太行鸡INHA基因多态性与产蛋性状相关性研究

研究旨在探究抑制素A(Inhibin A,INHA)基因多态性与太行鸡产蛋性状的相关性,挖掘影响太行鸡产蛋性状的分子遗传标记。通过对125只麻羽太行母鸡INHA基因进行测序,检测其多态性并分析其与产蛋性状的相关性。结果显示:在太行鸡INHA基因上共存在7个SNPs位点(C187T、T248C、G410A、A680G、T1040C、T1037C、T324C)。在C187T位点中,优势等位基因为C,与500日龄产蛋数关联分析中显示该位点的TT基因型比CC基因型产蛋数显著增高(P<0.05)。在A680G位点中,优势等位基因为A,与开产日龄、300日龄产蛋数和500日龄产蛋数关联分析显示该位点的AG基因型开产日龄显著早于AA基因型(P<0.05),且产蛋数极显著增高(P<0.01)。两位点基因型分布均处于Hardy-Weinberg平衡状态。其余位点未发现显著关联。结果表明:INHA基因多态性对太行鸡的产蛋性状存在一定的影响,推测C187T和A680G可能是太行鸡产蛋性状的重要SNPs位点。

3个绵羊群体INHA基因的遗传多态性及对产羔数的影响

【目的】比较滩羊、蒙古羊和小尾寒羊INHA基因的多态性,分析不同基因型对产羔数的影响,为绵羊繁殖力标记的辅助选择提供理论依据。【方法】利用PCR-SSCP方法检测和分析3个绵羊品种INHA基因的多态性,通过最小二乘分析方法研究不同基因型对产羔数的影响。【结果】(1)滩羊和蒙古羊INHA基因在5′调控区282核苷酸处发生1处A→G突变(P1位点),在第2外显子的第470核苷酸处发生1处A→T突变(P2位点),3个绵羊品种在第2外显子第903核苷酸处发生G→A突变(P3位点)。(2)滩羊、蒙古羊和小尾寒羊P1位点C、D基因频率分别为0.840和0.160,0.852和0.148及0.162和0.838,均处于中度多态;P2位点E、F基因频率分别为0.784和0.216,0.787和0.213及1.000和0.000,滩羊和蒙古羊在该位点均处于中度多态;引物P3扩增片段中,滩羊和蒙古羊表现为A、B和C 3种单倍体基因型,而小尾寒羊仅表现出A和B 2种基因型。滩羊、蒙古羊和小尾寒羊的A、B、C基因型频率分别为0.136,0.037和0.147;0.800,0.926和0.853及0.064,0.037和0.000,B基因在3品种中均为优势基因型。(3)P1位点DD型小尾寒羊产羔数较CD型提高0.636只,CD型滩羊产羔数较CC型提高0.332只,差异均显著(P<0.05),CD型蒙古羊产羔数较CC型有提高的趋势;P2位点EF型滩羊产羔数较EE型降低0.387只,差异显著(P<0.05),EF型蒙古羊产羔数较EE型提高0.053只,差异不显著(P>0.05);P3位点,滩羊B基因型平均产羔数较A、C基因型分别多0.215只和0.200只,蒙古羊B基因型平均产羔数较C基因型多0.250只,小尾寒羊B基因型平均产羔数较A基因型多0.620只,差异均显著(P<0.05)。【结论】3个绵羊群体在INHA基因P1、P2位点均表现一定的多态性;滩羊和蒙古羊P2位点可能为控制产羔数的"不利"突变位点,3个绵羊群体INHA基因P1、P3位点可能为控制产羔数的"有利"突变位点。

山羊INHA和INHBA基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

分别提取处于同一发情周期的5只低繁藏山羊和5只高繁金堂黑山羊的卵巢、垂体的总RNA,并通过RT-PCR技术对INHA、INHBA基因cDNA进行克隆、序列分析,以Real-time PCR技术对其进行组织表达研究.结果表明:藏山羊和金堂黑山羊INHA基因编码区均长1083bp,编码360个氨基酸,两品种基因编码区有7处碱基不同,并导致3处氨基酸的差异;INHBA基因编码区均长1278bp,编码425个氨基酸,两品种基因编码区有4处碱基不同,并导致1处氨基酸的差异.藏山羊INHA基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、绵羊、牛、野猪、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.4%、98.9%、95.8%、88.6%、81.0%、79.5%和84.8%;藏山羊INHBA基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、绵羊、牛、野猪、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.7%、99.4%、98.1%、91.7%、88.0%、88.5%和91.2%.INHA和INHBA基因mRNA在两个山羊品种的卵巢、垂体中均有表达,但两品种间无显著性差异(P>0.05).说明INHA和INHBA基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究.

基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药水平和katG、inhA、oxyR-ahpC以及rpoB基因突变位置的关联性分析

结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis,MTB）是一种能够引起结核病的病原菌,除了能够引起常见的肺结核外,还能够侵犯全身多个器官引起相应结核病。肺结核病是由结核分枝杆菌引起的呼吸系统传染病,人感染结核分枝杆菌后是否发病与免疫功能密切相关。目前结核病的诊断和治疗面临着巨大挑战,尤其是难治性结核病及耐药结核病的诊断及有效治疗问题。

云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌katG和inhA基因突变特征

目的分析云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌katG和inhA基因突变特征。方法采用PCR方法对云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌进行katG和inhA基因扩增,并将扩增产物进行基因测序后比对分析。结果88株异烟肼耐药菌株中,耐药基因与表型药敏结果的符合率为82.95%(73/88),katG和inhA基因突变率分别为75.00%(66/88)和9.09%(8/88)。最为常见的基因突变位点为katG315(67.05%)和inhA-15(7.95%),katG315位点基因突变主要表现为Ser315Thr(59.09%,52/88)。耐多药与单耐异烟肼菌株中katG基因突变比例,差异有统计学意义(χ^(2)=4.190,P=0.041),而inhA基因及katG315、inhA-15位点基因突变比例,差异无统计学意义(P>0.05)。结论云南省异烟肼耐药以katG315和inhA-15基因突变为主,MDR菌株中katG基因突变率高于异烟肼单耐,目前基于基因突变的分子检测技术是检测异烟肼耐药的有效手段。

猪INHA与GnRHR基因型互作效应对产仔数的影响

利用不对称PCR-SSCP、PCR-SSCP、PCR-RFLP技术检测了INHA基因、GnRHR基因在大白猪、长白猪、宁乡猪、桃源猪、大围子猪、沙子岭猪、海南五指山猪中的多态性.结果表明,INHA基因外显子Ⅱ检测到2个突变位点,即外显子ⅡG262A位点和A852G位点.在GnRHR基因5′-UTR端310bp处有1个A→C的突变位点.分析INHA基因G262A与GnRHR基因A310C互作效应时发现,基因型的互作效应在大白猪中极显著(P<0.01),在长白猪中达到了显著水平(P<0.05).基因互作型效应最大的是AGDD基因互作型,最小的是GGEE基因互作型.分析INHA基因A852G与GnRHR基因A310C互作效应时发现,各基因型互作对总产仔数、产活仔数影响不显著(P﹥0.05).

马关无角山羊卵巢颗粒细胞INHA基因siRNA的筛选与鉴定

为了研究INHA基因在马关无角山羊卵泡发育中的作用,设计并化学合成了3条针对INHA基因的si RNA,脂质体法转染至马关无角山羊的卵巢颗粒细胞,Real-time PCR技术和WesternBlot技术对其干扰效率进行了筛选。结果表明:si RNA-2对INHA基因m RNA表达抑制率达到了94.3%,对蛋白表达的抑制率达到了93.4%,是INHA基因沉默的最佳干扰质粒,可为今后研究INHA基因的功能提供基础。

多位点酶切联合SSCP方法检测结核杆菌inhA基因突变

目的 建立一种简便而有效的方法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药基因inhA突变。方法 收集结核杆菌临床菌株48株,其中异烟肼敏感株25株,耐药株23株。抽提临床菌株DNA和H37Rv标准株DNA,聚合酶链反应(PCR)方法扩增inhA基因,产物纯化后用限制性内切酶Hae Ⅱ酶切,酶切片段用单链多态构象分析(SS-CP)方法检测其单链构象。发现单链构象改变的PCR产物进行DNA测序。结果 48株菌株中,25株敏感株中未见inhA基因单链构象差异,23株耐药株中inhA基因突变率为21.8％。新发现的错义突变有:A26E、R27K、V28A、Q32A、L54V和S72T。结论 应用限制性内切酶Hae Ⅱ改良的聚合酶链反应—单链多态构象分析(PCR—SSCP)技术适用于结核临床菌株inhA基因突变的筛选。inhA基因突变位点呈多样性。

INHA、INHBA基因在单、多羔黔北麻羊不同组织的表达研究

为探究抑制素(Inhibin,INH)α亚基(INHA)和βA亚基(INHBA)基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平及初步探明其对山羊产羔性状的影响,本实验以单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采集子宫、输卵管、垂体、下丘脑和卵巢组织并提取总RNA,通过qRT-PCR技术对INHA、INHBA基因mRNA在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平进行检测。结果表明:INHA、INHBA基因在单、多羔黔北麻羊卵巢组织中的表达量高于其他组织(P<0.01),在多羔组黔北麻羊卵巢中的表达量高于单羔组(P<0.01),INHA基因在单羔黔北麻羊5个组织的表达量依次为:卵巢>输卵管>垂体>子宫>下丘脑,在多羔黔北麻羊5个组织中的表达量依次为:卵巢>垂体>下丘脑>输卵管>子宫;INHBA基因在单羔黔北麻羊5个组织的表达量依次为:卵巢>输卵管>子宫>垂体>下丘脑,在多羔黔北麻羊5个组织中的表达量依次为:卵巢>子宫>输卵管>垂体>下丘脑。结果提示,INHA、INHBA基因主要调控单、多羔黔北麻羊母羊的卵巢组织,本研究为进一步探讨INHA、INHBA基因对山羊繁殖性能的影响机制及基因功能奠定基础。

耐多药结核杆菌分离林KatG及inhA基因变异的研究

目的用直接测序法研究临床分离的多耐药结核杆菌的katG和inhA的基因变异机理。方法用未见报还katG和inhA基因中的片须为引物，PCR法扩增产物，克隆后大量制备质粒，经全自动测序系统测定其DNA序列。结果15株耐INH≥1ug/ml的细菌均有katG突变，主要为点突变。其中14株有463位和315位AA密码子改变。13个变异位点中，9个未见文献报告。关于inhA变异，在18个耐INH≥1ug/ml的菌株中，全部出现inhA基因变异，主要为点突变和缺失，其中又以单个位点变异为主。各菌株之间变异不同。耐式菌株中，katG和inhA同时出现变异的比例较大。结论结核杆菌耐药基因变异机理复杂，我国分离的多耐药结核菌株与国外的菌株上述二基因变异特点不同。

乌湖杂交羊GnRHR与INHA基因多态性及其互作效应对产羔数的影响

试验旨在探究GnRHR和INHA基因遗传变异及其互作效应对绵羊产羔数的影响。参考GenBank发布的绵羊GnRHR基因(登录号:AH004943)和牛INHA基因(登录号:U16237)的DNA序列设计引物,采用PCR-SSCP技术检测GnRHR和INHA基因在乌湖羊、湖羊、乌骨绵羊中的遗传多态性,分析多态位点与产羔数的相关性,以及GnRHR和INHA基因间互作效应。结果显示,乌湖羊和湖羊群体GnRHR和INHA基因均存在多态位点,分别检测到GG、GC、CC和AA、AB、BB基因型,乌骨绵羊因样本较少,未发现多态位点。测序发现,GnRHR基因编码区198 bp处发生G→C突变,导致甘氨酸变为精氨酸,为错义突变;INHA基因877 bp处发生T→C突变,为同义突变(仍为天冬氨酸)。遗传学分析显示,GG和AA为优势基因型,G和A为优势等位基因;χ2适合性检验显示,试验羊群体GnRHR和INHA基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);分析GnRHR与INHA基因互作效应发现,基因互作效应在乌湖羊和湖羊群体差异显著(P<0.05),ABCC互作基因型互作效应最大,AAGG互作基因型互作效应最小。乌湖羊ABCC互作基因型的平均产羔数比AAGG互作基因型多1.68只,湖羊ABCC互作基因型产羔数比AAGG互作基因型多1.32只,ABCC互作基因型比AB和CC基因型的产羔数都高,表明互作效应与羊产羔数呈正相关。本研究认为,INHA基因T877C位点与GnRHR基因G198C位点互作基因型与绵羊产羔数紧密关联,对试验羊群体产羔数影响显著。

结核分支杆菌耐异烟肼基因inhA突变的测序研究

目的 :对多耐药株结核分支杆菌的inhA基因进行测序分析。方法 :inhA片段为引物 ,聚合酶链反应扩增产物 ,克隆后制备质粒 ,直接测定DNA序列。结果 :在17个耐异烟肼菌株中 ,11株出现inhA基因变异 ,突变率为64.7%。主要为碱基置换和缺失 ,各菌株变异不同。katG和inhA同时出现变异的比例高。结论 :结核菌的耐异烟肼 (INH)和乙胺丁醇 (EMB)变异与inhA突变有关 。

反刍动物INHA基因编码区生物信息学分析

利用生物信息学的方法分析了反刍动物绵羊、水牛、藏羚羊、白犀牛、山羊的INHA基因编码序列(coding sequence,CDS),并对该基因的核苷酸歧异度、遗传分化和净遗传距离、疏水性/亲水性、蛋白质二级结构、氨基酸序列进行了分析和预测。结果表明,在反刍动物的基因序列中,核苷酸歧异度、净遗传距离大小决定了物种间亲缘关系的远近。INHA蛋白表现为疏水性,蛋白质二级结构主要结构元件是无规卷曲和延伸链,INHA蛋白呈碱性。

INHA基因干扰对马关无角山羊卵巢颗粒细胞的影响

为了揭示INHA基因在马关无角山羊卵泡发育过程中的作用,为山羊多胎性状的研究提供理论依据,以高繁殖力地方品种--马关无角山羊的卵巢颗粒细胞为研究对象,采用siRNA技术,对卵巢颗粒细胞所分泌的糖蛋白激素基因INHA进行了干扰,Western blot法检验了干扰后INHA蛋白的表达量,Real-time PCR法检测了干扰后凋亡家族主要基因、主要生长因子及激素受体的mRNA表达量变化。Western blot结果显示,干扰48h后的INHA蛋白的表达量极显著低于正常组和阴性对照组(negative control,NC)(P<0.01);Real-time PCR结果显示,凋亡促进基因Bax在转染后,表达量极显著低于正常组和NC组(P<0.01),凋亡抑制基因bcl-2和bcl-xl基因在转染后,表达量极显著高于正常组和NC组(P<0.01);主要生长因子IGF-1和IGF-2基因在转染后,mRNA的表达量明显减少(P<0.01),其中IGF-1的表达量降低最为明显;激素受体FSHR和LHR基因mRNA的表达量极显著低于正常组和NC组(P<0.01)。由此推测,INHA基因可能是通过影响卵巢颗粒细胞凋亡/增殖,进而影响了卵泡的发育。

绵羊INHA基因的生物信息学分析

为了对绵羊INHA基因进行生物信息学分析,试验对从GenBank中检索到的8个物种的INHA基因同源序列进行系统进化分析,并对绵羊INHA基因的理化性质、编码蛋白二级结构、信号肽、跨膜结构以及蛋白质亚细胞定位进行分析。结果表明:绵羊INHA基因与山羊、牛、猪亲缘关系很近;其编码的蛋白是一个疏水性不稳定蛋白,分子质量为73 098.2 u,包含857个氨基酸;蛋白的二级结构由39个α-螺旋(14.72%)、15个β-转角(5.66%)、156个无规则卷曲(58.87%)、55个延伸链(20.75%)和3个跨膜结构区域组成;该蛋白定位于细胞核,不含信号肽。

幼年与成年湖羊超数排卵及卵巢CYP17A1、INHA和FSHR基因表达差异研究

为了研究幼年与成年湖羊的超数排卵及卵巢基因表达差异,试验以4周龄幼年母羊(Lamb组)和2岁龄成年母羊(Adult组)湖羊为研究对象,对其进行超数排卵处理,观测试验羊卵巢的表型差异;采用放射免疫法测定试验羊血清繁殖激素水平;以实时荧光定量PCR法测定试验羊卵巢组织CYP17A1、INHA和FSHR基因相对表达量。结果表明:超数排卵处理后,Lamb组母羊卵巢形成的卵泡数量为(70.40±6.11)个,显著高于Adult组的(21.40±2.87)个(P<0.05);Adult组母羊卵细胞直径和发情率显著高于Lamb组(P<0.05)。Adult组母羊血清繁殖激素水平与Lamb组比较差异不显著(P>0.05)。Lamb组母羊卵巢组织CYP17A1、INHA和FSHR基因的相对表达量均极显著高于Adult组(P<0.01)。说明幼年母羊通过提高卵巢组织内与雌激素合成相关的基因表达水平,而使其对外源超数排卵激素较敏感。

INHA基因在公绵羊繁殖相关组织的表达研究

为探索INHA基因在公绵羊繁殖中的作用,采用荧光定量PCR技术检测INHA基因在高繁殖力小尾寒羊公羊和低繁殖力苏尼特羊公羊下丘脑-垂体-睾丸轴等繁殖相关组织中的表达。结果表明:INHA基因在小尾寒羊和苏尼特羊睾丸中表达量最高,其次是肾上腺、附睾,在其他组织中均呈痕量表达。INHA基因在苏尼特羊睾丸的表达量极显著高于小尾寒羊(P<0.01);在肾上腺的表达量高于小尾寒羊,但差异不显著(P>0.05)。结论:INHA基因可能主要在睾丸中对公绵羊繁殖功能发挥抑制作用。

PCNA、AR和INHA基因在藏羊和小尾寒羊睾丸中的表达差异

为探究精子发生基因与不同繁殖力公羊之间的关系,对PCNA、AR和INHA基因在藏羊和小尾寒羊睾丸中的表达差异进行了研究。采用实时荧光定量PCR方法,检测PCNA、AR和INHA基因在低繁殖力的藏羊和高繁殖力的小尾寒羊睾丸中的表达差异。结果显示,PCNA基因在藏羊和小尾寒羊睾丸中的表达量差异不显著(P>0.05),而AR基因在藏羊睾丸中的表达量极显著高于小尾寒羊(P<0.01),INHA基因在藏羊睾丸中的表达量显著高于小尾寒羊(P<0.05)。综上,成年绵羊睾丸中生精细胞增殖旺盛,可能与品种和环境因素无关;藏羊睾丸中AR基因的高表达能拮抗INHA基因对生精功能的抑制,促进睾酮分泌,有利于藏羊精子的发生。

苏云金杆菌4.0718菌株InhA的鉴定和不同生长时期的表达分析

免疫抑制因子A(Immune Inhibitor A,InhA)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)分泌的一种锌金属蛋白酶,具有水解昆虫抗菌肽的活性.为了研究InhA在Bt4.0718菌株中的重要功能,利用SDS-PAGE分离了Bt4.0718菌株营养生长中期、芽胞早期和芽胞晚期的细胞总蛋白质,通过MALDI-TOF/TOFMS分析以及数据库搜索,鉴定到了相对分子质量为86.5kD、pI为5.37的InhA蛋白质.然后采用双向电泳(2-DE)技术检测该蛋白质在不同时期表达量的差异,发现分离和鉴定到的InhA及相对分子质量为75kD、pI为5.13的InhA precursor蛋白质在营养生长中期的表达量比较高,说明InhA在营养生长中期前己开始形成,直到芽胞早期达最大表达量,但芽胞晚期的图谱分析和质谱鉴定均未发现InhA.InhA在营养期的高效表达说明:Bt进入昆虫体内后,InhA在Bt细胞生长繁殖初期表达,并抑制昆虫体内的抗菌肽对Bt细胞的裂解作用,从而有助于Bt在昆虫宿主中的生存,为芽胞期晶体和芽胞的形成以及菌株毒力的发挥奠定了基础.

减毒炭疽芽胞杆菌inhA基因缺失突变株的构建及鉴定

炭疽（anthrax）是一种人畜共患的急性烈性传染病,其病原菌是炭疽芽胞杆菌（Bacillus anthracis）,属于革兰氏阳性菌。炭疽病是世界公认的五大人畜共患病之一,由于炭疽芽胞杆菌感染具有致病力强、传染途径多、潜伏期短、发病快、病死率高等特点,对人类健康和社会稳定造成极大的威胁。因此,对炭疽芽胞杆菌的研究一直是生命科学领域的热点。