虎斑乌贼FMRFamide的表达定位及其Na^(+)通道受体基因的克隆鉴定、表达分析

FMRFamide是神经肽家族的一类重要代表成员,参与无脊椎动物的多种生理调控过程。利用同源克隆和RACE技术获得了虎斑乌贼神经肽FMRFamide的Na^(+)通道受体(Sp FaNaC)的cDNA全长共2090 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)1782 bp,编码一个由593个氨基酸残基组成的多肽链,N端无信号肽,具有2个跨膜区;序列分析显示其与头足纲、腹足纲和双壳纲相似性较高,聚类为姐妹支。荧光定量PCR(qRT-PCR)检测到SpFaNaC主要分布在中枢神经系统的视叶、脑,其次是心脏和副缠卵腺。SpFaNaC原位杂交结果显示其阳性信号存在于视网膜感光细胞的细胞体、视叶深层视网膜的内颗粒细胞层和外细胞颗粒层、食道上神经团的各亚叶,尤以交界区最为集中。同时,原位杂交和免疫组化观察到神经肽FMRFamide主要分布在视叶的中央髓质区、边缘髓质区、内细胞颗粒层和外细胞颗粒层;食道上神经团的阳性信号较少,主要集中为亚叶交界处。实验结果为研究虎斑乌贼FMRFamide及Sp FaNaC的生理功能研究奠定一定的理论基础。

全自动免疫组化与手工染色标记胸腺瘤TdT表达的对比观察

目的:对比观察胸腺瘤Td T在全自动免疫组织化学染色技术(automatic immunohistochemical staining techniques,AIST)和手工染色方法(manual staining method,MSM)中表达的差异性。方法:收集2015年-2016年大坪医院胸腺瘤手术标本21例,经石蜡包埋、切片、染色,显微镜下观察胸腺瘤Td T在AIST和MSM表达的差异。AIST采用Ventana公司生产的BenchM ark XT,二抗检测系统分别采用UltraV iew Universal DAB Detection kit(简称UV)和Optiview DAB IHC Detection kit(简称OV)。结果:手工染色TdT阳性表达定位准确,染色强度强,背景清晰;AIST中采用UV二抗检测系统TdT染色虽然阳性定位准确,但TdT染色强度偏弱,背景不清晰,两者比较具有显著性差异(P<0.01)。优化染色方案后,改用OV二抗检测系统,TdT染色各项指标优于UV二抗检测系统,染色效果和手工相比,染色强度和阳性率一致。结论:任何抗体指标在行免疫组化前均需进行最适条件的摸索与优化,从而获得该抗体指标最佳的染色方案。

慢性乙型肝炎患者免疫耐受和活动状态肝组织内HBsAg和HBcAg表达差异

目的分析慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染免疫耐受和活动状态的临床和病理学差别.方法选择102例CHB免疫耐受期患者组成免疫耐受组,215例CHB免疫清除期或再活动期患者组成免疫活动组,分析两组间肝组织内乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsA g)和乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBc Ag)的表达、性别、谷丙转氨酶、血清HBV DNA载量、肝脏炎症活动度分级(G)和纤维化分期(S)的差异.结果免疫耐受组的HBs Ag胞膜表达强度低于免疫活动组(P=0.037),而肝组织内HBc Ag表达强度、HBc Ag胞核表达强度显著高于免疫活动组(P=0.00).仅在免疫活动组,肝组织内HBs Ag表达强度与HBV DNA存在正相关性(P=0.019),肝组织内HBc Ag表达强度、HBc Ag胞浆和胞核表达强度与HBV DNA均存在正相关性(均P<0.05);肝组织内的HBc Ag表达强度和HBc Ag胞核表达强度与G、S存在负相关性(均P<0.05).仅在免疫耐受组,肝组织内的HBsAg胞浆表达强度与G、S存在正相关性(P=0.016和P=0.003).结论肝组织内的HBs Ag胞膜表达强度与CHB免疫活动程度呈正相关.肝细胞胞浆内表达的HBsAg有可能系免疫耐受状态机体攻击的靶抗原.肝细胞核内表达的HBc Ag即是CHB病毒复制,又是免疫耐受状态的打破进展至免疫活动状态的关键,也是肝组织炎症活跃和纤维化进展的关键.

基因C型鸭甲肝病毒实验感染雏鸭的组织病理学及病毒分布

旨在研究基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)感染导致雏鸭的组织病理学变化和病毒的组织分布,为该病毒的致病机理研究奠定基础。本研究以基因C型鸭甲肝病毒感染SPF雏鸭,感染后不同时间点采取雏鸭10个不同组织器官制备组织切片,通过HE染色和免疫酶组织化学染色对感染雏鸭的组织病理学变化及病毒抗原免疫组化定位进行观察。结果表明:DHAV-C感染导致雏鸭的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、胸腺、胰脏、大脑和法氏囊共10个组织器官均发生了不同程度的病变,同时在这些器官中均有病毒抗原检出,在10个检测组织器官中,以肝脏、脾脏、肾脏、法氏囊、胸腺和胰脏等器官的组织病变和抗原检出最为明显,病变的严重程度与病毒抗原检出量成正相关。DHAV-C广泛分布到受检组织器官中,它导致的组织病理学变化严重程度与病毒抗原的检出量成正相关,推测DHAV-C入侵导致肝、肾和免疫器官的损害,是其急性感染发病的根本原因。

PCV2 WH株人工感染断奶仔猪复制多系统衰竭综合征

【目的】建立猪圆环病毒2型(PCV2)WH株人工感染断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的动物模型,为探讨PCV2的致病机理及疫苗免疫效果评价奠定基础。【方法】将PCV2WH株通过颈部肌注和滴鼻感染PCV2抗体阴性的7周龄仔猪,攻毒后第4、7 d用钥孔血蓝蛋白(KLH)进行刺激,第7、11 d再腹腔注射巯基乙酸,同时设阴性对照组(单独KLH刺激)。攻毒后第35 d扑杀所有试验猪,观察其组织病变,并取肺脏、淋巴结组织提取病毒DNA,用PCR检测PCV2;取试验猪的肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结、心脏、膀胱等组织制作石蜡切片,进行HE染色和免疫组化分析。【结果】攻毒组仔猪的临床症状主要表现为发热、消瘦、被毛粗乱、皮肤苍白;攻毒后第35 d扑杀所有试验猪,剖检发现阴性对照组未出现病理变化,而攻毒组仔猪有明显病理变化,从其病变的肺脏、淋巴结、肾脏、脾脏、肝脏、心脏组织中均能检测到PCV2。HE染色结果显示,组织病理学变化主要为间质性肺炎、淋巴细胞缺失、间质性肾炎、肝脏肝窦单核巨噬细胞增生。免疫组化分析结果显示,肺脏支气管上皮细胞呈明显阳性,部分肺泡巨噬细胞可见阳性信号,主要位于胞浆内;肠系膜淋巴结均出现较强阳性信号,主要位于淋巴细胞的胞浆内;肾间质细胞呈明显阳性。【结论】用PCV2 WH株攻毒联合KLH和巯基乙酸反复刺激断奶仔猪能成功复制出PMWS,为后续PCV2疫苗的免疫效果评价及PMWS发病机理研究提供了理想的动物模型。

双重酶标法检测溃疡性结肠炎凋亡上皮细胞Fas的表达

目的:探讨Fas/FasL介导的结肠上皮细胞凋亡在溃疡性结肠炎(UC)发病机制中的作用。方法:明确诊断的35例UC病人和15例对照人群的活检标本分别进行Fas、FasL的免疫组化染色,采用M30 Cytodeath特异性地检测结肠上皮细胞早期凋亡;对Fas及M30的表达进行相关性分析。观察连续切片和双重酶标染色中Fas和M30的共表达关系。结果:UC组上皮细胞表达Fas、FasL及M30的水平均比对照组明显增高(P<0.01);Fas与M30的表达有相关性(P<0.05);通过连续切片分别染色Fas与M30,以及双重酶标法同时染色Fas与M30,发现UC病变肠道凋亡的上皮细胞均为Fas表达阳性的细胞。结论:Fas/FasL介导的结肠上皮细胞过度凋亡可能是UC上皮层破坏的机制之一。

固定时间对口腔黏膜鳞状细胞癌组织染色的影响

目的探讨固定时间对口腔黏膜鳞状细胞癌组织HE染色和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色的影响。方法选取10例患者口腔黏膜鳞状细胞癌组织,每例各取4块,分别固定8h、24h、48h和1周,进行HE染色和高分子量细胞角蛋白(cytokeratin high molecular weight,CKH,克隆号34βE12)和广谱细胞角蛋白(cytokeratin pan,ckpan,克隆号AE1/AE3)IHC染色,观察细胞形态的优良、染色情况及IHC染色的阳性强度和阳性率。结果 HE染色和IHC染色结果均显示口腔黏膜鳞状细胞癌组织形态和染色、阳性强度和阳性率最佳为固定24h,8h为最差。固定1周者染色效果较48h差。结论本研究表明对口腔黏膜鳞状细胞癌组织,24h为最佳固定时间;组织固定不充分对HE染色和IHC染色的影响要大于固定时间过长的影响;固定时间越长,对HE染色和IHC染色效果影响越大。

H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒活载体疫苗株组织嗜性的研究

为了研究H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒活载体疫苗株[La Sota-HAmut(GD)]的组织嗜性,用重组疫苗[La Sota-HAmut(GD)]人工感染2日龄SPF鸡,接种后定期采集病鸡的各组织器官制备成石蜡切片,用建立的检测石蜡切片中[rLa Sota-HAmut(GD)]病毒的免疫酶组化染色技术,对人工感染[rLaSota-HAmut(GD)]鸡发病后病毒的组织器官亲嗜性和动态分布规律进行研究。[rLa Sota-HAmut(GD)]在胞浆内复制,主要亲嗜气管黏膜的上皮细胞和固有层腺体细胞,肝小叶间胆管上皮细胞。病毒出现的先后顺序为气管,肝脏,肺脏。结果表明:外源基因HAmut的插入对LaSota疫苗株的组织嗜性的影响很大。

腮腺阻塞性萎缩动物模型细胞凋亡及再生的研究

目的:探究大鼠腮腺萎缩再生过程的规律。方法:结扎198只Wistar大鼠保侧腮腺主导管7(A组)、14(B组)、21 d(C组)(n=66)后分别实现导管再通,采用HE染色、免疫组织化学染色和Tunel荧光检测观察再通后第0、1、3、5、7、10、14、21、28、60、90 d(记为A_0……A_(90)、B_0……B_(90)、C_0……C_(90),n=6)腮腺组织萎缩再生规律。另取6只鼠不结扎为对照组。结果:导管再通第0天,腺泡萎缩,导管扩张,管腔增大,PCNA、P53表达量以及细胞凋亡比例较正常对照组高,随后逐渐增多,并于A3、B5天达到最高值,后逐步减少,至A14、B21接近正常对照组水平,腺体组织结构恢复正常,而C组未见明显恢复。结论:腮腺导管结扎7、14 d后实现再通,腺体可完全恢复;结扎21 d后,则不能完全恢复甚至完全不能恢复。

组织新型快速脱水试剂对病理制片效果的影响

目的:探讨组织新型快速脱水试剂对病理制片及切片染色效果的影响。方法:随机选取2021年2月至2022年1月广州医科大学附属第一医院病理科的冰冻标本共40例,每例标本取两份,分别为对照组(n=40)和实验组(n=40)。对照组标本进行常规脱水处理,实验组采用组织新型快速脱水试剂处理,两组标本脱水完成后均进行常规的切片染色工作,将两组标本的脱水时间、HE染片效果、组化结果、特殊染色结果及分子检测结果进行比较。结果:实验组脱水时间短于对照组(P<0.05);实验组HE染色效果、IHC、特殊染色结果及FISH检测效果与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:组织新型快速脱水试剂具有操作流程少、时间短等优点,其组织切片染色效果与常规脱水效果具有可比性,值得在临床推广应用。

应用优化的全自动免疫组化染色方案检测错配修复蛋白MLH1、PMS2在结直肠癌组织中的表达

目的:通过优化的全自动免疫组化检测方案提高MLH1和PMS2蛋白免疫组化检测的稳定性。方法:收集2018年至2019年大坪医院结直肠癌手术标本20例,经石蜡包埋、切片、染色,显微镜下观察错配修复蛋白表达的差异。采用Ventana公司生产的BenchMark Ultra,二抗检测系统分别采用UltraView Universal DAB Detection kit(简称UV)、Optiview DAB IHC Detection kit(简称OV)和扩增试剂盒。结果:BenchMark Ultra染色机采用UV二抗检测系统错配修复蛋白的表达强度偏弱,背景不清晰,PMS2的表达可能会出现假阴性。优化染色方案后,改用OV二抗检测系统,MLH1和PMS2(PMS2需用扩增试剂盒)染色各项指标优于UV二抗检测系统,染色效果和手工相比,染色强度和阳性率比手工略好。结论:MLH1、PMS2等抗体指标在应用全自动免疫组化染色机染色前均需进行最适条件的摸索与优化,从而获得该抗体指标最佳的染色方案。

SARS-CoV N蛋白与Smad3相互作用并调节TGF-β信号通路的形态学初步研究

目的应用病理学实验技术,初步描述SARS-CoV N蛋白与TGF-β信号通路中Smad3蛋白之间相互作用的情况,及其对TGF-β信号通路下游转录产物生成的影响。方法对比观察SARS-CoV感染的恒河猴肺组织及正常猴肺组织的形态学特征,应用免疫组织化学染色法,观察猴肺组织中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)及1型纤维蛋白溶酶原活化抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)的肺组织表达;SARS-CoVNucleocapsid蛋白与Smad3双染观察二者在肺组织中的共定位情况;应用Masson染色法比较感染与正常猴肺组织中胶原含量的差异,结合分子生物学检测肺组织中TGF-β、PAI-1及Ⅰ型胶原α2链(α2 chain of typeⅠcollagen,COLlA2)的表达,探讨N蛋白影响TGF-β信号通路的影响。结果PCR结果显示TGF-β、PAI-1及COL1A2在SARS-CoV感染的猴肺组织中的表达量较正常猴肺有明显增高,免疫组织化学染色结果提示,在病毒感染的猴肺组织内TGF-β、PAI-1染色呈现强阳性,同时SARS-CoV Nucleocapsid蛋白与Smad3双染结果显示,二者在感染的猴肺组织中存在明显的共定位现象。Masson染色结果提示,病毒感染的猴肺组织胶原含量较正常猴肺组织显著增加。结论我们的研究结果为说明SARS-CoV Nucleocapsid蛋白参与调节TGF-β信号通路,促进肺组织纤维化提供了有力的形态学实验证明,为进一步理解SARS-CoV感染引起肺组织纤维化的机制提供了的较为明确体内实验数据。

p63 IHC染色2+截断值可作为骨巨细胞瘤的诊断标记

为评估骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone, GCTOB)中p63表达在鉴别骨巨细胞瘤(GCTOB)中的作用,本研究采用横断面研究,检测50个巨细胞丰富的骨病变中p63的免疫组织化学表达,并评价p63在各肿瘤中的染色强度和程度。免疫组织化学分析显示,94.12%的骨巨细胞瘤(GCTOB)、14.29%的骨肉瘤(osteosarcoma, OSA)、60.00%的非骨化性纤维瘤(non-ossifyingfibroma, NOF)、25.00%的动脉瘤样骨囊肿(aneurysmal bone cyst, ABC)、71.43%的软骨母细胞瘤(chondroblastoma, CB)、66.67%的棕色瘤(Brown tumor)为阳性,而腱鞘巨细胞瘤(giant cell tumor of the tendon sheath, GCTTS)中未检测出p63阳性。对于p63的染色强度,可以观察到58.82%的骨巨细胞瘤(GCTOB)、28.57%的软骨母细胞瘤(CB)和20.00%的非骨化性纤维瘤(NOF)呈现强染色。对于p63的染色程度:观察到58.82%的骨巨细胞瘤(GCTOB)、28.57%的软骨母细胞瘤(CB)和14.29%的骨肉瘤(OSA)尾弥漫性染色,而中等染色在骨巨细胞瘤(GCTOB)中为17.65%,非骨化性纤维瘤(NOF)为20.00%,棕色瘤(Brown tumor)为33.33%。大量骨巨细胞瘤(94.12%)为p63阳性,这比任何其他巨细胞丰富的病变多得多。然而,p63的阳性染色并不是骨巨细胞瘤(GCTOB)特异性的。本研究结论初步表明,p63是鉴别骨巨细胞瘤(GCTOB)与其他骨巨细胞瘤的一种敏感的(97.6%)和相对特异的标志物。考虑到反应的强度和程度,本研究建议采用综合评分方法对p63 IHC染色判读富含巨细胞的病灶,并将2+截断值作为骨巨细胞瘤(GCTOB)的诊断标记。