Propagation Techniques of Ewes at Early Age

The integration of hormone induction of young ewes,live oocyte collection,in-vitro fertilization and embryo transfer( JIVET),as a major breakthrough in livestock breeding technology,not only solves the problem of low oocytes obtained from adult ewes by hormone induction in production practice,but also significantly improves production efficiency. This technology can reduce the generation interval of cattle and sheep and speed up the acquisition of genes in genetic breeding. The application of this technology can help accelerate the cultivation process,shorten the generation interval,promote the industrialization and improve the economic benefits of beef cattle breed. This paper provides a reference for the research and application of new breeding and propagation techniques of beef cattle.

早熟苹果杂交一代的种胚培养

以丰艳×嗄啦、丰艳×早捷和早捷×嗄啦的杂交种胚为材料进行早熟苹果的胚培养。１／２ＭＳ培养基作为基本培养基有利于早熟苹果胚的生根、抽枝，表现为苗高，根长而粗；应用植物生长调节剂ＧＡ３、天然植物浸提物水解乳蛋白（ＬＨ）和活性碳有利于胚的萌发、生根；经０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ处理的种胚抽枝慢，苗过于粗矮，根过于粗短，而用１ｍｇ／ＬＩＢＡ处理基本上不能使种胚萌发。果实低温处理后再接种比接种后低温处理进行胚培养效果略佳。本文还对早熟苹果胚培苗适宜的生根技术及移栽方法进行了探讨。

HA对牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎体外发育影响的研究

在TCM-199中添加一些确定的辅助成分,探讨在无血清培养基中添加不同浓度HA对牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响。结果表明,在卵母细胞成熟培养液(TCM-199-m)中添加4.0mg/mL的HA时,卵母细胞的成熟率和卵裂率与对照组(BSA)无显著差异(P>0.05),分别为85.14%,83.57%和89.47%,85.24%,但显著高于其他各浓度组(P<0.05),表明HA在卵母细胞无血清成熟培养中可代替BSA。在受精卵体外培养液(TCM-199-c)中添加HA时,囊胚发育率与对照组(BSA)差异不显著(P>0.05),分别为27.64%和26.51%,但显著高于TCM-199-c组(P<0.05),表明HA对牛胚胎体外发育具有明显的促进作用,在无血清培养中可以代替BSA。当在TCM-199-c+HA中添加少量的BSA时,囊胚发育率(31.19%)显著高于其他各组(P<0.05),表明HA欲完全代替BSA还有不完善之处,有待进一步研究。

一种早期胚胎体外培养新方法的建立

建立一种不依赖于液体石蜡的早期胚胎体外培养方法——套皿法,并比较了4种不同处理方法体外培养胚胎的效果。结果显示,采用套皿法进行胚胎培养,盖液体石蜡和不盖液体石蜡皿中的胚胎在各阶段的发育率差异不显著。与套皿法相比,用单皿微滴覆盖法(Brinster法)培养的胚胎在各阶段的发育率显著降低。不覆盖液体石蜡单皿中的胚胎则阻断于二细胞阶段。实验设计的套皿法是一种有效的早期胚胎体外培养方法,为早期胚胎体外培养提供了一种新方法。

小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究

为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响,分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚.结果表明:子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P<0.01),而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P0.05),说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著,且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法.小鼠早期胚胎发育观察结果表明:超排处理后,在公母鼠合笼后76～79.5 h采胚,胚胎大多处于桑椹胚期,而在公母鼠合笼后88～91.5 h采胚,胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期;采用TCM199+15%胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的.

小鼠早期胚胎的EFS20/40、EFS40、DAP213和GP25玻璃化法冷冻保存

为了筛选适合用于小鼠不同发育时期胚胎的玻璃化冷冻方法,采用EFS20/40、EFS40、DAP213和GP25法分别冷冻保存不同发育期的小鼠胚胎。结果表明,采用EFS20/40法冷冻的2细胞期胚经解冻后发育至扩张囊胚的比率(93%)显著高于EFS40、DAP213和GP25法(分别为70.9%、39.1%和11.1%)(P<0.01);采用EFS20/40法冷冻保存小鼠4～8细胞期胚时,与EFS40相比,解冻后发育至扩张囊胚的比率差异不显著(分别为86.2%和90.0%),但与DAP213(64.5%,P<0.05)和GP25法(47.8%,P<0.01)相比其扩张囊胚率显著增高。此外,虽然EFS40法与EFS20/40法冷冻保存小鼠桑椹胚解冻后的扩张囊胚率差异不显著(分别为68.9%和70.8%),但均显著高于DAP213(38.9%)和GP25法(37.5%)(P<0.01)。结果表明,EFS20/40法适合用于小鼠的2细胞期冷冻保存,而EFS20/40和EFS40法均适合用于4～8细胞期胚和桑椹胚的冷冻。

3种中药有效成分对小鼠胚胎体外发育的影响

以mCZB添加抗生素为对照组,以分别添加0.1 mg/L小檗碱(berberine,BR)、0.5 mg/L川芎嗪(ligustrazine,Lig)和4 mg/L黄芩苷(baicalin,Bai)为试验组,比较各组胚胎孵化率、微滴中一氧化氮(Nitric oxide,NO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及孵化胚胎的细胞数量,从而探讨中药有效成分对小鼠早期胚胎体外发育的影响。结果显示,Bai组(80.2%,81.3%)、Lig组(78.9%,77.6%)及BR组(76.7%,71.6%)胚胎孵化率极显著高于对照组(50.7%、47.8%)(P<0.01)。各组间NO含量,72 h较24 h均有减少,而120 h又均有增加且最高。各组间MDA含量,72 h和120 h与24 h比较呈现增加趋势,除Bai组120 h外,对照组均高于试验组。孵化胚胎细胞计数结果显示,BR组(87.2±8.6)、Lig组(83.9±7.7)和Bai组(81.9±6.2)与对照组(77.4±5.6)差异极显著(P<0.01)。结果表明:3种中药有效成分均能促进小鼠早期胚胎的体外发育及胚胎细胞增殖,并对NO和MDA含量有一定影响。

黄芩苷、川芎嗪对小鼠体外培养胚胎冷冻-解冻及移植效果的研究

将中药有效成分黄芩苷（Baicalin，Bai）和川芎嗪（Ligustrazine，Lig）添加到小鼠2-细胞胚胎培养液中进行体外培养，比较其体外发育能力，并将体外发育的桑椹胚、囊胚进行2种程序常规冷冻。解冻后形态正常的桑椹胚、囊胚分别培养8～14h、6～8h，比较各组胚胎的冷冻-解冻发育效果及冷冻胚胎移植妊娠率和产仔率等。结果：各试验组胚胎孵化率，Bai组（80．6％）、Lig组（78．3％）极显著高于对照组（51．8％）（P〈0．01）。孵化胚胎细胞计数结果显示，Bai组（81．9±6．2）和Lig组（83．9±7．7）与对照组（77．4±5．6）差异极显著（P〈0．01）；程序1和2的桑椹胚解冻囊胚发育率，以Bai、Lig组显著高于对照组；其囊胚解冻存活率，2个试验组均好于对照组。受体妊娠率、产仔率以及初生仔鼠、离窝仔鼠平均体重、离窝成活率等指标，各组间均无显著差异（P〉0．05），但以中药有效成分各组别均好于对照组。结果表明：中药有效成分Bai和Lig能显著地提高小鼠2-细胞胚胎体外发育能力，并有利于提高冷冻-解冻后移植胚胎的发育潜力。

山羊体外受精胚胎序贯培养的研究

目的:根据早期胚胎不同发育阶段的营养需求设计体外培养体系,以建立适于山羊早期胚胎体外发育的序贯培养方法。方法:对屠宰场来源山羊卵巢卵母细胞进行体外成熟和体外受精后移入添加不同胚胎发育影响因子的培养体系中进行体外培养,显微镜观察、统计各阶段胚胎发育情况,并对培养的胚胎进行移植。结果:BSA和EGF对山羊体外受精卵具有明显促卵裂作用,培养系统中添加EGS、EGF、HTAU或β-Me可有效支持8-细胞期山羊胚胎克服发育阻滞而提高桑葚胚发育率;在不同胚胎期添加各发育影响因子进行序贯培养的卵裂率、≥8-细胞率和桑葚胚发育率分别为45.2%、60.6%和23.4%,序贯培养的胚胎移植后产羔率为11.1%。结论:宜根据早期胚胎各时期代谢特点和营养需求对山羊胚胎进行序贯培养。

牛输卵管上皮对小鼠胚胎发育的影响

模拟发情期（0-6 d）母牛外周血雌激素和孕酮浓度的变化,添加17β-雌二醇和孕酮至TCM-199中,体外培养间情期牛输卵管上皮细胞（BOECs）,同时观察了BOECs分泌蛋白（BOEP）、发情期母牛输卵管冲洗蛋白（BOP）和小牛输卵管冲洗蛋白（COP）对小鼠胚胎发育的影响。结果表明：①类固醇激素可以调节和启动体外培养的间情期牛输卵管上皮细胞的分泌活动;②BOEP比BOP和COP能极显著地促进胚胎的分裂和发育（P〈0.001）;③与对照组（未添加外源蛋白质,只添加胎牛血清）相比,BOEP的囊胚形成率极显著低于对照组（P〈0.01）,可能是缺乏某些分子量低于10 kD蛋白因子的协同作用,同时30~56kD分泌蛋白的存在,也可能参与了抑制和阻碍胚胎分裂和发育的过程。

EGCG对昆明小鼠早胚体外发育的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(-)(EGCG)对昆明(kunming,KM)小鼠早胚体外发育的影响,为改善小鼠早胚体外培养体系奠定实验基础。方法以空白M16培养液为对照组,M16中添加浓度为0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、20μg/mL EGCG为实验组,收集KM小鼠1-细胞胚进行体外连续培养,计数各组发育至2-、4-细胞胚、桑椹胚和囊胚等各个阶段的数目,并以2-细胞胚为基数,计算各组至不同阶段的发育率。结果添加EGCG实验组发育到桑椹胚和囊胚的比率明显高于对照组,其中以添加浓度为10μg/mL和20μg/mL的EGCG实验组的效果最显著,其桑椹胚发育率分别为77.3%和78.7%,而对照组只有43.2%(P<0.01)。10μg/mL和20μg/mL的EGCG实验组的囊胚发育率分别为53.0%和47.3%,也明显高于对照组(19.2%,P<0.01)。结论EGCG可以显著提高KM小鼠1-细胞胚体外发育到桑椹胚及囊胚的比率,以10μg/mL和20μg/mL浓度的EGCG效果最显著。

人参皂甙Rg1对昆明小鼠早胚体外发育的影响

目的观察人参皂甙Rg1对昆明(kunming,KM)小鼠早胚体外发育的影响,为改善小鼠早胚体外培养体系奠定实验基础。方法以空白M16培养液为对照组,M16中添加浓度为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L Rg1为实验组,收集KM小鼠1-细胞胚进行体外连续培养,计数各组发育至2-、4-细胞胚、桑葚胚和囊胚等各个阶段的数目,比较各组发育至不同阶段的比率。结果添加Rg1实验组发育到桑葚胚和囊胚的比率明显高于对照组,其中以添加浓度为10μmol/L的Rg1实验组的效果最显著,其桑葚胚发育率为59.79%,而对照组只有19.17%(P<0.01)。10μmol/L的Rg1实验组囊胚发育率为17.82%,也明显高于对照组1.87%(P<0.01)。结论 Rg1可提高KM小鼠1-细胞胚体外发育到桑葚胚及囊胚的比率,以10μmol/L浓度的Rg1效果最显著。

哺乳动物早期胚胎体外培养各细胞阶段营养需求研究

从哺乳动物早期胚胎体外培养发育阻断机理和早期胚胎的体内环境入手,阐述了胚胎体外培养各细胞阶段胚胎对营养物质的需求,寻求合理的体外培养条件和方法,以便提高体外胚胎早期的囊胚发育率。

动物早期胚胎体外培养的研究进展

胚胎的体外培养是动物胚胎工程技术的基础环节之一,也是胚胎移植重要的前期基础。由于在体外培养过程中,早期胚胎对环境的变化较为敏感,导致早期胚胎发育到囊胚的成功率不高,因此,如何提高囊胚率是核心问题。就动物早期胚胎体外培养的培养环境、胚胎培养液添加物以及胚胎体外培养体系等方面的研究进展进行综述,同时对胚胎体外培养技术目前存在的一些问题进行了总结,并对其前景做了展望。

HLA-G在人类早期胚胎中的表达及应用价值

人类白细胞抗原(HLA)G能表达于人类胚胎滋养层细胞,并参与妊娠期免疫调控。HLA-G可通过调节细胞因子释放来诱导免疫耐受性的产生,调控滋养层细胞的侵入能力并且促使子宫螺旋动脉血管的重塑,促进胚胎成功着床和维持妊娠。HLA-G在人类卵母细胞及早期胚胎2细胞至囊胚阶段均有表达,并与胚胎分化程度相关;分泌可溶性HLA-G的胚胎在体外受精-胚胎移植中的临床妊娠率和种植率较高,胚胎培养上清液中可检测到HLA-G,含量受检测方法、灵敏度等因素影响;HLA-G结合形态学评分可更好地预测胚胎发育潜能,有望成为胚胎质量评估的可靠生化指标。

哺乳动物早期胚胎发育研究进展和伦理

早期胚胎发育关乎生命健康本源。解析人类早期胚胎发育调控机制可从源头提升人口健康,提高人口素质,从而促进经济社会可持续发展。然而,受限于技术和伦理,人类早期胚胎发育调控机制尚未得到全面解析。近年来,随着哺乳动物胚胎体外培养和“类胚胎”等技术的发展,人类进入解开自身早期胚胎发育之谜的最好时代,同时也迎来了新一轮伦理挑战。本文系统地回顾了以啮齿类和灵长类为主的哺乳动物早期胚胎发育领域的研究进展,探讨了人类胚胎研究相关的伦理争议,展望了早期胚胎发育研究的发展方向,希冀为人类认知早期胚胎发育事件和出生缺陷及多种发育源性疾病的发病机制与诊疗提供新思路和新手段。

巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对小鼠胚胎体外发育的影响

以小鼠自然受精与体外受精胚胎为模型,探索鼠源巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在小鼠胚胎早期发育过程中的生理功能。分别使用添加不同剂量(对照组:0 ng.mL-1;试验组:0.5、2和10 ng.mL-1)GM-CSF的化学限定培养基连续培养小鼠自然受精、体外受精原核期与2细胞期胚胎,检测其胚胎着床前发育效率(卵裂率、囊胚率)及囊胚的质量(囊胚总细胞数、ICM/总细胞数的比率、凋亡指数)。结果发现,对自然受精胚胎而言,原核时期添加不同剂量的GM-CSF,其卵裂率、囊胚总细胞数、ICM/总细胞数的比率在各组之间均差异不显著,但10 ng.mL-1试验组的囊胚率显著低于对照组(61.6±5.1)%(P<0.05);2细胞时期添加不同剂量的GM-CSF,其囊胚率、囊胚总细胞数、ICM/总细胞数的比率在各组之间均差异不显著,但试验组中的囊胚凋亡指数均显著低于对照组(P<0.05)),并且试验组中2 ng.mL-1的囊胚凋亡指数最低,显著低于0.5 ng.mL-1(P<0.05),其他试验组之间的囊胚凋亡指数没有统计学上的差异性。对体外受精胚胎来说,原核时期添加GM-CSF,其卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数、ICM/总细胞数的比率在各组之间均无显著性差异;在2细胞时期,10 ng.mL-1组的囊胚率显著低于对照组及其他2个试验组(P<0.05),但各组之间的囊胚总细胞数、ICM/总细胞数的比率均无显著性差异。本研究结果表明,在化学限定培养基中添加一定剂量的GM-CSF有利于改善小鼠自然受精与体外受精囊胚的质量,但剂量过高可能不利于小鼠受精胚胎的早期发育。

可见光谱照明对小鼠卵母细胞及早期胚胎发育质量的影响

卵母细胞及早期胚胎在体外提取时难免受到可见光照明的刺激。但光照明对其体外发育质量的影响仍不明确。结合体外培养技术、无损成像技术(全场光学相干层析系统)及三维重构技术,在光强与曝光时间一致的条件下,首次实时原位地,从形态学角度,分析了不同可见光谱对小鼠卵母细胞及早期胚胎发育质量的影响。发现(1)与白光照明相比,蓝紫光显著降低卵母细胞生发泡破裂及第一极体排出比率,而在绿光及红光照明下,生发泡破裂及第一极体排出比率明显提高。(2)与白光组相比,蓝紫光组囊胚发生率明显下降,凋亡程度明显加大,而绿光及红光组囊胚发生率显著上调,凋亡程度明显减弱。这表明蓝紫光对小鼠卵母细胞及早期胚胎发育的损伤最大,而绿光和红光几乎无损伤。

哺乳动物胚胎体外共培养系统研究进展

该文较全面地概括了哺乳动物胚胎体外共培养系统的发展和现状 ,从共培养系统的体细胞类型以及胚胎发育的阶段等方面阐述了影响体外共培养效果的因素 。

小鼠早期胚胎体外培养的实验研究

本试验采用国产化学试药和哈尔滨地区的天然水,制备了 Brinster 化学合成培养液。把160枚通过超数排卵获得的2-细胞期小鼠胚胎放在添加适量牛血清白蛋白或胎牛血清的 Brinster 化学合成培养液内,并在适当湿度、5%CO_2和95%空气的气相环境、37℃温度条件下培养。58小时后,大约67%4小鼠2-细胞期胚胎发育到桑椹胚阶段;大约32%的小鼠桑椹胚发育到囊胚期阶段。试验证明,用国产化学药品和哈尔滨地区水配制的培养液可以对早期小鼠胚胎进行体外培养研究。