NLRP3炎性小体在治疗性浅低温后处理大鼠心肌缺血-再灌注中的作用

目的 分析NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在治疗性浅低温(34℃)后处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用并探讨其机制。方法 选择清洁级成年雄性SD大鼠60只,7~10周龄,体重250~300 g。采用随机数字表法将大鼠分为五组:空白对照组(S组)、心肌缺血-再灌注组(IR组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注组(MH组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP组(HT组)和34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP+MCC950组(HTM组),每组12只。S组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏180 min;IR组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 37℃灌注液再灌注120 min;MH组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min, 34℃灌注液再灌注120 min;HT组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入沉默信息调节因子2同源蛋白3(sirt3)抑制剂3-TYP后行34℃灌注液再灌注120 min;HTM组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入sirt3抑制剂3-TYP和NLRP3抑制剂MCC950后行34℃灌注液再灌注120 min。再灌注120 min后取离体心脏,采用ELISA法测定灌注后心脏漏液中IL-1β、IL-6浓度,Western blot法检测心肌组织中NLRP3和sirt3蛋白相对含量,1%氯化三苯基四氮唑染色计算心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理变化。结果 与S组比较,IR组、MH组、HT组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显升高(P<0.05);IR组、HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低,NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3和NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05)。与IR组比较,MH组和HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显降低(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3蛋白含量明显升高,NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05);HTM组心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与MH组比较,HT组再灌注30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、±dp/dt_(max)明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显升高(P<0.05);HT组和HTM组心肌组织中sirt3蛋白含量明显降低(P<0.05)。与HT组比较,HTM组再灌注30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dt_(max)明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论 治疗性浅低温(34℃)可通过改善离体心脏血流动力学参数、降低IL-6、IL-1β浓度、心肌组织中NLRP3蛋白含量、心肌梗死面积百分比、改善心肌病理学改变,减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与线粒体介导sirt3通路抑制炎性小体NLRP3的高表达有关。

卡格列净联合阿卡波糖对2型糖尿病患者miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平的影响

目的探讨卡格列净联合阿卡波糖对2型糖尿病患者微小RNA(miR)-144、NOD样受体3炎性小体(NLRP3)mRNA及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平的影响。方法选取2019年7月至2020年7月该院收治的2型糖尿病患者186例,依据随机数字表法分为单药治疗组、联合治疗组,每组93例。比较两组患者治疗前后血糖、胰岛素、炎症因子、miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平及治疗效果。结果与单药治疗组比较,联合治疗组治疗后餐后2 h血糖、空腹血糖、糖化血红蛋白水平更低(P<0.05),治疗后两组餐后2 h胰岛素、空腹胰岛素水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组血清白细胞介素(IL)-1β、IL-17A、IL-23水平降低,联合治疗组血清IL-1β、IL-17A、IL-23水平低于单药治疗组(P<0.05)。与单药治疗组比较,治疗后联合治疗组血清miR-144、NLRP3 mRNA及MCP-1水平降低(P<0.05)。联合治疗组治疗有效率高于单药治疗组(P<0.05)。结论采用卡格列净联合阿卡波糖对2型糖尿病患者进行治疗,可降低患者血糖,改善胰岛素抵抗,有效性好。

带状疱疹患者皮损程度与血清免疫球蛋白水平和NLRP3炎性小体水平的相关性研究

目的:探究带状疱疹(Herpes zoster,HZ)患者皮损程度与血清免疫球蛋白水平和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体水平的相关性。方法:选取2018年11月-2020年11月就诊于笔者医院的100例带状疱疹患者,根据皮损程度分为轻度组31例、中度组53例和重度组16例。检测并比较各组免疫球蛋白A(Immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,IgM)水平;NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(Cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)信使核糖核酸(Messenger ribonucleic acid,mRNA)水平;Pearson相关系数分析皮损程度与IgA、IgG、IgM、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA相关性。结果:与轻度组比较,中度组和重度组Ig A、Ig G、Ig M显著降低,重度组显著低于中度组,差异有统计学意义(P<0.05);与轻度组比较,中度组和重度组NLRP3、Caspase-1 mRNA水平显著升高,重度组显著高于中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。患者皮损程度与IgA(r=-0.221、-0.253、-0.437,P<0.05)、IgG(r=-0.314、-0.361、-0.392,P<0.05)、IgM(r=-0.436、-0.504、-0.696,P<0.05)呈负相关,与NLRP3mRNA(r=0.231、0.261、0.514,P<0.05)、Caspase-1mRNA(r=0.601、0.371、0.324,P<0.05)呈正相关。结论:带状疱疹患者皮损程度与血清免疫球蛋白和NLRP3炎性小体具有密切的相关性,对临床诊治带状疱疹有着一定的参考价值。

基于NLRP3炎症小体信号通路探讨盐酸小檗碱对三叉神经痛大鼠的影响

目的:探讨盐酸小檗碱对三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)大鼠模型中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路的影响以及对TN模型大鼠的保护作用。方法:采用眶下神经缩窄术制备TN大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组和盐酸小檗碱低、中及高剂量组(25 mg/kg、50 mg/kg及100 mg/kg),每组15只。另取15只大鼠(仅分离眶下神经,不结扎)作为假手术组,假手术组和模型组大鼠予以等量0.9%氯化钠溶液灌胃,其他各组大鼠灌胃予以相应剂量的盐酸小檗碱,灌胃体积10 ml/kg,1日1次,共14 d。采用电子测痛仪测定各组大鼠在不同时间的神经颜面部支配区机械痛阈值;采用酶联免疫吸附试验检测大鼠术侧三叉神经节组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组大鼠术侧三叉神经节组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及胱天蛋白酶1(caspase-1)的mRNA表达水平;采用蛋白质免疫印迹法检测大鼠术侧三叉神经节组织中CGRP、NLRP3、ASC及caspase-1的蛋白表达水平。结果:建模前3、1 d,各组大鼠机械痛阈值比较,差异均无统计学意义(P> 0.05);建模后1、3 d,与假手术组比较,模型组大鼠机械痛阈值明显降低,差异有统计学意义(P <0.05),而模型组和盐酸小檗碱低、中及高剂量组大鼠机械痛阈值两两比较的差异均无统计学意义(P> 0.05)。建模后5~14 d,与假手术组比较,模型组大鼠机械痛阈值明显降低,差异有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,盐酸小檗碱低、中及高剂量组大鼠机械痛阈值依次升高,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P <0.05)。术后第15日,与假手术组比较,模型组大鼠三叉神经节组织中IL-1β、TNF-α含量,CGRP、NLRP3、ASC及caspase-1的mRNA、蛋白表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,盐酸小檗碱低、中及高剂量组大鼠三叉神经节组织中IL-1β、TNF-α含量,CGRP、NLRP3、ASC及caspase-1的mRNA、蛋白表达水平依次降低,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论:盐酸小檗碱可能通过下调NLRP3炎症小体信号通路减少炎症因子释放,降低术侧三叉神经节组织中CGRP表达水平,提高神经面部感觉区域的机械痛阈值,从而减轻TN对大鼠的损伤作用。

CA72-4对单核细胞IL-1β和痛风急性发作的调控作用

目的:探究糖类抗原(carbohydrate antigen 72-4,CA72-4)对单核细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和痛风急性发作的调控作用。方法:收集淄博市中心医院痛风专病门诊收治的急性痛风患者外周血浆,分析CA72-4含量,获取CA72-4≥50 U/mL的患者血浆,随机分为no-CA72-4组(n=37)和CA72-4组(n=38),no-CA72-4组采用DynaMag磁架去除血浆中的CA72-4,CA72-4组不做处理,将处理前后的血浆分别诱导THP1细胞,收集诱导后THP1细胞培养液和细胞,采用酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测THP1细胞和培养液中IL-1β表达水平;将小鼠背部皮下注射灭菌过滤空气,造成皮下气囊,随后将尿酸盐(monosodium urate,MSU)结晶注入气囊,构建痛风性滑膜炎模型,将模型小鼠分成试验组(n=10)和对照组(n=10),试验组腹腔注射1.5×10^(10)PFU/mL腺病毒(adenovirus,Ad)-CA72-4,对照组注射照腺病毒Ad-ctr,收集小鼠血浆和滑膜液,采用CA72-4检测试剂盒检测小鼠血浆和滑膜液中CA72-4含量;采用ELISA法检测小鼠血浆中IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平,实时定量荧光聚合酶链反应和蛋白质印迹法(Western blot)检测各组小鼠血浆IL-1β、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体基因和蛋白表达水平。结果:与CA72-4组相比,no-CA72-4组THP1细胞和培养液中IL-1β明显升高,差异有统计学意义(P<0.001);与对照组相比,试验组小鼠血浆和滑膜液中CA72-4表达水平显著高,差异有统计学意义(P<0.001);与对照组相比,试验组小鼠血浆中IL-1β和TNF-α表达均显著高,差异有统计学意义(P<0.001);与对照组相比,试验组小鼠血浆中IL-1β、NALP3基因和蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:CA72-4能增强单核细胞炎症因子分泌,加重痛风炎症反应,其具体的作用机制需进一步研究。

清热养阴除湿丸对痛风大鼠炎症因子及关节功能的影响

目的:探讨清热养阴除湿丸对痛风大鼠的治疗机制。方法:将50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、秋水仙碱组、清热养阴除湿低剂量组、清热养阴除湿高剂量组。采用改良Coderre法构建痛风大鼠模型,按组别给予大鼠0.9%氯化钠溶液、秋水仙碱、清热养阴除湿丸灌胃治疗。通过HE染色观察大鼠滑膜组织病理改变;采用ELISA法检测大鼠外周血IL-1β、IL-18、IL-33、TNF-α水平;采用RT-qPCR、Western blotting检测大鼠滑膜组织中NLRP3炎症小体相关基因及线粒体自噬相关基因表达。结果:模型组大鼠外周血IL-1β、IL-18、IL-33、TNF-α高于空白组(均P<0.05)。干预后,秋水仙碱组、清热养阴除湿低剂量组、清热养阴除湿高剂量组大鼠外周血IL-1β、IL-18、IL-33、TNF-α下降,且清热养阴除湿高剂量组各项指标最低(P<0.05)。清热养阴除湿低剂量组、清热养阴除湿高剂量组大鼠滑膜组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、LC3B、p62、PHB2蛋白相对表达低于模型组(均P<0.05)。结论:清热养阴除湿丸通过抑制NLRP3炎症小体形成及线粒体相关自噬的发生减轻痛风大鼠滑膜组织炎症,改善关节功能。

川芎嗪对肾缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制

目的探讨川芎嗪对肾缺血再灌注损伤(RIRI)大鼠的保护作用及机制。方法18只SD大鼠随机均分为假手术组(Sham组)、肾缺血再灌注组(I/R组)及川芎嗪组,I/R组及川芎嗪组建立RIRI模型,假手术组仅分离肾动脉,不做缺血处理。川芎嗪组再灌注恢复后立即给予盐酸川芎嗪40mg/kg腹腔注射,每隔6h给药1次,24h后PBS心脏灌流,取各组肾脏组织。采用过碘酸-雪夫染色观察肾组织病理变化,全自动生化分析仪检测血清尿素氮与肌酐,TUNEL-DAPI双染色法检测肾细胞凋亡,Western blotting法检测肾组织中Nod样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达,RT-PCR法检测肾组织中NLRP3mRNA表达。结果假手术组肾组织无明显形态异常,I/R组肾组织有损伤,川芎嗪组肾组织损伤较I/R组轻。与I/R组比较,川芎嗪组血肌酐、尿素氮水平,肾组织细胞凋亡率,肾组织中NLRP3蛋白、mRNA相对表达量均降低(P均<0.05)。结论川芎嗪可减轻RIRI大鼠的肾损伤,改善肾功能,其作用机制可能与降低肾组织中NLRP3表达有关。

骨髓间充质干细胞通过前列腺素E2调控NLRP3抑制肺泡巨噬细胞相关炎症反应

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎症反应中肺泡巨噬细胞相关炎症通路的作用及可能机制。方法采用慢病毒转染ptges及ptges shRNA至BMSC,建立稳定的ptges过表达BMSC细胞株[BMSC-PGE2(+)]及ptges沉默的BMSC细胞株[BMSC-PGE2(-)]。将巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS+BMSC组、LPS+BMSC-PGE2(+)组、LPS+BMSC-PGE2(-)组,收集各组细胞,Western blot检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide-bound oligomerized domain-like receptor 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1前体(precursor cysteinyl aspartate specific proteinase 1,pro-Caspase-1)、Caspase-1及白细胞介素1β前体(precursor interleukin-1β,pro-IL-1β)蛋白表达水平;RT-PCR测定NLRP3、Caspase-1 mRNA表达水平;ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-1β、IL-10、IL-18及前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的表达水平。结果LPS的干预显著升高了巨噬细胞内NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1和pro-IL-1β的表达,与BMSC共培养后,各蛋白表达量明显减少。加入PGE2过表达后,蛋白表达差异进一步下降。LPS组NLRP3、Caspase-1 mRNA表达量明显升高,与BMSC共培养后表达显著降低,PGE2过表达可以加大这种差异,而PGE2沉默组无明显变化。ELISA结果显示细胞上清液中TNF-α、IL-1β及IL-18含量在LPS组中最高,加入BMSC及过表达PGE2后可使得相关炎症因子下降。LPS组IL-10和PGE2水平较对照组有升高趋势,在LPS+BMSC组和LPS+BMSC-PGE2(+)组中水平进一步升高且有显著差异。结论当LPS诱导的炎症反应发生时,BMSC能够显著减轻巨噬细胞中的炎症反应,这一过程可能是通过过表达PGE2从而抑制NLRP3介导的细胞焦亡通路来实现的。

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在癫痫大鼠模型中的表达及褪黑素对其的影响

目的观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）炎性小体在癫痫大鼠模型中的表达水平，并探讨褪黑素的脑保护作用。方法选择144只日龄21～30 d的SD大鼠，应用氯化锂－匹罗卡品建立癫痫持续状态动物模型，按随机数字表法分为对照组、癫痫组、褪黑素组，每组各48只。每组按24 h、48 h、72 h、7 d时间点再分为4个亚组，每亚组12只，观察大鼠的行为学变化，用荧光定量PCR和免疫组织化学法检测大鼠海马组织中NLRP3、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶－1（Caspase－1）、白细胞介素－1β（IL－1β）的表达水平。结果造模成功后癫痫组NLRP3阳性细胞数增多，在72 h达高峰；在24 h、48 h、72 h、7 d时间点，NLRP3阳性细胞数在癫痫组（14.20±1.64、23.60±1.14、31.20±1.30、25.40±2.07）较褪黑素组（10.60±0.89、17.80±1.48、24.00±0.71、20.20±1.92 ）及对照组（2.60±0.89、2.40±1.14、2.40±1.14、2.40±0.55）均增高，差异均有统计学意义（F＝122.977、375.125、962.743、262.916，均P〈0.05）；NLRP3 mRNA相对表达量在癫痫组（2.57±0.12、3.34±0.10、4.84±0.19、3.55±0.13 ）较褪黑素组（2.03±0.08、2.71±0.08、4.03±0.14、2.48±0.18）及对照组（1.07±0.13、1.08±0.15、1.08±0.23、1.07±0.18）均增高，差异均有统计学意义（F＝422.386、1 154.957、1 132.112、512.149，均P〈0.05）；Caspase－1 mRNA相对表达量在癫痫组（2.47±0.07、3.05±0.15、4.39±0.18、3.14±0.11）较褪黑素组（1.85±0.07、2.49±0.08、3.60±0.12、2.15±0.12）及对照组（0.98±0.25、0.99±0.15、0.98±0.23、0.99±0.18）均增高，差异均有统计学意义（F＝620.099、580.796、1 125.225、645.082，均P〈0.05）；IL－1β mRNA相对表达量在癫痫组（2.32±0.15、2.90±0.18、4.18±0.16、2.74±0.07）较褪黑素组（1.78±0.09、2.35±0.11、3.24±0.13、1.78±0.16）及对照组（0.97±0.13、0.99±0.15、0.97±0.23、0.97±0.18）均增高，差异均有统计学意义（F＝267.952、398.767、1 140.384、438.962，均P〈0.05）。结论NLRP3炎性小体在癫痫发作后被激活，在癫痫脑损伤中发挥一定作用；褪黑素可能通过抗炎作用抑制NLRP3炎性小体的表达，发挥脑保护作用。

自发性早产患者绒毛中Nod样受体蛋白3 Toll样受体4炎症小体表达及其临床意义

目的 探讨自发性早产患者绒毛组织中Nod样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体(TLR) 4炎症小体表达及其临床意义。方法 选取2019年6月—2020年4月广东省妇幼保健院收治的自发性早产患者112例为研究组,并以同期就诊正常足月妊娠分娩女性100例为对照组。采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测两组绒毛组织中NLRP3、TLR4蛋白表达水平。测定相应组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)浓度。统计研究组早产儿窒息、感染及肺透明膜病等早产儿不良结局发生率,并分析其绒毛组织中NLRP3、TLR4蛋白表达水平与绒毛组织中MDA、SOD、TNF-α、IL-6浓度及早产儿不良结局的关系。结果 与对照组比较,研究组绒毛组织中NLRP3、TLR4蛋白表达水平以及MDA、TNF-α、IL-6浓度均升高,而同期绒毛组织中SOD浓度则降低(P<0.05)。研究组早产儿窒息、感染及肺透明膜病等早产儿不良结局发生率为33.04%(37/112)。与研究组早产儿结局良好者比较,早产儿结局不良者的绒毛组织中NLRP3、TLR4蛋白表达水平以及MDA、TNF-α、IL-6浓度均升高,而同期绒毛组织中SOD浓度则降低(P<0.05)。相关分析结果显示,自发性早产患者绒毛组织中NLRP3、TLR4蛋白表达水平与其绒毛组织中MDA、TNF-α、IL-6浓度以及早产儿不良结局发生率均呈正相关(P<0.05),与其绒毛组织中SOD浓度则呈负相关(P<0.05)。结论 自发性早产患者绒毛组织中NLRP3、TLR4炎症小体表达增加且与氧化应激、炎症均相关,可能为自发性早产发病机制之一,且可影响早产儿结局。

基于“脾-线粒体相关”探讨NLRP3炎症小体与慢性萎缩性胃炎的关系

慢性萎缩性胃炎(CAG)是消化系统常见病、疑难病,以胃黏膜腺体减少或消失为特征,CAG出现肠上皮化生或异型增生被称为胃癌前病变,大大增加癌变风险。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活失调释放大量炎症因子,诱导炎症级联反应,参与多种疾病进程。研究发现NLRP3炎症小体激活失调会引起胃黏膜长期慢性炎症浸润,诱导CAG发生发展,而线粒体功能障碍在NLRP3炎症小体激活过程中扮演重要角色,线粒体功能障碍产生活性氧(ROS)堆积是激活NLRP3炎症小体的关键。刘友章教授提出“脾-线粒体相关”理论,认为脾主运化水谷,化生气血,将营养物质输送至全身,供给机体所需能量和物质;线粒体通过三羧酸循环生成的三磷酸腺苷(ATP)是人体的主要能量来源,二者在生理上作为人体能量加工厂的观点不谋而合,在病理上脾虚与线粒体氧化磷酸化功能障碍存在关联,脾虚不运出现湿浊痰瘀等病理产物与线粒体功能障碍产生的代谢产物等存在契合之处。该研究从“脾-线粒体相关”理论出发,探讨CAG的中医病机,论述了NLRP3炎症小体与CAG发病的关系,提出线粒体功能障碍激活NLRP3炎症小体是CAG脾虚病机的现代生物学基础,健脾法可能与改善CAG患者线粒体功能和炎症反应,减轻胃黏膜损伤有关,为中医药防治CAG提供新思路。

盐酸右美托咪定对脂多糖诱导Kupffer细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体通路的研究

目的探讨盐酸右美托咪定对脂多糖(LPS)诱导Kupffer细胞(KCs)核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路的影响。方法用500 ng·mL-1 LPS处理KCs 24 h,构建炎性因子释放模型细胞。将模型细胞随机分为模型组和低、中、高剂量实验组,另取正常KCs作为空白组。空白组和模型组均不给予药物处理,正常培养7 h;低、中、高剂量实验组分别给予50,200和500 ng·mL-1盐酸右美托咪定处理1 h,继续孵育6 h。用噻唑蓝法检测各组细胞的存活率,用Western Blotting法检测各组细胞炎症小体相关蛋白的表达水平。结果干预后,低、高剂量实验组和模型组、空白组的细胞存活率分别为(60.11±4.69)%,(85.02±5.04)%,(51.24±4.22)%和(100.00±5.24)%,NLRP3蛋白相对表达水平分别为2.49±0.28,1.21±0.21,3.37±0.30和1.02±0.22,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1相对表达水平分别为2.68±0.26,1.17±0.22,3.54±0.34和1.01±0.20,IL-1β相对表达水平分别为3.45±0.35,1.53±0.32,4.51±0.37和1.01±0.23,模型组的上述指标与低、高剂量实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论盐酸右美托咪定能够减轻LPS诱导的KCs的炎症反应,从而提高KCs的存活率,推测其可能是通过抑制NLRP3炎症小体通路,从而降低炎症因子的表达。

樟芝多糖保护小鼠急性肝损伤的机制研究

目的研究樟芝多糖保护小鼠急性肝损伤的机制。方法通过D-氨基半乳糖构建急性肝损伤小鼠,C57BL/6小鼠分为对照组、模型组、樟芝多糖高剂量组、樟芝多糖低剂量组,樟芝多糖高、低剂量组每日分别给予50,25mg·kg-1的樟芝多糖2次,对照组和模型组给予等体积的生理盐水。给药7d后紫外比色法测试盒检测大鼠肝组织中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平;TBA法试剂盒检测肝组织中丙二醛(MDA)的水平;ELISA试剂盒检测肝组织中白介素-6(IL-6)的表达;Western-Blot检测肝脏组织中NLRP-3、白介素-1β(IL-1β)、pro-caspase-1和caspase-1的表达;HE染色观察小鼠肝脏病理;RT-qPCR检测肝脏组织中Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-1的mRNA表达。结果与模型组相比,樟芝多糖可以明显改善急性肝损小鼠的肝脏病理,降低ALT、AST的表达以及MDA和IL-6的表达(P<0.01),肝脏组织中NLRP-3、IL-1β以及pro-caspase-1和caspase-1的表达相比模型组显著降低(P<0.05),Bax、caspase-3、caspase-1的mRNA表达相比模型组显著降低(P<0.01),Bcl-2显著升高(P<0.01)。结论樟芝多糖对于小鼠急性肝损伤有着很好的保护作用,其作用机制与炎性小体NLRP-3及其相关炎症因子的抑制有关。