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前列腺癌组织中IPO5P1的水平及临床意义
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作者 夏志忠 孙宾 +3 位作者 李殷南 沈伟 张运伟 王少承 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2024年第4期263-266,共4页
目的 探讨输入蛋白5假基因1(IPO5P1)在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用原位杂交和实时定量PCR检测120例根治性前列腺癌手术患者的癌组织和癌旁正常组织中IPO5P1表达水平,分析IPO5P1表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系,... 目的 探讨输入蛋白5假基因1(IPO5P1)在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用原位杂交和实时定量PCR检测120例根治性前列腺癌手术患者的癌组织和癌旁正常组织中IPO5P1表达水平,分析IPO5P1表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法和Cox比例风险模型评估IPO5P1表达对前列腺癌患者无生化复发生存期(BFRS)和总生存期(OS)的影响。结果 与癌旁正常组织相比,前列腺癌组织的IPO5P1表达水平降低(P<0.05);组织IPO5P1表达与前列腺癌患者的Gleason评分、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05);单因素分析显示IPO5P1表达与BFRS有关,其中低水平组的中位BFRS为25.0个月,短于高水平组的41.0个月(HR=2.665,95%CI:1.726~4.114,P<0.001),而IPO5P1表达与OS无关,其中低水平组的中位OS未达,与高水平组(53.0个月)比较差异无统计学意义(HR=1.344,95%CI:0.795~2.273,P=0.270);多因素分析证实IPO5P1表达降低是前列腺癌生化复发的独立预后因素(HR=2.259,95%CI:1.133~4.504,P=0.017)。结论 IPO5P1表达缺失参与了前列腺癌进展,可作为前列腺癌患者诊断及预后评估的潜在分子标志物。 展开更多
关键词 前列腺癌 长链非编码RNA 输入蛋白5假基因1 临床意义
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NLS-RARα通过与importin α1/β1(KPNA2/KPNB1)结合入核并抑制U937细胞分化 被引量:1
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作者 叶娇 刘北忠 +9 位作者 李健 熊玲 余莉华 但文冉 刘冬冬 姚娟娟 袁桢 钟鹏强 刘俊梅 钟梁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期499-506,共8页
目的探究核定位信号-维甲酸受体α(NLS-RARα)异常的核定位对细胞分化的抑制作用以及其核转运机制。方法过表达带有血凝素(HA)标签的NLS-RARα慢病毒和空载体慢病毒转染HEK293T细胞和U937细胞,设为NLS-RARα过表达组(NR组)和阴性对照组... 目的探究核定位信号-维甲酸受体α(NLS-RARα)异常的核定位对细胞分化的抑制作用以及其核转运机制。方法过表达带有血凝素(HA)标签的NLS-RARα慢病毒和空载体慢病毒转染HEK293T细胞和U937细胞,设为NLS-RARα过表达组(NR组)和阴性对照组(NC组)。提取HEK293T细胞与U937细胞NC组和NR组细胞核和细胞质蛋白,Western blot法检测NLS-RARα的定位。同时采用免疫荧光细胞化学染色检测NLS-RARα的定位情况。1α,25-二羟维生素D3(1,25D3)诱导U937细胞分化,实时定量PCR,Western blot法检测细胞CD11b、CCAAT/增强子结合蛋白β(CEBPβ)在mRNA和蛋白水平,采用质谱和免疫共沉淀技术(CoIP)筛选与NLS-RARα相作用的转运蛋白,并且通过小干扰RNA(siRNA)转染验证其对NLS-RARα的核定位作用。结果NLS-RARα主要位于细胞核中。与对照组相比,过表达NLS-RARα组CD11b和CEBPβ的增加减少,说明NLS-RARα对1,25D3诱导的细胞分化有抑制作用。质谱和CoIP结果发现核转运蛋白α2/输入蛋白α1(KPNA2/importinα1)和核转运蛋白β1/输入蛋白β1(KPNB1/importinβ1)与NLS-RARα有相互作用,敲低KPNA2/KPNB1则抑制NLS-RARα入核。结论NLS-RARα通过结合KPNA2/KPNB1入核,抑制U937细胞分化。 展开更多
关键词 核定位信号 维甲酸受体α(RARα) 细胞分化 核转运蛋白α2/输入蛋白α1(KPNA2/importinα1) 核转运蛋白β1/输入蛋白β1(kpnb1/importinβ1)
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GST pull-down验证新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用 被引量:1
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作者 胡焱 段志强 +4 位作者 嵇辛勤 赵佳福 邓珊珊 李世静 熊建民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期126-133,共8页
旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因... 旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因,将其分别定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a(+)构建重组原核表达载体pGEX-6p-M、pET-32a-importinβ1,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,SDSPAGE检测重组蛋白的表达情况,并对包涵体重组蛋白进行变性和复性处理。然后以GST-M重组蛋白为诱饵蛋白,His-importinβ1重组蛋白为猎物蛋白,利用GST pull-down技术验证M蛋白与importinβ1蛋白的相互作用。结果表明,成功构建了重组原核表达载体pGEX-6p-M和pET-32a-importinβ1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得了正确表达。SDS-PAGE电泳检测显示GST-M重组蛋白主要以包涵体形式存在,而His-importinβ1重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。利用蛋白重折叠试剂盒获得了有活性的GST-M重组蛋白,将其作为诱饵蛋白,可以捕获并检测到His-importinβ1重组蛋白,但是GST标签蛋白不能结合His-importinβ1重组蛋白。利用GST pull-down技术证实了NDV M蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外具有直接的相互作用,这为深入研究importinβ1蛋白在NDV M蛋白细胞核定位的分子机制以及在NDV复制和致病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基质蛋白 importinβ1蛋白 GSTpull-down 蛋白相互作用
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Importin α1与HIV-1整合酶相互作用及其对病毒复制的影响(英文)
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作者 敖竹君 Kallesh Danappa Jayappa 姚小剑 《遵义医学院学报》 2014年第3期244-254,共11页
目的研究HIV-1整合酶与细胞蛋白Importinα1(Impα1)的相互作用及其对HIV-1复制的影响。方法采用化学发光免疫共沉淀系统定量检测细胞内HIV-1整合酶与Impα1蛋白的相互作用,同时利用基因沉默技术下调CD4+C8166 T细胞中Impα1的表达,以研... 目的研究HIV-1整合酶与细胞蛋白Importinα1(Impα1)的相互作用及其对HIV-1复制的影响。方法采用化学发光免疫共沉淀系统定量检测细胞内HIV-1整合酶与Impα1蛋白的相互作用,同时利用基因沉默技术下调CD4+C8166 T细胞中Impα1的表达,以研究Impα/β入核转运途径对HIV-1复制的影响。结果当T细胞内Impα1表达下降时,HIV-1对其感染性显著减弱。Real-time PCR分析结果显示,尽管病毒逆转录未受到影响,但其2-LTR DNA(入核指标)及整合DNA的形成受到了抑制,提示Impα1的下调明显影响HIV-1入核转运过程。结论该研究为HIV-1整合酶与Impα1蛋白之间的相互作用及其在病毒感染中的影响提供了重要的实验依据。 展开更多
关键词 HIV-1整合酶 importin1 HIV-1复制 HIV-1入核转运
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鸡importin β1基因真核表达载体的构建及亚细胞定位
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作者 孙鑫 吴燕芝 +4 位作者 董霁 冒勖 颜修万 熊建民 段志强 《中国家禽》 北大核心 2018年第4期21-24,共4页
根据GenBank已发表的鸡importinβ1基因序列,设计合成一对特异性引物从重组克隆质粒pCR2.1-importin β1中扩增鸡importinβ1基因开放阅读框,通过酶切、连接等方法将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1构建重组真核表达载体pEGFP-importin ... 根据GenBank已发表的鸡importinβ1基因序列,设计合成一对特异性引物从重组克隆质粒pCR2.1-importin β1中扩增鸡importinβ1基因开放阅读框,通过酶切、连接等方法将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1构建重组真核表达载体pEGFP-importin β1。利用脂质体转染法将pEGFP-importin β1转染DF-1细胞,24h后分别检测重组蛋白EGFP-importin β1在细胞中的表达及亚细胞定位情况。结果表明,成功构建了鸡importin β1基因的重组真核表达载体pEGFP-importin β1;将其转染DF-1细胞后得到与预期大小相符的EGFP-importin β1重组蛋白条带,荧光显微镜观察显示重组蛋白主要定位在细胞核。研究结果为进一步开展鸡importin β1蛋白与相关家禽病毒蛋白的相互作用研究奠定了工作基础。 展开更多
关键词 importin β1基因 真核表达 亚细胞定位
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鸡importin β1基因的克隆及生物信息学分析 被引量:4
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作者 胡焱 段志强 +4 位作者 嵇辛勤 阮涌 赵佳福 雷云 万彪 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期546-550,556,共6页
[目的]对鸡importin β1基因进行克隆和生物信息学分析。[方法]根据Gen Bank公布的鸡importin β1基因序列(XM_015299473)设计合成特异性引物,通过RT-PCR从DF-1细胞中扩增importin β1基因CDS区并进行克隆和测序,利用生物信息学工具对... [目的]对鸡importin β1基因进行克隆和生物信息学分析。[方法]根据Gen Bank公布的鸡importin β1基因序列(XM_015299473)设计合成特异性引物,通过RT-PCR从DF-1细胞中扩增importin β1基因CDS区并进行克隆和测序,利用生物信息学工具对其理化性质、二级结构和系统进化树进行分析。[结果]鸡importin β1基因CDS全长2 268bp,共编码755个氨基酸,该蛋白等电点为4.61,相对分子质量84.15 k Da,分子式为C3712H5901N979O1152S46。蛋白质二级结构预测显示,鸡importin β1蛋白含有丰富的二级结构,以α-螺旋为主(占64.90%)。importin β1基因同源性及系统进化树分析结果表明鸡与鹌鹑的亲缘关系最近。[结论]鸡importin β1基因的克隆和生物信息学分析为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 importinβ1基因 克隆 生物信息学
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Importin β1介导的病毒蛋白入核转运在病毒复制中作用的研究进展 被引量:4
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作者 胡焱 熊建民 +2 位作者 赵佳福 嵇辛勤 段志强 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第8期1091-1098,共8页
核转运受体蛋白importinβ1是输入蛋白importinβ家族重要成员之一,它是一种相对保守的、广泛分布于真核生物细胞内的核转运受体蛋白。许多研究表明,importinβ1能直接识别和结合含有不同类型核定位信号的病毒蛋白并转运其入核,此过程... 核转运受体蛋白importinβ1是输入蛋白importinβ家族重要成员之一,它是一种相对保守的、广泛分布于真核生物细胞内的核转运受体蛋白。许多研究表明,importinβ1能直接识别和结合含有不同类型核定位信号的病毒蛋白并转运其入核,此过程对病毒的整个复制和致病进程起着十分重要的作用。该文主要从importinβ1的结构特征、介导的病毒蛋白入核转运机制以及在病毒复制中的作用、药物阻断importinβ1参与的病毒复制等研究方面进行综述,以期为后续研究病毒蛋白细胞核定位的分子机制和功能以及抗病毒治疗提供参考。 展开更多
关键词 importinβ1 核转运受体蛋白 入核转运 病毒复制
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The nucleocapsid protein of rice stripe virus in cell nuclei of vector insect regulates viral replication 被引量:4
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作者 Wan Zhao Junjie Zhu +6 位作者 Hong Lu Jiaming Zhu Fei Jiang Wei Wang Lan Luo Le Kang Feng Cui 《Protein & Cell》 SCIE CSCD 2022年第5期360-378,共19页
Rice stripe virus(RSV)transmitted by the small brown planthopper causes severe rice yield losses in Asian countries.Although viral nuclear entry promotes viral replication in host cells,whether this phenomenon occurs ... Rice stripe virus(RSV)transmitted by the small brown planthopper causes severe rice yield losses in Asian countries.Although viral nuclear entry promotes viral replication in host cells,whether this phenomenon occurs in vector cells remains unknown.Therefore,in this study,we systematically evaluated the presence and roles of RSV in the nuclei of vector insect cells.We observed that the nucleocapsid protein(NP)and viral genomic RNAs were partially transported into vector cell nuclei by utilizing the importin a nuclear transport system.When blocking NP nuclear localization,cytoplasmic RSV accumulation significantly increased.In the vector cell nuclei,NP bound the transcription factor YY1 and affected its positive regulation to FAIM.Subsequently,decreased FAIM expression triggered an antiviral caspase-dependent apoptotic reaction.Our results reveal that viral nuclear entry induces completely different immune effects in vector and host cells,providing new insights into the balance between viral load and the immunity pressure in vector insects. 展开更多
关键词 rice stripe virus nucleocapsid protein nuclear localization importinα YY1
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