利用胚珠培养技术培育棉属种间杂种植株的研究

本研究利用陆地棉×中棉、陆地棉×海岛棉、独秆突变体×海岛棉、海岛棉×中棉杂交，进行胚珠培养，获得种间杂种植株。结果表明：这４个杂交组合均获得一定频率的胚（包括成熟胚和不成熟胚）及成熟胚萌发的苗；同一组合的杂种胚珠，在不同培养基上获得的胚和成熟胚的频率不同；不同组合的杂交胚珠，在同一培养基上培养的结果有明显差异；进行杂种胚珠培养的适宜时期为授粉后４～６ｄ，２ｄ的胚珠培养易产生愈伤组织，成胚率低，８ｄ后幼胚败育或落桃；适合杂种胚珠早期生理条件的培养基为：ＢＴ基本培养基＋ＮＨ４Ｃｌ１０００ｍｇ／ｌ＋ＩＡＡ１５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０２ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ００６ｍｇ／ｌ；氨态氮能提高成胚率；单一的培养基不能满足杂种胚珠的培养需要。

利用胚和胚珠的离体培养获得甘蓝型油菜与青花菜的种间杂种(英文)

以波兹南农业大学植物遗传育种系提供的甘蓝型胞质雄性不育油菜为母本与青花菜杂交 ,授粉后 1 9d,观察其种间杂交的有效性 ,并对其胚和胚珠进行离体培养。结果表明 :种间杂交的亲和性及胚珠退化时间随杂交组合不同而异 ,亲本的基因型对其有很大的影响。

利用离体培养克服花生杂交不亲和性的研究

将花生栽培种梧油１号和根茎区组的未定名种Ａ．ｓｐ（９６１８）杂交授粉后的胚和胚珠在不同种类和浓度激素的ＭＳ培养基上进行离体培养。从离休胚的胚养上获得了丛生幼枝。胚珠培养表现有３种：①有些胚珠内的胚长出来；②有些胚珠内的胚表现不同程度的分化生长；③还有一些胚珠变黑坏死。将这些胚解剖出来转移到ＭＳ＋２ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．５ｍｇ／ＬＢＡ或ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＢＡ的培养基上也获得了丛生幼枝，再将这些丛生的枝转到ＭＳ＋０．０５ｍｇ／ＬＫＴ＋２ｍｇ／ＬＩＡＡ培养基上生根，获得了杂种植株。

黑穗醋栗(Ribes nigrum L.)未受精胚珠培养诱导体细胞胚状体和植株再生的研究

本文报告了黑穗醋栗(Ribes nigrum L.)三个栽培品种中的薄皮黑豆未受精胚珠(花粉发育到单核晚期)在MS基本培养基附加植物激素BA,2.4-D和GA_3中形成了体细胞胚状体。长度约为0.5—1.0cm大小的胚状体在生根培养基中可以形成完整的再生植株。经过筛选得到了体细胞胚性愈伤组织无性系,继代培养二年多仍能保持胚状体形成能力。试验结果表明:诱导体细胞胚胎发生受品种和接种时期的影响,适宜的接种时期为花粉发育到单核晚期。培养基中的BA为诱导胚胎发生和保持胚性愈伤组织无性系所必需。

甜橙成熟果实未发育胚珠的离体培养

路比血橙和锦橙成熟果实的未发育胚珠在含ME(1000mg/l)的MT培养基上培养,胚状体诱导率和每个胚珠平均产生胚状体数均较高。带胚状休的愈伤组织转入该培养基上继代培养,仍可保持其胚性特点。将子叶形胚状体转至含GA(1mg/l)和CH(500mg/l)的MT培养基上,成苗率较高。这为扩大柑桔组织培养的外植体来源和克服外植体的季节限制提供了新途径。

牡丹组织培养技术研究进展

牡丹是我国特有的观赏、药用和油用植物,高效的组织培养技术是加速其育种和繁殖的重要基础。牡丹组织培养技术历经约半个世纪的研究,主要进展包括以下3个方面:1)器官组织培养再生:牡丹器官组织培养再生主要包括器官发生、体细胞胚发生和无菌短枝扦插这3条途径。(1)牡丹器官发生途径包括愈伤组织和分生结节培养,牡丹的各种繁殖器官和营养器官皆可作为外植体诱导得到愈伤组织,但愈伤组织进一步分化器官难度较大,且尚未得到完整再生植株;牡丹分生结节培养以黄化嫩茎和叶柄薄层为外植体,前人已初步建立了紫斑牡丹和牡丹芍药组间杂种——伊藤的分生结节发生体系,并实现了不定芽和叶状体的分化,但分化率极低,且未能获得再生植株,还发现牡丹分生结节中含有丰富的芍药苷和丹皮酚,这证实了其在药用成分生产中的应用潜力。(2)牡丹体细胞胚发生途径包括直接发生和间接发生,前人通过筛选基因型、培养基和发育时期等实现了多个牡丹品种的体细胞胚直接发生,但体细胞胚萌发率低,且再生成苗困难;间接发生途径以叶柄为外植体,已诱导得到愈伤组织并获得体细胞胚,但体细胞胚发生率极低。(3)牡丹无菌短枝扦插技术历经约30年的研究,完善的启动、增殖、生根和驯化移栽技术体系已经建立,但该技术仍无法实现产业化应用,主要原因在于试管苗的顶芽休眠、两步生根成本高以及移栽成活率低。2)胚珠和胚离体培养成苗:分别以完成器官分化的胚珠(花后60天)和成熟胚(花后90天)为外植体,前人通过筛选植物生长调节剂建立了紫斑牡丹和杨山牡丹的胚珠和胚离体培养体系,并获得了组培苗,但组培苗在驯化移栽阶段死亡。3)花药(花粉)离体培养成苗:以处于第1次分裂期的花粉为外植体可诱导得到花粉胚,培养过程中不同发育状态的花粉胚表现出不同的器官分化能力,其中聚集成簇的花粉胚无法分化出芽和根,而独立生长的花粉胚可分化出根系,但无法分化出芽。综上,牡丹组织培养研究目前仍处于应用基础研究的初级阶段,后期研究一方面需要针对褐化、器官间接发生困难以及试管苗的生根和移栽问题进行技术优化,另一方面亟需从生理甚至是分子的层面对组织培养中的褐化、器官发生和顶芽休眠机理等展开研究,从而为组织培养技术的优化提供理论支撑。

无核葡萄离体胚珠发育影响因子及其生理变化

【目的】研究无核葡萄离体胚珠发育影响因素,为提高无核葡萄胚挽救育种效率提供技术参考。【方法】选择‘红宝石’无核葡萄为材料,在自然授粉后65 d摘取葡萄幼果,消毒处理后,剥取胚珠接种到不同培养基上。研究不同培养基处理(4种不同的基本培养基、附加4种不同蔗糖含量,共计16个处理)和不同培养时间对胚珠发育率和生理指标的影响,并对胚珠发育率和不同生理指标进行相关分析。【结果】在胚珠离体培养阶段,不同处理对胚珠发育率影响不同。采用固液双层基本培养基(改良MM3固体培养基+8 mg·L-1 ER液体培养基)、附加45 g·L-1蔗糖、培养49 d时,胚珠发育率最高,达到(42.23±6.93)%。不同处理对离体培养胚珠各生理指标影响不同。当培养时间相同、基本培养基为固液双层培养基时,胚珠淀粉含量变化差异不显著,而可溶性蛋白含量、总酚含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性均增加,过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性均降低;随着附加蔗糖含量的增加,胚珠淀粉含量变化差异不显著,而可溶性蛋白、总酚含量和SOD酶活性均出现先增加后下降的趋势,POD酶和PPO酶活性均出现逐渐升高的趋势。当培养基处理相同时,随着离体培养时间的延长,胚珠淀粉含量出现逐渐下降的趋势,可溶性蛋白含量、总酚含量和SOD酶活性均出现先增加后下降的趋势,POD酶和PPO酶活性均出现逐渐升高的趋势。相关分析发现,胚珠发育率与胚珠可溶性蛋白含量、总酚含量和SOD酶活性呈极显著正相关,与POD酶活性和PPO酶活性呈极显著负相关,与淀粉含量相关性不显著。【结论】采用固液双层基本培养基(改良MM3固体培养基+8 mg·L-1 ER液体培养基),附加45 g·L-1蔗糖,培养时间49 d时,胚珠发育率最高,离体培养的胚珠生理活性也较强。胚珠发育率与离体培养胚珠的可溶性蛋白含量、总酚含量和SOD酶活性呈极显著正相关,与POD酶活性和PPO酶活性呈极显著负相关。