猪圆环病毒2型感染的血清学分析

应用间接免疫荧光技术 ,测定了浙江省内 4 4个猪场 2 0 0 0～ 2 0 0 2年间的 2 0 39个血清样本 ,对不同地区、年龄和品种猪的血清学数据进行了系统分析。结果显示 ,浙江省 4 4个猪场均有猪圆环病毒 2型 (PCV2 )感染 ,猪场的感染率为 10 0 % ,全省猪的 PCV2感染的平均血清阳性率为 5 8.31% ,其中种猪感染的血清阳性率为 5 9.38% ,断奶后猪感染的血清阳性率为 5 6 .6 5 %。长白种猪感染的血清阳性率为 4 4 .83%、长白仔猪感染的血清阳性率为 6 4 .2 8% ,明显高于大约克和杜洛克种猪和仔猪的感染率。 PCV2感染的血清阳性率高的种猪和仔猪群 ,其 PRRSV和 Pr V的抗体阳性率低。这些结果说明 ,PCV2在猪群中的感染非常普遍 ,不同品种猪对 PCV2的易感性不同 。

间接免疫荧光抗体法对鸡传染性支气管炎病毒进行抗原定位

应用间接免疫荧光抗体（ＩＦＡ）法对ＩＢＶ感染后ＳＰＦ鸡不同脏器进行了跟踪检测。结果发现，在ＩＢＶ感染后的第７天，在气管、肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织细胞中均不同程度地出现特异性的荧光。表明在感染的初期，ＩＢＶ具有广泛的组织嗜性；在感染的第１０天，只有肾脏、气管或肺脏中呈现荧光，而以肾脏中的荧光最强，特异性荧光持续时间最长的是肾脏，可达１４天，病毒存在于肾小管间质内浸润的淋巴细胞和巨噬细胞胞浆中。实验结果证实，ＩＦＡ方法具有直观、特异等特点，在抗原定位上具有独特的优点。

用单克隆抗体PAP桥联酶标技术检测猪粪中的猪痢疾密螺旋体

用单克隆抗体(McAb)过氧化物酶—抗过氧化物酶(PAP)桥联酶标方法,在实验室检测8株猪痢疾密螺旋体(T.h)纯培养物,全部“+”,检测无害密螺旋体(T.i)及禽弧菌(AV)各1株全为“-”。用该法检测来自猪痢疾(SD)猪20头份全为“+”,健康猪39头份全为“-”和可疑猪场的猪粪201头份,其中38头份“+”,163头份“-”共260头份,其结果与McAb间接荧光抗体(IFA)试验一致。捎除了用多克隆抗血清(PcAS)IFA和结晶紫染色法对T.i及在健康猪群中所出现的假阳性。PAP法具有高度敏感性和特异性,且染色标本能长期保存。初步结果表明该法可以成为诊断工作和免疫学研究的有用工具。

单克隆抗体鉴别溶组织内阿米巴的致病性

用由溶组织内阿米巴致病株（ＨＭ－１：ＩＭＳＳ）为免疫原诱导产生的特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）４Ｇ６，与从急性阿米巴痢疾患者或包囊携带者分离的溶组织内阿米巴（Ｅｈ）滋养体进行间接荧光抗体反应和淀粉凝胶电泳同工酶分析。显示，从有发热、腹泻、脓血便患者体内分离的虫株与ＭｃＡｂ４Ｇ６出现阳性反应，滴度达１：５１２０；同工酶分析也属于致病性酶株群Ⅱ。而有发热、腹泻、无脓血便患者体内分离的虫体与ＭｃＡｂ４Ｇ６均为阴性反应，且为非致病性酶株群Ⅰ。提示，致病性虫株与非致病性虫株的免疫原性不同，应用本法可准确鉴别致病性虫株，且简便、价廉、快速，还可用于流行病学调查。

新疆昭苏县马感染嗜吞噬细胞无浆体血清学与分子生物学调查

马属动物是嗜吞噬细胞无浆体的重要天然宿主,旨在弄清新疆昭苏县马感染嗜吞噬细胞无浆体情况和病原特征。对采集的100份马血清进行间接免疫荧光(IFA)检测嗜吞噬细胞无浆体抗体,对阳性样品相对应的DNA样品通过PCR扩增、16S rRNA基因测序、序列比对、完成了分子分型分析。间接免疫荧光法(IFA)检出率为8%(8/100),通过对阳性样品的基因组进行16S rRNA扩增,序列分析进一步确定马存在嗜吞噬细胞无浆体感染情况。分子分型发现存在2种嗜吞噬细胞无浆体基因型,ZS23和ZS40这2种基因型在我国及周边其他国家均有分布,研究结果将为该地区的嗜吞噬细胞无浆体感染情况的调查和防治提供依据。

弓形虫脑炎的实验诊断探讨

对临床表现有明显脑部症状的37例成人进行了弓形虫病实验诊断。采用患者血清和脑脊液进行IgG及IgM的检测或脑脊液小鼠腹腔接种。结果发现5例在两种以上检测方法中为阳性,阳性率为13.5％。提出加强实验诊断弓形虫脑炎的必要性。

狂犬病病毒HepFlury株P蛋白单克隆抗体的制备及间接免疫荧光检测方法的建立

本研究以原核表达的融合型的重组蛋白pET32a（＋）-P（狂犬病病毒HepFlury株P蛋白）免疫6-8周龄的BALB/c小鼠,取脾细胞和SP2/0按常规杂交瘤技术进行细胞融合,经间接免疫荧光方法（IFA）筛选及对mAb进行初步鉴定。经3次亚克隆后获得1株稳定分泌表达的杂交瘤细胞株5G8。

应用间接荧光抗体染色法监测鸡传染性支气管炎抗体的研究

本文对间接荧光抗体染色法（ＩｎｄｉｒｅｃｔＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＡｎｔｉｂｏｄｙＡｓｓａｙ，ＩＦＡ）监测鸡传染性支气管炎（ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，ＩＢ）抗体进行了研究。试验结果表明感染鸡传染性支气管炎病毒（ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＩＢＶ）的鸡成纤维细胞（ＣＥＦ）不适宜做ＩＦＡ方法的抗原，而感染ＩＢＶ后３６～４８小时的鸡胚肾细胞制做ＩＦＡ抗原效果很好。应用１０％犊牛血清封闭并适当改进洗涤条件可消除非特异性荧光。本试验将所建立的ＩＦＡ方法与美国ＫＰＬ生产的ＩＢＶ－ＥＬＩＳＡ进行了比较。应用ＩＦＡ方法第七天即可查出血清抗体。通过对十二个鸡群进行流行病调查，结果表面除ＳＰＦ鸡群外，均为ＩＢ阳性鸡群。

猪繁殖和呼吸系统综合征的血清学检测及病毒的分离和鉴定(初报)

用间接免疫荧光抗体试验(IFA)检测279头从加拿大进口种猪血清中的猪繁殖和呼吸系统综合征(PRRS)病毒抗体,结果有3头为美洲株阳性,隔离期问,有45头发病,其中13头死亡,症状都相似,符合PRRS的特征。从病死猪E88.8的肺组织中分离到1株能使Marc 145 HS2H产生细胞病变的病毒。将该分离物接种Marc 145和HS2H细胞,48小时后甩乙醇固定,分别以美洲株和欧洲株的标准阳性血清作IFA试验,可见到特异性的胞浆荧光。美洲株的血清效价达1∶640;欧洲株的血清效价为1∶160。可以判定该分离物为荚洲株的PRRS病毒。

弓形虫直接凝集试验改良法的研究

用弓形虫直接凝集试验改良法（ＭＤＡＴ）、染色试验（ＤＴ）和两种间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）平行检测了国内外的７１份人血清，结果表明ＭＤＡＴ与其它试验符合率达９１．８～９６．０％；同时显示有较高的敏感性和特异性。用ＷＨＯ国际生物标准化实验室的标准血清定量测得ＭＤＡＴ的灵敏度为０．０９ＩＵ／ｍｌ，接近于改良前方法和ＤＴ的灵敏度，高于国外同类试剂盒的灵敏度。作者认为本ＭＤＡＴ具有在基层单位推广和应用的潜在价值。

重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性检测方法的建立及验证

目的建立重组人源化抗CD52单克隆抗体相对抗原结合活性的检测方法,并进行验证。方法测定3种人淋巴瘤细胞(MC/CAR、HUT78、RAMOS)CD52抗原的表达率,选择CD52表达率最高的作为靶细胞。以系列稀释的重组人源化抗CD52单克隆抗体的参比品和供试品作用表达CD52抗原的人淋巴瘤细胞,FITC标记的兔抗人Ig G结合人淋巴瘤细胞上的重组人源化抗CD52单克隆抗体,流式细胞分析仪测定几何荧光均数。通过四参数方程拟合,计算参比品和供试品的半数有效浓度(EC50)及相对结合活性。并对该方法的专属性、准确性、精密性、线性范围和耐用性进行验证。结果淋巴瘤MC/CAR细胞CD52抗原表达率最高,确定该细胞为靶细胞。CD52抗原与无关抗体不存在特异性结合;重复3次测定不同理论相对结合活性人源化抗CD52单克隆抗体参比品的回收率在97.4%~111.9%之间,相对结合活性及回收率的RSD值均在10%以内;同一实验人员于同一天6次重复检测重组人源化抗CD52单克隆抗体相对结合活性在86.93%~114.42%之间,RSD值在10%以内,3 d内不同实验员分别检测5个效价样品的相对结合活性的RSD在20%以内;在重组人源化抗CD52单克隆抗体理论效价50%~150%范围内,与相对结合活性呈良好的线性,线性回归方程为y=1.045 2 x-1.082,R2为0.992 1;MC/CAR细胞在第28代时仍适用于抗CD52抗体相对结合活性的测定。结论该方法具有良好的特异性、准确性、精密性、线性和耐用性,且操作简便,可用于重组抗CD52抗体抗原结合活性的常规检测。