CTAB对流感病毒的裂解作用

观察流感病毒膜蛋白 血凝素 (HA)和神经氨酸酶 (NA)在裂解剂CTAB作用下的裂解情况。流感病毒加入一定量的保护剂 ,一定时间后加入裂解剂CTAB ,在 5～ 8℃温度下 ,作用 2个h ,超速离心 ,提取上清液。经电镜观察、SDS PAGE电泳检测 ,表明流感病毒膜蛋白在裂解剂浓度为 4 0 0mg/L的条件下 ,裂解比较完全 ,形态比较完整。CTAB作为流感病毒膜蛋白的裂解剂 ,效果较好 ,浓度为 4 0 0mg/L可作为实际工作的使用浓度。

Influenza Viral Membrane Deformation Due to Refolding of HA-Protein:Two-dimensional Model and Analysis

In this paper we study influenza viral membrane deformation related to the refolding of Hemagglutinin(HA)protein.The focus of the paper is to understand membrane deformation and budding due to experimentally observed linear HA-protein clusters,which have not been mathematically studied before.The viral membrane is modeled as a two dimensional incompressible lipid bilayer with bending rigidity.For tensionless membranes,we derive an analytical solution while for membrane under tension we solve the problem numerically.Our solution for tensionless membranes shows that the height of membrane deformation increases monotonically with the bending moment exerted by HA-proteins and attains its maximum when the size of the protein cluster reaches a critical value.Our results also show that the hypothesis of dimple formation proposed in the literature is valid in the two dimensional setting.Our comparative study of axisymmetric HA-clusters and linear HA-clusters reveals that the linear HA-clusters are not favorable to provide a sufficient energy required to overcome an energy barrier for a successful fusion,despite their capability to cause membrane deformation and budding.

流感病毒在脂筏上组装与出芽

流感病毒造成的季节性流行性疾病给全世界带来沉重的健康负担.近年来,甲型流感病毒的变种H5N1、H7N9给各国带来了很大危害.流感病毒属于正黏附病毒科,它的遗传物质由多个节段的负链RNA组成,其组装和出芽剪切生殖是一个涉及到多种病毒因子,多步骤、复杂的生化过程.流感病毒会使用宿主的细胞膜上的"脂筏"区域作为病毒出芽位点.首先病毒的两种糖蛋白NA蛋白、HA蛋白会在脂筏区域聚集,造成脂筏区膜变形弯曲,并且发动出芽的过程.接着,流感病毒基质蛋白M1的C端与HA、NA结合,其自身在脂筏区域开始多聚化并使膜向外弯曲形成原始病毒体的内部结构,接着招募病毒的核糖核蛋白复合物(VRNP)与M2蛋白,使组装的过程进一步完成.最后,M2蛋白会富集在原始病毒体的底部,完成膜的剪切和病毒体的释放.

抗流感病毒药物研究进展

流感病毒是人类健康的一大威胁。应对流感病毒的主要方式是疫苗和药物治疗。对可能大规模爆发的流感疫情来讲,药物治疗是最好的控制流感病毒传播的手段。目前,抗流感病毒药物包括已在俄罗斯上市的盐酸阿比朵尔和美国FDA批准的4个抗流感病毒药物,后者根据作用机制的不同分为M2离子通道蛋白抑制剂和神经氨酸酶(NA)抑制剂。其中,NA抑制剂根据结构又可分为唾液酸类似物、苯甲酸衍生物、环己烯衍生物、环戊烷衍生物、吡咯烷衍生物及天然提取物6大类。本文简要介绍了上述各类已上市和临床在研药物的最新研究进展。

新型甲型H1N1流感危重症存活和死亡病例的临床特点分析

目的 了解新型甲型H1N1流感（简称甲型流感）危重病例的临床特点,探讨与死亡相关的危险因素. 方法 采用前瞻性研究方法分析北京地坛医院2009年10月3日至12月15日收治的55例甲型流感危重病例的临床特点,并对存活病例和死亡病例进行比较分析. 结果 55例中男31例,女24例,年龄10个月至84岁,平均（38±20）岁.危重患者中〈65岁48例（48/55）,肥胖33例（33/49）,伴基础疾病26例（26/49）,妊娠6例（6/24）,临床表现为高热、咳嗽、咳痰（部分为血痰）及呼吸困难,双肺可闻及干湿性啰音.55例中54例并发呼吸衰竭,26例并发ARDS,38例需行机械通气;27例继发感染,其中肺部感染24例（呼吸机相关肺炎10例）.发病早期C反应蛋白升高,平均为（131±130）mg/L,CD4＋及CD8＋T细胞计数降低,分别为（217±139）/μl和（162±82）/μl;随病程进展,死亡病例的C反应蛋白持续升高,T细胞亚群计数持续降低,继发真菌感染的比例明显高于存活组（P〈0.05）;Logistic回归分析结果显示,体重指数高及继发真菌感染的患者病死率明显增高（OR值分别为6.512和19.631,P均〈0.05）;发病48 h内使用奥司他韦抗病毒治疗者中未出现死亡病例. 结论 青壮年、肥胖、伴基础疾病和妊娠的甲型流感患者易进展为危重症;C反应蛋白水平持续升高及T细胞亚群计数持续降低提示预后不良;体重指数高及继发真菌感染者病死率高;早期应用奥司他韦治疗可降低病死率.

利用酵母双杂交系统研究桑脉带相关病毒核外壳蛋白自身相互作用

桑脉带相关病毒(mulberry vein banding-associated virus,Mu VBa V)属布尼安病毒科番茄斑萎病毒属,是广西桑树病毒病的主要病原。为研究其核外壳蛋白(nucleocapsid protein,N)的自身相互作用,本研究利用分离泛素酵母双杂交膜系统构建了N蛋白的诱饵表达质粒和猎物表达质粒并转化酵母菌株NMY51。诱饵表达质粒p BT3-SUC-Mu VBa V-N或p DHB1-Mu VBa V-N和阳性对照质粒p Ost1-Nub I共转化的酵母菌在筛选性营养缺陷型培养基上SD-trp-leu-his-ade(SD-AHLW)均能正常生长,而与阴性对照质粒p PR3-N共转化的酵母在营养缺陷型SD-AHLW平板上不能正常生长,表明N蛋白诱饵质粒的表达产物没有自我激活活性,对酵母细胞也没有毒性。N蛋白诱饵表达质粒及其猎物表达质粒共转化的酵母也可以在SD-AHLW培养基上正常生长,说明N蛋白在酵母细胞中可发生自我相互作用。本研究结果为今后研究Mu VBa V N蛋白的功能以及通过筛选桑c DNA文库获得互作寄主因子奠定了良好的基础。

H5N1流感病毒M1蛋白免疫制备的单克隆抗体的研究

目的制备抗人流感病毒H5N1株M1蛋白的单克隆抗体，为流感的快速诊断和研究提供新的工具。方法应用在大肠埃希菌中表达的人H5N1亚型禽流感病毒（A／Anhui／1／2005）株M1蛋白，以纯化的表达产物免疫BALB／C小鼠，取脾细胞与sp2／0细胞系作细胞融合后，间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞，并应用间接免疫荧光法对抗体的特异性进行鉴定。结果获得3株能稳定分泌抗禽流感病毒M1抗原的McAb杂交瘤细胞株，交叉反应试验及间接免疫荧光检测表明，三株McAb具有型特异性。结论用H5N1禽流感病毒M1蛋白免疫制备的单克隆抗体，具有一定的交叉反应性，可用于多种亚型甲型流感病毒的检测。