我国马流感病毒分子生物学诊断方法及基因工程疫苗的研究进展

马流感(Equine influenza,EI)是由马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)引起马属动物的一种高度传染性疾病,给全球马属动物产业造成重大经济损失。本文论述了我国马流感病毒分子生物学诊断方法,包括常规PCR方法、荧光PCR方法、环介导等温扩增技术等,并就其基因工程疫苗研究进行了着重阐述,以期为该病的诊断和防控提供参考。

中医药联合抗流感毒药物治疗甲型流感的回顾性研究

目的 比较中医药联合抗流感药物玛巴洛沙韦与奥司他韦的临床疗效。方法 回顾性收集流感病例155例,根据使用抗流感药物的不同分为玛巴洛沙韦组和奥司他韦组,2组均根据中医证型给予相应的中成药或中药流感协定方联合治疗,比较2组退热时间、退热前服用退热药的次数以及临床疗效。结果 中医药联合玛巴洛沙韦组退热中位时间(16.5 h)少于奥司他韦组(24.0 h),总有效率(98.7%,77/78)高于奥司他韦组(93.5%,72/77)(P <0.05)。结论 抗流感药物玛巴洛沙韦较奥司他韦治疗甲型流感退热效果更快,疗效更优;中医药联合抗流感病毒西药可能发挥多靶点的协同作用,有待进一步的大样本研究证实。

1株具有预防低致病性禽流感作用的植物乳杆菌BLCC2-0125应用研究

为验证1株保藏的具有较强免疫功能的植物乳杆菌在预防低致病性禽流感方面的作用,以图有效防控H9N2禽流感的流行;本研究在口服及喷雾植物乳杆菌BLCC2-0125后,进行了H9N2病毒的攻毒,通过肠黏膜sIgA抗体、气管黏膜sIgA抗体、血清IgG抗体水平、IFN-γ水平及H9抗体对口服及喷雾免疫BLCC2-0125后效果进行了综合评价;结果发现,BLCC2-0125口服及喷雾的使用方式能够快速有效诱导高水平肠黏膜sIgA及气管黏膜sIgA的产生,并诱导了细胞因子的产生,激活了细胞免疫反应,同时还能够促进体液免疫的产生,IgG和高水平的血清H9抗体可中和侵入机体的病毒,以弥补对二十多日龄肉鸡全身禽流感抗体缺乏期的保护;因此BLCC2-0125可以提供黏膜免疫、细胞免疫及体液免疫的综合保护,为机体在病毒感染早期提供强有力的保障,为更有效的诱导全身免疫反应提供了基础,对综合防治低致病性禽流感具有重要的意义。

麻黄杏仁甘草石膏汤治疗流行性感冒的疗效和安全性分析

为分析对流行性感冒患者施以麻黄杏仁甘草石膏汤的效果及安全性,选择遵义市汇川区洗马路社区卫生服务中心2022年7月1日—2023年6月30日间纳入的流行性感冒患者126例作为研究对象,采用双盲法平均分为对照组(采用磷酸奥司他韦颗粒治疗)和观察组(采用麻黄杏仁甘草石膏汤治疗),对比两组患者中医证候评分、炎性因子、疗效、安全性。结果显示,经治疗5d后,观察组患者各项中医证候评分均低于对照组(P<0.05),观察组患者IL-6,TNF-α,CRP均低于对照组(P<0.05),观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05),观察组不良反应总发生率低于对照组(P<0.05)。研究发现,麻黄杏仁甘草石膏汤能改善流行性感冒症状,安全性高,效果显著,值得推广应用。

当前全球禽流感流行概况及特点分析

为了解全球禽流感的流行现状和特点,以OIE、FAO近10余年来通报的禽流感疫情为基础,分析全球禽流感流行特点。结果表明,禽流感的季节性暴发特征已不十分明显;病毒变异重组加速,出现多血清亚型共存;候鸟成为禽流感病毒散播的重要传播途径;病毒的公共卫生影响持续存在。同时,H5N1亚型高致病性禽流感疫情已从全球性暴发转变为区域性流行。

规模化蛋鸡场H9N2亚型禽流感疫苗免疫效果调查

为了解湖北省规模化蛋鸡场H9N2亚型禽流感疫苗的免疫效果,本研究在2014年1月至12月从湖北省13个地区选择不同规模化蛋鸡场,随机采集蛋鸡血样2189份,用血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验测定了H9N2亚型禽流感抗体滴度。对样本检测结果进行统计与分析显示,1月份到5月份样本HI抗体滴度平均值呈上升趋势,1月份检测的样本抗体滴度最低,为9.26log2,5月份检测的样本抗体滴度最高,为12.34log2。13个不同地区样本抗体滴度存在一定的差异,抗体滴度最低地区的平均值为5.76log2,滴度最高地区为11.58log2。对不同日龄蛋鸡样本检测结果分析显示,随着日龄增长,样本平均抗体滴度值呈现逐渐上升趋势,蛋鸡日龄≤120 d的样本抗体滴度平均值最低,为10.21log2,300日龄以上的蛋鸡样本抗体滴度平均值最高,为11.31log2。检测结果表明,湖北省规模化蛋鸡场H9N2亚型禽流感的平均抗体滴度值水平总体良好,合格率和优秀率较高,但不同地区、不同日龄和不同月份蛋鸡H9N2亚型禽流感抗体存在差异。

H3N2亚型犬流感病毒NP蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备

将分离的H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)A/Canine/Nanjing/11/2012(H3N2)株的核蛋白(NP)基因克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,构建重组表达质粒p ET-NP,然后转化大肠杆菌E.coli Rosetta(DE)感受态细胞,经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果显示,大肠杆菌表达的重组NP蛋白的分子量约为61 k Da,与预期相符,并能与犬CIV阳性血清发生特异性反应。将表达的重组NP蛋白进行纯化后,免疫大白兔制备抗NP蛋白多克隆抗体血清,Western blot检测该血清可与CIV的NP蛋白发生特异性反应,间接ELISA检测该多克隆抗体血清的效价达1:30 000,显示了较高的抗体效价。本研究为CIV快速检测方法的建立和流行病学调查奠定了科学依据。

活禽批发市场内家禽停留时间与H9亚型禽流感病毒检出的关系

为了解上海市活禽批发市场中家禽停留时间与H9亚型禽流感病毒检出之间的关系,连续4 d每隔24 h在2个批发市场各4个固定摊位共采集960份活禽咽喉/泄殖腔拭子样品。采用H9亚型荧光RT-PCR方法对样品进行检测,结果发现随着时间的推移,H9亚型禽流感病毒在同一个摊位和不同摊位间传播扩散,并且随着家禽在批发市场内停留时间的延续,H9亚型禽流感病毒的阳性检出率明显上升,72 h时最高达到24.58%,提示我们应加强活禽批发市场禽流感的监测和监管。

猪流感病毒新型核糖体移码蛋白PA-X特有序列的原核表达、纯化及鉴定

核糖体移码蛋白PA-X是流感病毒的一种新型蛋白,为了研究该蛋白对于猪流感病毒的生物学特性的影响,我们进行了PA-X特有序列的原核表达、蛋白纯化及其鉴定。通过RT-PCR和重叠PCR方法扩增PA-X特有序列的基因,利用基因重组技术构建原核表达载体,并进行菌液PCR和菌液测序鉴定,鉴定正确后克隆转化到BL21(DE3)中,进行蛋白表达及可溶性分析,同时用镍柱亲和层析法对其进行纯化。通过菌液PCR序列鉴定,PA-X特有序列的原核表达载体序列正确,编码框正确。转化BL21后目的蛋白表达成功,且大多数为可溶性蛋白。Western blot结果表明制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应性。

贵州省部分马病血清学调查

[目的 ]调查贵州省马群马流感病毒、马疱疹病毒1/4型或马动脉炎病毒感染情况。[方法 ]用酶联免疫吸附试验(ELISA)对采自贵州省9个市(州)及第九届民运会参赛马匹的363份血清进行了A型流感病毒、马疱疹病毒1/4型、马动脉炎病毒和非洲马瘟病毒抗体检测。[结果 ]结果显示这四种病原的血清抗体群阳性率分别为79.49%(31/39)、7.69%(3/39)、43.59%(17/39)和0%(0/39),贵州本地役用马和赛马差异不显著(P>0.05);血清抗体个体阳性率分别57.85%(210/363)、1.38%(5/363)、11.29%(41/363)和0%(0/363),其中贵州本地役用马阳性率分别为38.16%(87/228)、4.39%(1/228)、8.33%(19/228)和0%(0/228),赛马阳性率分别为91.11%(123/135)、2.96%(4/135)、16.30%(22/135)和0%(0/135)。相比之下,A型流感病毒及马动脉炎病毒抗体阳性率存在差异(P<0.01或0.01<P<0.05),马疱疹病毒1/4型病毒抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。[结论 ]调查表明贵州省部分马群存在不同程度的马流感病毒、马疱疹病毒1/4型或马动脉炎病毒感染。

2019年上半年甘肃省天水市鸡H7N9流感免疫抗体检测

为掌握甘肃省天水市鸡群H7N9流感免疫抗体水平,2019年56月在全市34个不同类型采样场点,随机采集820份鸡血清样本,采用血凝与血凝抑制试验进行H7N9流感免疫抗体检测。结果显示,10个蛋鸡场、10个肉鸡场、5个种鸡场的场合格率全部为100%,平均样品合格率分别为99.0%、98.7%、98.0%;5个散养村的场点合格率为60.0%,平均样品合格率为76.7%;4个活禽交易市场的场点合格率为25.0%,平均样品合格率为40.0%。结果表明,规模养鸡场H7N9流感的免疫保护水平较高,受病毒威胁程度较低,但散养户和活禽交易市场的H7N9免疫效果较差,存在暴发疫情的潜在风险,需重点加强免疫和病原学监测。

利用反向遗传技术构建细胞高适应性的H9N2流感病毒

H9N2亚型禽流感病毒通常在鸡胚上增值性能高,但在细胞上增值能力差。为了获得在细胞上高效表达H9N2亚型禽流感HA和NA抗原的疫苗株,通过反向遗传操作技术将A/Chicken/Shanghai/441/2009(H9N2,SH441)的HA和NA基因与A/Puerto Rico/8/34(H1N1,PR8)的6个内部基因进行人工重组,拯救并获得了1株禽流感重组病毒441-PR8,并对它的生物学特性进行了研究。结果表明,重组病毒441-PR8株在细胞上的增殖能力明显高于野生毒株SH441,该重组病毒有望成为H9N2亚型禽流感疫苗研制的候选毒株。

儿童甲型H1N1流行性感冒83例确诊病例临床分析

目的:总结儿童甲型H1N1流行性感冒(流感)的临床特征及治疗经验。方法:回顾分析2009年8月8日-11月2日在北京甲流定点治疗医院发热病房隔离治疗并达到出院标准的83例甲型H1Nl流感确诊患儿的流行特征、临床特点及疗效。结果:83例患儿均为北京市各中小学学生,其中64例无明确密切接触史,但其学校出现过甲流感染病例。4例为输入性病例,13例有明确的甲流密切接触史。患儿的主要临床症状有发热95.1%、咳嗽82.7%、咳痰39.7%、流涕27.7%,咽痛25.3%、肌肉酸痛1.2%、头晕、头痛2.4%。部分患儿出现胆固醇、直接胆红素、乳酸脱氢酶等轻度异常,极少数患儿出现轻度转氨酶及心肌酶异常。治疗均参照中国国家卫生部颁布的《甲型H1N1流感诊疗方案》进行治疗。治疗后均达到出院标准,病毒核酸检测连续2次阴性,距出现首发症状的时间4～14d,住院时间2～11d。结论:新型甲型HlNl流感大部分症状轻微、病程较短;只有少部分可出现喘憋、呼吸困难及缺氧等严重合并症,但如无严重基础疾病,患儿均能治愈,预后良好。

华东地区6株不同年份的H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化分析

为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)遗传演化趋势,本研究选用6株分布于2011-2019年华东地区H9N2分离株来进行基因组遗传进化分析。6株H9N2分离株均属于S基因型、低致病性,但毒株之间核苷酸和氨基酸同源性低。系统发生树上不同年份毒株各基因片段虽起源相同,但分布于不同分支。关键氨基酸位点分析表明,6株毒株均具有优先结合哺乳动物α-2、6 Gal受体的关键氨基酸位点:HA 226L、155T;内部基因片段出现多个哺乳动物适应性的关键位点变异,如PB2蛋白的I292V和A588V、PA蛋白的K356R、S409N等;M2蛋白均存在对金刚烷抗性的S31N突变。综上,H9N2亚型AIV近10年基因组相对稳定,但不同蛋白均出现一致的位点变异,使其对哺乳动物宿主适应性增强,提示我们应进一步加强对H9N2亚型AIV的监测。

犬流感的流行病学研究进展

近年来,不同宿主来源的流感病毒感染犬的病例报道使得犬成为流感病毒生态循环中的重要中间宿主。介于人与犬之间的亲密关系,其公共卫生意义越来越值得人们关注。本文从流感病毒由马—犬、禽—犬、猪—犬和人—犬等跨宿主传播方面阐述不同宿主流感病毒在犬中的流行现状及其重配现象,这对今后全面掌握其流行特征和切断其传播途径具有重要的借鉴和指导意义。

H9N2亚型禽流感病毒PA-X蛋白功能研究

本研究选取了一株H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/2093/2009毒株(简称A2093),分别构建了共表达PA-X和PA蛋白的真核表达质粒、单表达PA蛋白和PA-X蛋白的真核表达质粒,研究PA-X对宿主蛋白表达及流感病毒聚合酶活性的影响。结果显示:同时表达PA-X和PA蛋白可以强烈抑制宿主蛋白表达,单独表达A2093的PA-X同样具有较强抑制宿主蛋白表达的功能,而仅表达PA蛋白不影响宿主蛋白表达;在A2093的复制子系统中PA-X缺失后聚合酶活性明显提高;利用反向遗传操作技术拯救出缺失PA-X的A2093ΔPA-X毒株,在MDCK和LMH细胞上比较其与亲本A2093毒株复制能力的差异,发现在MDCK和LMH细胞上,从接种后12~36 h的不同时间点A2093ΔPA-X比A2093病毒低度明显降低。

犬流感病毒的研究进展

犬流感(CI)是由犬流感病毒(CIV)引起的以呼吸道症状为主的犬类传染性疾病。2004年,在犬体内发现马源犬流感病毒后,人源、猪源、禽源等多种不同动物来源的犬流感病毒相继出现。这些病毒在犬体内复制、重配,甚至通过犬传播至其他宿主,对其他动物造成威胁。文章以犬流感的进化过程为基础,分析流感病毒在宿主改变过程中发生的对犬的适应性变化,以及不同犬流感的重点防治方向。

MyD88/NF-κB信号通路与流感病毒感染相关性探析

MyD88/NF-κB信号通路是炎症反应过程中的关键通路,通过调节MyD88/NF-κB信号通路进而影响蛋白和基因表达是当今研究的热点问题。本文从该信号通路的构成和流感病毒感染的相关性探讨了该信号通路与流感病毒感染之间的关系。通过调节MyD88/NF-κB信号通路中的关键因子来调控相关基因表达,继而影响细胞炎性因子的产生,减轻炎症反应,达到抗炎的目的。这为中药抗流感病毒感染作用机制的实验研究提供了依据。

犬猫流感病毒的研究进展

能感染犬和猫的流感病毒主要包括H3N8、H3N2、H5N1和H1N1等亚型。虽然目前尚未有关于犬猫流感病毒感染人的报道,但由于犬猫是人类重要的伴侣动物,与人亲密接触,犬猫流感病毒对危害公共卫生健康具有潜在威胁。本文围绕犬、猫流感病毒的流行情况及生物学特性进行综述,旨在为犬猫流感病毒的防控工作提供参考。

PI3K/AKT信号通路与流感病毒感染相关性研究

PI3K/AKT信号通路是一条关于细胞增殖和存活的信号通路,该信号通路在流感病毒的感染过程中发挥着重要的作用。从PI3K/AKT信号通路的构成、主要功能、通路下游关键分子与流感病毒的相关性及调控PI3K/AKT信号通路的中医药研究等方面出发,通过梳理有关PI3K/AKT信号通路的研究,能够对中医药科学有效防治流行性感冒作用机制提供参考。