Bmi-1基因过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响

目的:探讨原癌基因B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1(Bmi-1)过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响。方法:采用逆转录病毒介导转染方法将携带原癌基因Bmi-1的质粒或空质粒稳定转染GES-1细胞,通过real-time PCR及Western blotting在mRNA及蛋白水平鉴定转染效果。流式细胞术检测过表达Bmi-1对GES-1细胞周期的影响。应用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂盒检测稳定转染Bmi-1对GES-1细胞增殖的影响。结果:Real-time PCR及Western blotting结果均表明成功建立稳定转染Bmi-1基因的GES-1细胞株。流式细胞术结果表明,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞G0/G1期减少,G2/M期和S期细胞增多。生长曲线显示,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞增殖速度明显提高。结论:过表达Bmi-1基因能调控GES-1细胞的细胞周期,促进GES-1细胞的增殖。

基于脑脊液和血液样本的乳腺癌脑转移相关耐药基因突变的鉴定及功能分析

【目的】探讨乳腺癌脑转移患者脑脊液和血液来源的基因突变情况,筛查耐药基因及分析耐药机制。【方法】本院收治的70例乳腺癌脑转移患者为研究对象,采用二代基因测序技术检测患者脑脊液和血液样本中的循环肿瘤DNA(ctDNA)了解基因突变情况,并进行耐药性筛查及分析其与突变基因的关联性。【结果】70例患者中主要检测出TP53、HER2、PIK3CA、BRCA1和BRCA2五个主要突变基因,脑脊液来源的样品中基因突变的检出率为100%(70/70),高于血液来源样品的65.71%(46/70)(P<0.05)。以不带有HER2和PIK3CA突变的21例样品为对照组,HER2突变的患者对曲妥珠单抗的耐药性比例高于对照组(P<0.05);PIK3CA突变的患者对曲妥珠单抗、阿替利珠单抗、紫杉醇和阿霉素4种药的耐药性比例与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。同时,HER2突变患者对阿替利珠单抗、紫杉醇和阿霉素的耐药性比例与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】乳腺癌脑转移患者的脑脊液比血液更能准确反映脑转移情况,若检出HER2突变,则提示可能有对应的耐药基因存在,这对用药指导、耐药监测等意义重大。

nm23基因表达与乳腺癌腋淋巴结转移的关系

目的探讨ｎｍ２３基因在原发性乳腺癌组织中的表达规律，及其与淋巴结转移等预后因素之间的关系。方法应用免疫组织化学方法（ＳＰ法）对１０７例原发性乳腺癌组织进行ｎｍ２３蛋白表达研究。结果ｎｍ２３基因在原发性乳腺癌的表达阳性率为５０５％，在有淋巴结转移的乳腺癌中阳性率为３１％，无淋巴结转移的乳腺癌中阳性率为７３５％（Ｐ＜０．０１）。结论ｎｍ２３基因表达与淋巴结转移呈负相关，而与乳腺癌组织学分类、肿瘤大小无相关性。检测乳腺癌组织中ｎｍ２３的表达是评估预后有价值的生物学指标。

流式细胞仪测定小儿恶性肿瘤细胞DNA倍体及细胞周期的临床意义

目的探讨小儿恶性肿瘤细胞核DNA倍性分布、细胞周期特征,并分析其临床意义。方法应用流式细胞仪测定20例小儿恶性肿瘤细胞核DNA倍体模式、DNA指数、增殖指数和S期细胞比例熏并研究这些参数与肿瘤组织分期之间关系。结果二倍体肿瘤主要分布于细胞分化较好的肿瘤;随着肿瘤细胞病理分级的发展,异倍体肿瘤的检出率逐渐上升。相对于低分化组而言,高、中分化组的DI、SPF及PI有显著性差异。结论流式细胞仪测定小儿肿瘤细胞核DNA倍体模式及细胞周期特征在评估小儿肿瘤恶性程度上有重要意义,测定结果应与临床、病理资料相结合,为恶性肿瘤预后判断提供依据。

人脑星形胶质细胞瘤中nm23-H1基因和蛋白的表达

目的 :研究人脑星形胶质细胞瘤中 nm2 3 -H1基因及蛋白的表达 ,并初步探讨其临床意义。方法 :采用地高辛标记的nm2 3 -H1反义 c RNA探针 ,通过原位杂交方法检测 2 1例新鲜星形胶质细胞瘤标本中 nm2 3 -H1 m RNA,并采用鼠抗人 nm2 3 -H1单克隆抗体 ,通过免疫组织化学的方法检测 62例人脑星形胶质细胞瘤石蜡标本中 nm2 3 -H1蛋白。结果 :2 1例新鲜标本的原位杂交结果显示低级别组星形胶质细胞瘤中 nm2 3 -H1 m RNA的表达显著高于高级别组。62例人脑星形胶质细胞瘤免疫组化结果 ,低级别组中 nm2 3 -H1蛋白的表达高于高级别组。nm2 3 -H1 m RNA原位杂交结果与 nm2 3 -H1蛋白免疫组化结果具有一致性。结论 :nm2 3 -H1 m RNA及其蛋白低表达与星形胶质细胞瘤的高病理学分级有关 ,提示两者可作为临床判断星形胶质细胞瘤恶性生物学行为的参考指标。

nm23基因在原发性乳腺癌组织中的表达及意义

【目的】探讨原发性乳腺癌组织中 nm23基因表达及其临床意义。【方法】选取本院2012年1月至2013年12月收治的120例原发性乳腺癌患者为研究对象,采取 SP 法检测癌组织中 nm23基因表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。【结果】120例原发性乳腺癌组织中,nm23基因阳性表达率66.7%（80/120）。临床分期中Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期 nm23基因表达阳性率分别为75.0%（15/20）、70.0%（35/50）、62.5%（26/40）、50.0%（5/10）；肿瘤≤2.0 cm、2.0～5.0 cm、＞5.0 cm 的 nm23基因表达阳性率分别为75.0%（45/60）、67.5%（27/40）、40.0%（8/20）；浸润性癌与非浸润性癌 nm23基因表达阳性率分别为72.2%（65/90）、50.0%（15/30）；淋巴结转移中阴性、0～3个和＞3个 nm23基因表达阳性率分别为75.0%（30/40）、70.0%（35/50）、50.0%（15/30）。nm23基因表达阳性率在临床 TNM 分期、肿瘤大小、病理分型、淋巴结转移中比较具有统计学有意义（P ＜0.05）。【结论】原发性乳腺癌组织中 nm23基因表达与临床分期、肿瘤浸润和转移以及大小有着密切的关系,并可将其作为乳腺癌预后的一个重要参考指标。

宫颈癌组织中人乳头瘤病毒基因分型的研究

【目的】了解宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)的感染及其基因型的分布情况,并探讨人乳头瘤病毒感染及其基因型与癌肿类型的相关性。【方法】采用可检测23种HPV基因型的基因芯片方法分别检测200例宫颈癌组织的HPV基因型,计算宫颈癌组织中HPV及各基因型的感染率,比较HPV及其主要基因型与癌肿类型的关系。【结果】①200例宫颈癌组织中HPV的阳性率为94.00%(188/200),其中鳞癌为95.86%(162/169),显著高于腺癌的80.00%(χ2=9.73,P<0.01),而HPV16、HPV18型和HPV双重感染在鳞、腺癌中的阳性率差异无显著性。②200例宫颈癌组织中共检测到9种HPV基因型,分别为HPV16,18,45,33,58,59,73,31,56,均为高危型感染,其中HPV16最常见,检出率达74.00%(148/200)、其次是HPV18,16.00%(32/200);200例宫颈癌组织中共检测到HPV双重感染24例,检出率达12.00%。【结论】HPV与宫颈癌的关系密切,HPV感染更常见于宫颈鳞癌。但HPV各基因型的分布与宫颈癌的类型无关;宫颈癌的HPV基因型呈多样性,且均为高危型感染,其中以HPV16型最常见,其次是HPV18型,并存在一定数量的双重感染。

膀胱移行细胞癌中COX-2的表达与其生物学行为的关系

【目的】探讨环氧化酶 2 (COX 2 )在膀胱移行细胞癌 (BTCC)中的表达及其与BTCC生物学行为的关系。【方法】应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测 10例液氮保存的新鲜BTCC组织和 10例肾移植供体正常膀胱组织标本的COX 2mRNA表达情况 ;采用免疫组织化学方法 (Envision二步法 )对 72例膀胱移行细胞癌组织标本和 10例肾移植供体正常膀胱组织标本进行COX 2蛋白表达检测 ,并分析COX 2的表达强度与肿瘤各项病理参数之间的关系。【结果】RT PCR检测 10例液氮保存的新鲜膀胱癌组织COX 2mRNA均呈阳性表达 ,10例肾移植供体正常膀胱组织仅有 1例COX 2mRNA呈微弱阳性表达 ,余 9例阴性 ,两者差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;免疫组织化学显示正常膀胱组织中未见COX 2表达 ,但在BTCC组织中有不同程度的表达 ,COX 2的表达强度与肿瘤的分级、分期和复发有关。【结论】BTCC中COX 2的异常表达与肿瘤的分级、分期和复发等生物学行为有关 ,提示COX 2可能在BTCC的发生发展中起重要作用。

膀胱癌肿瘤组织中bcl-x基因mRNA的表达及其临床意义

【目的】研究凋亡调控基因bcl x在膀胱癌患者肿瘤组织中的表达情况 ,探索bcl x基因的异常表达与膀胱癌的发病、演进和复发的关系。【方法】应用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 30例膀胱癌患者新鲜肿瘤组织和 10例膀胱正常组织标本中bcl x基因mRNA的表达情况。【结果】2 1例膀胱癌组织标本表达bcl xl(70 % ) ,12例表达bcl xs(4 0 % ) ,bcl xl基因mRNA平均表达量明显高于bcl xs基因 ,膀胱癌组织中bcl xs基因与bcl xl基因在表达上呈正相关 ;2例膀胱正常组织标本表达bcl xl(2 0 % ) ,无表达bcl xs者。不同病理分级和病理分期的膀胱癌组织中bcl x基因表达无显著性差异。【结论】膀胱癌组织普遍表达bcl xl基因 ,部分表达bcl xs基因 ,bcl xl基因的表达处于优势地位。膀胱癌的发病与bcl xs无关 ,而与凋亡抑制基因bcl xl的高表达有关。bcl xl基因与膀胱癌的演进和复发有关 ,可作为预计其术后复发风险的一项重要指标。

沉默Caveolin-1基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默 Caveolin-1（Cav-1）基因对人膀胱癌细胞株5637增殖和凋亡的影响。方法通过siRNA转染人膀胱癌细胞株5637（沉默组）,以转染 FAM-siRNA为阴性对照组,未转染细胞为正常对照组。Re-al-time PCR法检测Cav-1基因沉默的效率,CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各种细胞的凋亡情况。结果 siRNA转染可显著降低人膀胱癌细胞株5637中 Cav-1 mRNA 的表达水平。沉默组细胞的增强能力明显减低,而细胞凋亡率明显升高（均P＜ 0.05）。结论沉默Cav-1基因可抑制人膀胱癌细胞株5637的细胞增殖并促进细胞凋亡。

胃癌组织中HOXA5和HOXA10基因启动子甲基化状况及其临床意义

【目的】研究胃癌组织中HOXA5和HOXA10基因启动子甲基化状况及与临床病理特征关系。【方法】采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测51例胃癌组织和正常胃粘膜组织中HOXA5和HOXA10基因启动子甲基化状态，并探讨其与临床病理特征的关系。【结果】①胃癌组织中HOXA5基因启动子的甲基化率（74.5%）明显高于正常胃粘膜组织（37．3％），差异有统计学意义（x^2=14．356，P=0．000）。HOXA5基因启动子甲基化率与肿瘤分化程度（x^2=4．311，P=0．038）、浸润深度（x^2=5．669，P=0．017）、淋巴结转移（x^2=9．349，P=0．002）和肿瘤分期（x^2=16．023，P=0．000）呈负相关，而与年龄和性别无关（P均〉0．05）。②胃癌组织中HOXA10基因启动子的甲基化率（68．6％）明显高于正常胃粘膜组织（41．2％），差异有统计学意义（x^2=7．761，P=0．009）。HOXA10基因启动子甲基化率与肿瘤分化程度（x^2=5．304，P=0．021）、浸润深度（x^2=15．457，P=0．000）和淋巴结转移（x^2=6．157，P=0．013）呈负相关，而与肿瘤分期、年龄和性别无关（P均〉0．05）。③HOXA5基因启动子甲基化率与其蛋白表达之间具有负相关性（r=-0．495，P=0．000），HOXA10基因启动子甲基化率与其蛋白表达之间亦具有负相关性（r=-0．343，P=0．000）。两基因启动子甲基化率之间存在正相关性（r=0．751，P=0．000）。【结论】胃癌组织中HOXA5和HOXA10基因启动子呈高甲基化状态，并且与其蛋白表达之间呈负相关；DNA异常甲基化可能是HOXA5和HOXA10基因表达改变的重要调控机制之一。

FHIT和Survivin在鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中的表达及其意义

[目的]检测分析鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤（SNIP）组织中抑癌基因脆性组氨酸三联体（FHIT）和Survivin表达水平及其意义。[方法]选取本院病理科2015年1～12月收集的58例SNIP组织标本（SNIP组）、鼻腔鼻窦鳞癌组织标本20例（鳞癌组）和正常鼻腔黏膜标本20例（正常组），采用免疫组化法观察三组标本的FHIT和Survivin蛋白表达水平，并对SNIP组患者的临床病理特征进行分析。[结果]SNIP组织中FHIT蛋白阳性表达率显著的低于正常组（P〈0．05），高于鳞癌组（P〈0．05）；SNIP组织中的Survivin蛋白阳性表达率显著的高于正常组（P〈0．05）；SNIP组织中FHIT蛋白阳性表达率、Survivin蛋白阳性表达率与SNIP组的临床分期具有显著的相关性（P〈0．05）。[结论]FHIT蛋白表达下调和Survivin蛋白表达上调对SNIP的发生发展具有重要作用。

MTA-1基因在口腔疣状癌和鳞癌中的表达研究

【目的】研究肿瘤转移相关基因-1（metastasis—associatedgene1，MTA-1）在口腔疣状癌和鳞癌中的表达。【方法】取20例口腔鳞状细胞癌和10例口腔疣状癌组织及20例正常口腔黏膜组织标本，应用反转录多聚酶链式反应（RT-PCR）方法检测MTA-1基因mRNA的表达。【结果】口腔疣状癌组织与口腔鳞癌组织MTA-1基因mRNA的表达水平明显高于正常口腔黏膜上皮组织（P〈0．05）；口腔疣状癌中MTA-1基因mRNA的表达显著低于口腔鳞癌（P〈0．05）。【结论】MTA—1基因可能在口腔疣．状癌和口腔鳞状细胞癌的发生发展中起作用；可能与口腔鳞状细胞癌的浸润与转移密切相关。

APCmin／＋VDR-／-小鼠肠道肿瘤病理特征及相关基因的表达

[目的】探讨维生素D受体（VitaminD，VDR）失活对APCmin/＋小鼠肠道肿瘤生长的影响及相关基因变化。【方法】通过构建APCmin/＋VDR-/-小鼠模型（n=8），与APCmin/＋小鼠比较（n=8），4月龄时观察肠道肿瘤大小、数目情况，肿瘤HE染色作病理分析，实时RT—PCR检测两组肿瘤p21waf1／cip1，p27kip1和Snail-1基因mRNA的表达。【结果】两组鼠比较，APCmin/＋VDR-/-小鼠〉3mm肿瘤明显增多（P〈0．01）。APCmin/＋肿瘤为管状腺瘤样改变，而APCmin/＋VDR-/-肿瘤发展为管状腺瘤。p21waf1／cip1和p27kip1在APCmin/＋VDR-/-肿瘤中mRNA的表达水平较APCmin/＋肿瘤明显降低（P〈0．01）。【结论】维生素D可能抑制APCmin/＋小鼠肠道肿瘤的进展。

HPV分型对宫颈癌患者放疗敏感性的影响

[目的]探讨宫颈癌患者中人乳头瘤病毒（HPV）分型与放疗敏感性的相关性.[方法]收集宫颈癌患者124例,检测患者HPV基因分型,采用放疗方法对入选患者进行盆腔外和腔内照射治疗,分析放疗敏感性与HPV分型的相关性.[结果]124例患者中,HPV阴性1例,在HPV阳性宫颈癌患者检出21种HPV基因型中,高危型常见类型为HPV16、HPV18和HPV58,低危型最常见类型为HPV6和HPV11.放疗不敏感患者中多重HPV感染所占90％,且HPV-18在化疗后未缓解患者中所占比率为80％.[结论]以HPV-18为主的HPV多重感染可能会影响宫颈癌患者放化疗敏感性.

SIPA1基因对原发性肝细胞癌转移复发的影响

【目的】研究SIPA1基因在肝细胞癌(HCC)中的表达情况及其临床意义。【方法】采用免疫组织化学S-P法检测86例HCC组织及其癌旁肝组织和8例正常肝组织中SIPA1的表达情况,研究其与HCC临床病理学资料及预后的关系。【结果】86例HCC中,SIPA1在癌组织的阳性表达率和癌旁组织中阳性表达率分别为43.0%(37/86)和87.2%(75/86),前者明显低于后者(P<0.01)。有静脉侵袭的肝癌标本癌旁表达SIPA1低(P<0.05)。SIPA1蛋白在癌旁组织中表达存在个体差异,低表达组术后复发率更高(P<0.01),生存期更短(P<0.01)。【结论】SIPA1在HCC中发挥肿瘤抑制基因的作用,且对抑制HCC的复发转移有重要作用。

胶质瘤TGF-β1、p53、PTEN表达及其临床意义

目的 探讨 TGF- β1、p5 3、PTEN蛋白在不同恶性程度胶质瘤中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化 Eli Vision TM二步法检测 92例胶质瘤中 TGF- β1、p5 3、PTEN蛋白的表达。结果 TGF- β1、p5 3与胶质瘤级别呈正相关 ,高分化组与低分化组组间差异有显著性 (P<0 .0 5、P<0 .0 1) ;PTEN与胶质瘤级别呈负相关 ,高分化组与低分化组组间差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;TGF- β1与 p5 3的表达呈正相关 (r=0 .2 31、P<0 .0 5 ) ;PTEN不表达、p5 3表达的胶质瘤患者预后差 (P<0 .0 5、P<0 .0 5 )。结论 PTEN、p5 3的表达与预后密切相关 。

C-erbB-2在子宫颈癌中的表达及临床意义

【目的】探讨癌基因C-erbB-2在子宫颈癌中的表达及与临床病理因素之间的关系。【方法】采用免疫组织化学法检测60例宫颈鳞癌组织,20例宫颈良性肿瘤组织,15例正常宫颈组织中C-erbB-2的表达。【结果】正常宫颈、宫颈良性肿瘤及宫颈鳞癌中C-erbB-2阳性表达率分别为0%,5%,51.66%;三组间差异有显著性(χ2=23.67,P<0.01),在不同分化程度的宫颈鳞癌中,C-erbB-2的表达强度的差异均有显著性(Hc=10.2934;P=0.0058),在不同临床分期的宫颈癌中,C-erbB-2的表达强度差异亦有显著性(Hc=9.2126;P=0.0266),在淋巴结有转移与淋巴结无转移组之间,C-erbB-2的表达强度差异均有显著性(P=0.0010)。【结论】①C-erbB-2的表达与宫颈鳞癌的发生发展有关。②检测C-erbB-2可作为判定宫颈鳞癌恶性程度,评估其侵袭性及转移性的分子生物学指标。其对早期宫颈鳞癌的诊断及宫颈鳞癌的预后判定可能具有重要的参考价值。

湖南省浏阳市11445例妇女HPV感染情况分析

【目的】了解湖南省浏阳市地区人乳头瘤病毒（H PV ）感染的分布特点，为子宫颈癌的防治提供相关依据。【方法】采用导流杂交反斑点印迹（Reverse dot blo ，t RDB）快速基因分型监测技术对2009年6月至2012年6月在湖南省浏阳市人民医院就诊的11445例女性患者进行21种HPV基因亚型的检测。【结果】11445例检测中总的感染率为38．8％，其中高危感染率为35．9％，低危感染率为2．9％，共检测到19种基因型，其中以52型感染率最高，其他常见型分别为：16、58、CP8304、53、68、6、11型，其中45及43型未检测出。 HPV高危感染率各年龄组中≤30岁组和＞50岁组明显高于其他两组（31～50岁年龄段）（ P ＜0．05）。高危 HPV感染者薄层液基细胞学检测（TCT）异常行宫颈活检，其中＞50岁者宫颈癌检出率高于＜50岁者，但＞50岁者宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ检出率低于＜50岁者，＞40岁者CIN Ⅱ检出率高于＜40岁者，且＞50岁者CINⅡ检出率高于41～50岁者。多重感染率＞50岁组高于其他三组（＜50岁年龄段）。高危HPV多重感染中年龄＞40岁者CIN Ⅲ检出率高于＜40岁者。【结论】湖南省浏阳市地区 HPV感染的基因分型符合亚洲人群分布规律，但有地区特点。且高危感染者中宫颈活检阳性率有随年龄增长而增高的趋势，＞50岁感染高危H PV者要加强随访，多重感染且＞40岁者要注意加强随访。

HER-2/neu基因表达与卵巢上皮性癌的预后

【目的】探讨HER 2 /neu基因在卵巢上皮性癌中的表达水平及其与预后的关系。【方法】利用免疫组化检测 93例卵巢上皮性癌组织中HER 2 /neu基因表达水平 ,并结合临床病理及随访资料进行分析。【结果】HER 2 /neu基因主要为细胞膜及胞浆表达 ,阳性率为 4 4 .1%。其表达与临床分期、病理类型、组织学分级及残余灶直径等无相关性 ;但与预后相关。HER 2 /neu表达阴性组的 1,3,5年生存率分别为 90 .4 %、74 .0 %、5 4 .6 % ,弱阳性组分别为 81.1%、4 5 .4 %、2 7.9% ,强阳性组分别为 80 .0 %、2 0 .0 %、10 .0 %。差异有显著性 (P =0 .0 0 2 8)。COX模型多因素分析提示 :HER 2 /neu表达水平是影响卵巢癌预后的独立因素 (P =0 .0 0 5 )。【结论】HER 2 /neu基因表达水平可作为预测卵巢上皮性癌预后的可靠指标。