新生儿凝血因子Ⅶ缺乏症2例报告并文献复习

目的探讨新生儿期发病的遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症(FⅦD)的临床特征、诊断和治疗。方法对广州市妇女儿童医疗中心确诊的2例新生儿FⅦD的临床表现、诊治过程和基因检测情况进行回顾性分析,并通过复习相关文献,分析和总结有关国内外新生儿FⅦD的文献报道。结果 2例FⅦD患儿均为女性,临床表现为严重消化道和颅内出血,实验室特点为反复、非Vit K1依赖的凝血酶原时间(PT)持续延长,部分凝血酶原时间(APTT)正常,凝血因子Ⅶ活性分别为1.5%和3%,分别于31 d和6个月再次发生大面积颅内出血而死亡,基因检测证实均为F?基因IVS7+1G>T剪切位点纯合突变。文献复习共检索到22例新生儿期FⅦD,合并本文2例后共24例。24例均为足月,男女均可发病,多为生后7 d内发病(17/24,70.8%);首发症状依次为消化道出血9例、神经系统症状(嗜睡、抽搐和反应差等) 8例、皮肤苍白7例。颅内出血比例高(23/24); PT显著延长,Ⅶ因子活性明显下降(≤5%占83.3%);病死率及致残率高(70.8%); 14例经基因检测确诊。结论 FⅦD在新生儿期发病罕见,一旦发病,易发生致命性出血,预后不良。PT延长且不易纠正,Ⅶ因子活性显著下降即可临床诊断,F?基因某些位点突变可导致严重出血,基因诊断有助于产前诊断。

一个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系的F7基因突变分析

目的对1个遗传性凝血因子Ⅶ（coagulation factorⅦ，FⅦ）缺陷症家系进行基因突变检测，并探讨F7基因突变与疾病发生的关系。方法检测先证者及其家系共16名成员的凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）、纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）、血浆FⅦ活性（FⅦ activity，FⅦ：C）等指标以明确诊断；用DNA测序法分析先证者F7基因的全部外显子及侧翼序列、5’和3’非翻译区及家系成员相应的突变位点区域。结果先证者及其弟的PT、FⅦ：C明显异常，分别为39．0s、2％和30．1 s、3％；先证者祖母、外祖母、二姑、父亲、母亲、舅舅和二姨的FⅦ：C分别为68％、54％、71％、73％、62％、72％和59％，均稍低于正常对照水平（80％～108%）；先证者及家系成员的其他凝血表型指标均在正常范围。测序结果显示先证者及其弟的F7基因第8外显子发生了g．11349G＞A和g．11482T〉G复合杂合突变，分别导致p．Arg304Gln和p．His348Gln错义突变;先证者外祖母、母亲、舅和二姨4名母系成员均存在F7基因第8外显子g．11349G＞A杂合突变，先证者祖母、父亲和二姑3名父系成员均存在F7基因第8外显子g．11482T〉G杂合突变，家系其他成员F7基因均为正常野生型。结论该遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系先证者的F7基因存在g．11349G＞A（p．Arg304Gln）和g．11482T＞G（p．His348Gln）复合杂合突变，且分别遗传自其母系家族和父系家族。F7基因g．11349G＞A（p．Arg304Gln）和g．11482T＞G（p．His348Gln）杂合错义突变与该家系的FⅦ活性水平降低有关。

四个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系的基因与表型分析

目的研究4个遗传性凝血因子Ⅶ（FⅦ）缺陷症家系的临床表型及基因突变。方法用一期法测定先证者及其家系成员的凝血酶原时间（PT）及FⅦ活性（FⅦ：C），用双抗夹心ELISA测定血浆中FVH抗原（FⅦ：Ag），用PCR结合测序分析各家系成员的基因突变情况。结果各家系先证者PT明显延长，FⅦ：C与FⅦ：Ag明显降低。家系1先证者FⅦ基因为18041T→G纯合性突变，使未成熟FⅦ（ProFⅦ）的408位组氨酸（His）变为谷氨酸（Gln）（成熟蛋白的His348Gln）；家系2先证者FⅦ基因测序发现5078—5079CT双碱基的纯合性缺失，致使阅读框改变，在ProFⅦ的N端25位提前终止；家系3先证者FⅦ基因分析发现15975G→A与18093C→T双重杂合突变，前者为内含子6的3’端剪接位点突变（IVS6—1G→A），后者为无义突变，致使ProFⅦ蛋白的426位提前终止；家系4先证者FⅦ基因测序发现15975G→A与17908G→A双重杂合突变，后者使ProFⅦ364位Arg→Gln。结论在4个遗传性FⅦ缺陷症家系中发现His408Gln与5078—5079del CT两个纯合突变及IVS6—1G→A、Gln426stop与IVS6—1G→A、Arg364Gln两个双重杂合突变。其中His408Gln与5078—5079del CT为国内首次报道的纯合突变，IVS6—1G→A、Gln426stop为国际首次报道的突变。

遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症的分子发病机制研究

目的对一个遗传性FⅦ缺乏症家系进行F7基因突变检测，探讨其分子发病机制。方法采用ELISA法检测先证者及家系成员FVII：Ag，采用一期凝固法检测先证者及家系成员Frr、FVU：C等凝血指标进行实验表型诊断。基因检测采用DNA直接测序法分析先证者及家系成员F7基因的全部外显子及侧翼、5’和3’非翻译区，发现突变位点用反向测序加以证实；用CLCProtein Workbench软件分析基因突变位点的物种保守性和蛋白质二级结构改变。选择100名健康对照者以排除基因多态性。结果先证者及其妹妹的PT、FⅦ：C、FVII：Ag明显异常，分别为36．3s、5．0％、40．7％和33．4s、5．0％、37．4％；先证者的父亲、母亲、女儿、外甥女的门稍延长，分别为14．9s、14．6S、15．5S、14．6s；其FⅧ：C稍减低，分别为70％、85％、59％、79％。先证者F7基因8号外显子c．784T〉C杂合突变导致Ser269Pro，8号外显子c．964T〉G杂合突变导致Cys329Gly；先证者妹妹为c．784T〉C和c．964T〉G双重杂合突变，母亲为C．784T〉C杂合子，父亲、女儿、外甥女均为C．964T〉G杂合子。蛋白质生物学特性分析发现，Cys329Gly导致蛋白质空间构型发生改变，Ser269Pro导致氨基酸极性及疏水性发生改变。结论F7基因Ser269Pro和Cys329Gly双重杂合突变是导致该例遗传性FⅦ缺乏症的分子发病机制。