疗有效,但治疗期间病情进展,从发病到死亡存活10个月。依照上述检索条件并经过阅读文献题目与摘要筛选出7篇文献。阅读全文共筛出11例双克隆免疫球蛋白共存LPL/WM患者,其中IgM伴IgG双克隆6例,IgM伴免疫球蛋白A(IgA)双克隆2例,IgG伴IgA双克隆2例及IgMκ伴IgMλ双克隆1例。文献中提到的治疗方案主要包括硼替佐米+利妥昔单抗方案、COP方案、CHOP方案等,上述方案联合化疗均有效,但该病的发病机制尚不明确,尚无标准的治疗方案及确切的生存期。结论 弥漫大B细胞淋巴瘤合并LPL/WM伴IgM及IgG共存系首次报告,因该病发病率极低,发病机制尚不明确,因此目前尚无统一的治疗方案,预后尚不明确,临床需进一步提高对该病的认识,未来对于其发病机制及新型分子靶向药物的应用进行深入研究,将会大大改善患者的预后。

阿奇霉素对军团菌肺炎患儿疗效、IgM抗体阳性率、肺功能及免疫功能的影响

目的:探究阿奇霉素应用于军团菌肺炎患儿对免疫球蛋白M(IgM)抗体阳性率、肺功能及免疫功能的影响。方法:选取江西省妇幼保健院2021年10月—2022年12月收治的100例军团菌肺炎患儿作为研究对象,采用随机数字表法将其分为阿奇霉素组和红霉素组,每组50例。对阿奇霉素组患儿给予阿奇霉素,对红霉素组患儿给予红霉素。观察并比较两组临床疗效、IgM抗体阳性率、肺功能指标[呼吸频率(RR)、最大呼气流量(PEF)、用力呼出25%肺活量时的平均呼气流速(FEF25)、用力呼出50%肺活量时的平均呼气流速(FEF50)]、免疫功能指标[T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+))]。结果:用药后,阿奇霉素组总有效率明显低于红霉素组,差异有统计学意义(P<0.05)。用药后1个月,阿奇霉素组IgM抗体阳性率明显低于红霉素组,差异有统计学意义(P<0.05)。用药后,阿奇霉素组FEF25、FEF50及CD3^(+)、CD4^(+)均高于红霉素组,RR及CD8^(+)均低于红霉素组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组PEF水平相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:军团菌肺炎患儿应用阿奇霉素治疗效果显著,改善感染症状、呼气功能及免疫功能效果较好,可替代红霉素作为首选药物。

如何消除血清中高IgM对尿酸、前白蛋白检测干扰的探讨

目的:试图找出常规湿生化检测中,降低较高浓度的IgM对尿酸(UA)、前白蛋白(PA)干扰的较为便捷的方法。方法:聚乙二醇(25%PEG),去离子水(DH2O),生理盐水(0.9%NaCl),对标本进行稀释,分别使用3000rpm、10000rpm离心10分钟,取上清液检测,结果乘稀释倍数。结果:使用25%PEG或蒸馏水稀释离心可以有效消除高IgM对UA和PA的干扰,而使用生理盐水效果不好。结论:在高浓度IgM标本中使用25%PEG10000rpm、DH2O3000和10000rpm可消除其对UA、PA的检测。

窄谱强脉冲光联合盐酸米诺环素治疗玫瑰痤疮的效果及对IgG、IgM水平和皮肤屏障功能的影响

目的研究窄谱强脉冲光联合盐酸米诺环素治疗玫瑰痤疮的效果及对免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)水平和皮肤屏障功能的影响。方法选取2018年1月至2021年1月我院收治的120例玫瑰痤疮患者,根据不同治疗方法将其分为对照组和观察组,各60例。对照组采用盐酸米诺环素治疗,观察组在对照组基础上联合窄谱强脉冲光治疗。比较两组的治疗效果。结果观察组的治疗总有效率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组的红斑、丘疹脓疱、毛细血管扩张及瘙痒评分均显著降低,且观察组低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及降钙素原(PCT)水平均显著降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组的IgG、IgM水平均明显降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组的经皮水分流失量(TEWL)、红斑数量均降低,表皮含水量、油脂均升高,且观察组优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论窄谱强脉冲光联合盐酸米诺环素治疗玫瑰痤疮效果显著,可缓解患者的临床症状,减轻炎症反应,改善免疫功能及皮肤屏障功能,值得临床推广应用。

六项呼吸道病原体IgM抗体检测在呼吸道感染中的价值研究

目的分析六项呼吸道病原体[肺炎衣原体(CPN);肺炎支原体(MP);呼吸道合胞病毒(RSV);腺病毒(ADV);乙型流感病毒(IBV);副流感病毒(PIV)]血清免疫球蛋白M(IgM)抗体检测在呼吸道感染中的应用价值。方法选取禹州市中医院在2023年1月至2023年11月期间收治的76例呼吸道感染患者(感染组)与同期进行健康体检的76名健康体检者(健康组)作为本次研究对象,采用间接荧光免疫法对所有研究对象的血清进行呼吸道病原体IgM抗体检测,分析两组研究对象病原体IgM检测结果以及不同年龄、季节下机体病原体感染情况。结果感染组六项呼吸道病原体IgM抗体阳性率较健康组高,差异具有统计学意义(P<0.05),其中,不同病原体感染率相比,MP感染率(36.84%)最高。单一感染较混合感染发生率高,其中,在混合感染中MP+IV感染多见,差异具有统计学意义(P<0.05)。从年龄阶段来看,<18岁群体中以PIV感染为主,差异具有统计学意义(P<0.05)。从季节来看,MP、PIV在夏、秋季检出率较高,RSV在冬春季检出率较高,差异具有统计学意义(P<0.05),其他病原体感染在不同季节差异无统计学意义(P>0.05)。结论呼吸道感染患者中以MP感染为主,在不同年龄阶段与季节中,其病原体感染情况不同,六项呼吸道病原体抗体联合检测可提高呼吸道病原体的阳性检出率,故可将六项呼吸道病原体IgM抗体联合检测应用到呼吸道感染性疾病的诊断中,快速明确感染病原体的类别,为临床后续治疗提供参考依据。

IgA、IgG、IgM及补体C3、C4对类风湿关节炎患者的诊断价值

目的分析免疫球蛋白组及补体3(complement 3,C3)、补体4(complement 4,C4)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)临床诊断中的应用价值。方法选择2020年3月—2022年10月赤峰市医院收治的88例初诊RA患者作为观察组,并选择同期健康人群64名作为对照组。其中RA患者依据疾病活动分数(disease activity score 28,DAS28)进行分级,高度活动组22例、中度活动组24例、低度活动组21例、缓解组21例。对每个纳入研究的RA患者及健康人群均行免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)及补体C3、C4检测。比较两组患者及不同分级RA患者间各指标的差异,并分析讨论。结果观察组患者IgA、IgG、IgM、C3、C4水平较对照组均明显升高(P<0.05)。观察组内不同活动度RA患者对比,活动度越高,对应患者IgA、IgG、IgM、C3、C4水平也明显偏高,而缓解组患者各指标水平最低(P<0.05)。结论RA患者血清免疫球蛋白及补体指标较正常人群会有所升高,且RA活动度越高,其对应指标升高程度也越明显。提示免疫球蛋白及补体可以作为RA患者早期诊断及检测的评价指标;同时,本文的研究结果也为类风湿关节炎后期诊断标准制定提供了借鉴。

T细胞大颗粒淋巴细胞白血病伴单克隆IgM相关轻链型淀粉样变性1例报道

T细胞大颗粒淋巴细胞白血病(T-LGLL)是一种少见的T淋巴细胞增殖性疾病,年发病率约(0.2~0.72)/100万[1]。而轻链型淀粉样变性(AL)是来源于单克隆浆细胞或B细胞的淋巴增殖性疾病,年发病率约(5.1~12.8)/100万[2],一般AL中,最常见的单克隆免疫球蛋白(Ig)为IgA、IgG,而单克隆IgM相关AL(IgM-AL)少见,仅占AL 5%~7%[3]。T-LGLL和IgM-AL均为罕见病,并存者则更为罕见,目前国内尚未见报告,我科近期诊治1例,现报道如下。

川崎病合并肝功能损害实施血清生化与免疫球蛋白M检测的临床价值研究

目的 分析川崎病(KD)合并肝功能损害实施血清生化和免疫球蛋白(Ig)M检测的价值。方法 选取66例KD患儿,根据肝功能指标是否正常分为观察组(肝功能指标异常, 13例)与对照组(肝功能指标正常, 53例)。检测并对比两组患儿的血常规和炎症指标[白细胞计数(WBC)、中性粒细胞绝对值(PMN)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、红细胞计数(RBC)]、肝功能指标[总胆红素(TBIL)、总胆汁酸、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)]、心脏功能指标[羟丁酸脱氢酶(HBDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸激酶(CK)]、体液免疫指标(IgM、IgG、IgA、IgE)。结果 观察组PCT、CRP、PMN水平高于对照组,组间对比有显著差异(P<0.05);两组PLT、Hb、RBC、WBC组间对比无差异(P>0.05)。观察组TBIL(16±14)μmol/L、总胆汁酸(76±74)μmol/L、GGT(109±60)U/L、AST(108±77)U/L、ALT(113±70)U/L均高于对照组的(6±3)μmol/L、(19±29)μmol/L、(29±36)U/L、(37±15)U/L、(25±23)U/L,组间对比有显著差异(P<0.05)。观察组HBDH(281±83)U/L、LDH(400.0±135.0)U/L、CK-MB(41.0±26.0)U/L、CK(73±60)U/L与对照组的(226±130)、(340.1±118.9)、(34.0±29.1)、(69±42)U/L对比无差异(P>0.05)。观察组IgE(493±54)ng/ml、IgG(9±6)g/L、IgA(1±0)g/L与对照组的(523±62)ng/ml、(10±5)g/L、(1±0)g/L对比无差异(P>0.05);观察组IgM(0.9±0.3)g/L低于对照组的(1.2±0.2)g/L(P<0.05)。结论 KD合并肝功能损害患儿的PCT、PMN以及CRP水平均升高,但是血清IgM水平降低,说明KD会导致肝损伤,进而对体液免疫产生影响,在诊断、监测以及选择治疗措施中意义重大。

血清IgM、凝血因子Ⅷ与IgA肾病患者肾脏预后的关系

目的探讨血清免疫球蛋白M(IgM)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)与IgA肾病患者肾脏预后的关系。方法选取2017年6月至2019年6月该院收治的112例IgA肾病患者作为观察组,另外选取120例同期来该院体检的健康人作为对照组。根据肾小管间质损害程度,将IgA肾病患者分为轻度组(36例)、中度组(49例)和重度组(27例)。连续随访3年,根据IgA肾病患者肾脏预后情况,分为预后良好组(81例)和预后不良组(31例)。采用酶联免疫吸附试验检测血清IgM、FⅧ水平;采用受试者工作特征曲线评估血清IgM、FⅧ对IgA肾病患者肾脏预后的预测价值;采用多因素Logistic回归分析影响IgA肾病患者肾脏预后的危险因素。结果观察组血清IgM水平低于对照组,FⅧ水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组血清IgM水平低于中度组、轻度组,血清FⅧ水平高于中度组、轻度组,且中度组血清IgM水平低于轻度组,血清FⅧ水平高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清IgM水平低于预后良好组,FⅧ水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。血红蛋白<120.0 g/L(OR=2.60,95%CI:1.39~4.87)、24 h尿蛋白定量≥1.5 g/24 h(OR=2.49,95%CI:1.37~4.53)、血肌酐≥106μmol/L(OR=2.36,95%CI:1.35~4.14)、血清IgM<0.81 g/L(OR=3.69,95%CI:1.57~8.66)、血清FⅧ≥174.24%(OR=3.04,95%CI:1.47~6.29)是IgA肾病患者发生肾脏预后不良的独立影响因素(P<0.05)。血清IgM、FⅧ预测IgA肾病患者肾脏预后的曲线下面积(AUC)分别为0.786(95%CI:0.726~0.846)、0.847(95%CI:0.797~0.897),截断值分别为0.81 g/L、174.24%,特异度分别为53.62%、67.43%,灵敏度均为92.12%,二者联合预测的AUC为0.916(95%CI:0.866~0.966),特异度为85.19%,灵敏度为86.97%。结论血清IgM、FⅧ水平与IgA肾病患者的疾病严重程度和肾脏预后显著相关,IgM水平越低、FⅧ水平越高,患者的病情越严重,预后越差,且二者联合检测有利于IgA肾病患者肾脏预后的判断,有临床推广应用价值。

富含IgM的静注人免疫球蛋白制品研究进展

富含IgM的静注人免疫球蛋白与常规的静注人免疫球蛋白制品相比,在病原及相关毒素中和、补体活性调节、细胞因子分泌和免疫细胞活性的调控等方面更具优势;但同时应重视其使用时潜在的不良反应及副作用。查阅文献后发现,在制备工艺上需要解决两个突出问题:一是要开发更加简便和高效的IgM浓缩和提纯技术;二是要寻找更加优越和安全的病毒灭活技术。目前,全球市场仅有一种富含IgM的静注人免疫球蛋白制剂在售(Pentaglobin■),国内对于这类制品的基础研究、制备工艺和临床应用经验相对缺乏。本文旨在梳理近年来国内外关于富含IgM的静注人免疫球蛋白制品的研究进展,为我国相关制品的研发、生产及临床应用提供参考。

小儿豉翘清热颗粒联合阿奇霉素对支原体肺炎患儿外周血IgM、IgG的影响

目的探讨小儿豉翘清热颗粒联合阿奇霉素对支原体肺炎(MP)患儿外周血免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(Ig G)的影响。方法选取2020年12月至2021年12月我院收治的200例MP患儿为研究对象,将其随机分为对照组(100例,阿奇霉素治疗)与观察组(100例,小儿豉翘清热颗粒+阿奇霉素治疗)。比较两组的治疗效果。结果观察组的治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。观察组的咳嗽、发热、喘息、肺啰音持续时间短于对照组(P<0.05)。治疗前,两组的第1秒用力呼吸容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)及呼气峰流速(PEF)比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组的FEV_(1)、FVC、PEF大于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)及白细胞介素-8(IL-8)水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的IgM及IgG水平高于对照组(P<0.05)。两组的不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论小儿豉翘清热颗粒联合阿奇霉素治疗MP的效果显著,可改善患儿的临床症状、肺功能及免疫功能,降低机体的炎症反应,值得推广与应用。

抗髓鞘相关糖蛋白抗体阳性IgM相关性周围神经病1例报告

抗髓鞘相关糖蛋白(myelin-associated glycoprotein,MAG)抗体阳性IgM相关性周围神经病(peripheral neuropathy,PN)在临床并不常见,易被漏诊或误诊为其他PN或M蛋白相关性疾病。现将我科收治的1例抗MAG抗体阳性PN患者诊治情况报告如下,以提高临床医师对该病的认识。

血清IgA、IgM、IgG联合肝功能指标检测应用于肝衰竭诊断中的临床价值

目的:探讨血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)联合肝功能指标检测应用于肝衰竭诊断中的临床价值。方法:选取2021年1月—2022年12月柳州市中医医院收治的250例肝衰竭患者为观察组,选取同期250例健康群体为对照组。比较两组患者治疗前及观察组治疗前后的IgA、IgM、IgG水平及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰基转移酶(GGT)水平。结果:治疗前,观察组IgA、IgM、IgG水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);治疗后,观察组IgA、IgM、IgG水平低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.001)。治疗前,观察组ALT、AST、GGT水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);治疗后,观察组ALT、AST、GGT水平低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:IgA、IgM、IgG联合肝功能指标基检测,能够对肝衰竭进行诊断。针对肝衰竭患者使用IgA、IgM、IgG联合肝功能指标检测方法能够明确病情,协助医生进行诊断,为后续制定诊疗计划提供有力依据,具有较高的临床应用价值。

IgA-MM患者血清双M蛋白分析与实验室指标检测对骨髓移植疗效预测价值研究

目的探讨IgA型多发性骨髓瘤(IgA multiple myeloma,IgA-MM)患者血清双M蛋白分析与实验室指标检测对骨髓移植疗效预测价值。方法选择2019年1月~2022年1月于中国人民解放军中部战区总医院收治的60例出现双M条带的IgA-MM患者为研究对象,比较患者血清蛋白电泳及免疫固定电泳(immunofixation electrophoresis,IFE)图谱资料;采用2-巯基乙醇(2-dimercaptoethanol,2-DE)处理IgA-MM双M蛋白带的血清,IFE鉴定双M蛋白带;比较两种双M蛋白类型患者免疫学试验指标,包括免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、血清游离轻链(serum free light chain,sFLC)和本周蛋白(Bene Jone protein,BJP);并且比较二种双M蛋白类型患者的常规实验指标;对两种IgA型双M蛋白血症骨髓瘤多发性骨髓瘤国际分期系统(international staging system,ISS)分期及疗效进行比较;采用Kaplan-Meier法和LOGrank检验分析两种双M蛋白类型的患者生存率。结果IFE显示,单克隆轻链型和IgA聚合体型为IgA-MM血清双M蛋白带的两种类型。单克隆轻链型患者相较于聚合体型sFLC(2970.14±876.82 mg/L vs 118.68±74.10 mg/L)及BJP(6.22±3.01 g/L vs 0.55±0.12 g/L)水平更高,差异具有统计学意义(t=21.684,12.659,均P<0.05);单克隆轻链型患者相较于聚合体型血清β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)(7.88±2.14 mg/L vs 4.65±1.56 mg/L)、血清钙(calcium,Ca)(2.64±0.24 mmol/L vs 2.32±0.20 mmol/L)、肌酐(serum creatinine,Scr)(182.85±64.23μmol/L vs 90.52±42.20μmol/L)水平升高(t=21.684,120.659,6.400,5.193,6.473),血红蛋白(hemoglobin,Hb)(74.32±19.44 g/L vs 90.75±15.52 g/L)、清蛋白(albumin,Alb)(28.42±3.64 g/L vs 31.72±4.96 g/L)水平降低(t=3.386,2.428),差异具有统计学意义(均P<0.05);与IgA聚合体型患者相比,单克隆轻链型患者ISS分期更高、疗效更低(t=11.827,4.519,均P<0.05);生存分析结果显示,IgA聚合体型相较于单克隆轻链型生存率更高(χ^(2)=4.482,P<0.05)。结论IgA型双M蛋白的两种类型在疗效和预后不尽相同,故鉴定IgA-MM双M蛋白带类型尤为重要。

大黄鱼血清IgM纯化及其兔抗血清的制备

分别用饱和硫酸铵二次盐析法和蛋白A亲和层析法对健康大黄鱼(Pseudosciaena crocea)血清中的免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化,所得产物用SDS-PAGE进行检测。结果表明,蛋白A亲和层析法可以较好地分离到高纯度的大黄鱼血清IgM,产物的电泳胶中只有重链和轻链2个条带;饱和硫酸铵二次盐析法除了有这2个条带,还有很多杂带,而且蛋白A亲和层析法更为简便、快速,因此用蛋白A亲和层析法分离纯化IgM优于饱和硫酸铵二次盐析法;大黄鱼免疫球蛋白重链的分子量在76 kD左右;轻链分子量在28 kD左右。用纯化的大黄鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1∶40 960的兔抗鱼IgM血清。本实验所建立的蛋白A亲和层析法提取大黄鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM。本研究所制备的兔抗大黄鱼IgM血清可为今后的相关研究工作打下基础。

大菱鲆血清免疫球蛋白IgM的纯化及应用研究

用硫酸铵分级盐析法纯化大菱鲆血清免疫球蛋白IgM,所得产物用Sepharose-4B和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析进一步纯化,以纯化的大菱鲆IgM免疫新西兰大白兔,获得兔抗大菱鲆IgM抗血清。SDS-PAGE电泳显示大菱鲆IgM重链为76 kD,轻链为27 kD;纯化的大菱鲆IgM重链与特异性抗血清具有较好的反应,而轻链与抗血清反应不明显;以制备的兔抗大菱鲆IgM抗血清为二抗建立了大菱鲆血清特异性抗体的间接ELISA检测方法,用该方法检测了鳗弧菌灭活疫苗免疫后大菱鲆产生特异性抗的变化规律,大菱鲆在免疫后第1周就产生了特异性抗体,在3周时达到峰值,该特异性抗体可维持13周以上。

草鱼血清IgM蛋白的纯化及抗血清的制备

采用盐析法、重组蛋白A(HiTrapr Protein A Sepharose)亲和层析法分离纯化草鱼血清中的IgM,并通过SDS-PAGE及Western-blot技术对纯化蛋白的部分特性进行分析比较并制备兔抗IgM抗血清。结果表明:33%硫酸铵溶液可以沉淀血清中大部分蛋白,但电泳条带仍较多,其中含有78kD和28kD的条带,因此仅可作为免疫球蛋白粗提的方法;而rProtein A亲和层析法所提蛋白则仅有上述重链(78kD)和轻链(28kD)。Western-blot显示,鼠抗人Ig抗体可与78kD及28kD条带发生发应。rProtein A亲和法提纯蛋白的纯度较高,但含量较低,条带较淡,仅可作为实验室小量提纯草鱼IgM的有效方法。将提纯的蛋白免疫实验兔后可制得效价高达1:25600的兔抗鱼IgM血清,并测得血清蛋白总量和IgM含量分别为25.87mg和4.5mg,IgM占血清蛋白总量的17.39%。本实验所采用的蛋白A亲和层析法提取草鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM。同时本研究所制备的兔抗草鱼IgM血清也为今后的相关研究工作打下基础。

用Protein A亲和层析法快速分离纯化鲫血清IgM方法的建立和应用

采用Protein A亲和层析法对鲫Carassius auratus血清中的IgM进行快速分离纯化,所得产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blotting)进行分析检测。结果表明:采用Protein A亲和层析法可以很好地分离到高纯度的鲫血清IgM,电泳条带中重链和轻链清晰可辨,重链、轻链的相对分子质量分别为85 000、25 000左右,无明显杂带;利用纯化的鲫血清IgM免疫小鼠,获得了高效价抗IgM抗血清,可以特异性识别鲫血清和黏液中IgM重链。应用间接ELISA方法对浸泡免疫后的鲫血清和皮肤黏液中抗体的动态进行检测,结果显示:鲫皮肤黏液中的抗体滴度在免疫后第6天达到峰值,血清中抗体滴度在免疫后第15天达到峰值,前者高峰期出现较早,但持续时间短,后者高峰期出现较晚,但持续时间较长。本试验中所建立的Protien A亲和层析法为鱼类抗体制备、病原检测及免疫学相关研究提供了一种便捷的方法。