ID4基因高甲基化与乳腺癌相关性研究

目的观察乳腺癌中DNA结合抑制因子4(ID4)基因启动子区甲基化状态及其与临床病理特征间的关系,探讨ID4基因在乳腺癌发病过程中的作用机制。方法采用焦磷酸测序法定量检测乳腺癌及正常组织标本中ID4基因启动子区甲基化水平,并分析其在不同临床病理特征间的差异;用RT-PCR检测MM-453细胞去甲基化处理前后ID4启动子区甲基化水平及mRNA表达情况。结果乳腺癌组织中ID4启动子区甲基化水平显著高于正常乳腺组织[(31.16±1.50)%vs(19.89±0.22)%,P<0.01];ER+乳腺癌组织中ID4甲基化水平显著高于ER-乳腺癌组织[(36.57±1.97)%vs(27.91±1.83)%,P<0.01];去甲基化处理后MM-453细胞ID4甲基化水平明显下降,mRNA表达显著上升,两者呈负相关(r=-0.973,P<0.01)。结论 ID4基因可能通过启动子区高甲基化等多种途径在乳腺癌发生、发展过程中起着重要作用,其启动子区高甲基化在ER+的乳腺癌中具有重要意义。

pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒的构建及其在活细胞内的相互作用

目的构建pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察Olig2与Id4的相互作用。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增Olig2和Id4基因,分别定向克隆到pBiFC-VN173和pBiFC-VC155载体中,获得pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序;用脂质体方法共转染pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4质粒到人结肠癌细胞系SW-1116细胞中,在荧光显微镜下观察Olig2与Id4之间的相互作用。结果通过酶切鉴定和测序表明成功构建了pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒;该质粒能够有效地共同转染到靶细胞,Olig2和Id4在靶细胞中能够高效表达,并可以相互结合出现BiFC荧光信号,且该信号主要分布于胞质中。结论成功构建了用于BiFC技术的真核表达载体,并在活细胞内检测到Olig2和Id4分子的相互结合。

淋巴瘤Raji细胞Id4基因甲基化的检测及意义

目的检测恶性淋巴瘤细胞Id4基因是否发生了甲基化。方法体外培养人Burkitt’s淋巴瘤细胞株Raji细胞,用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)法检测Raji细胞的Id4基因甲基化状态,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Id4 mRNA的表达情况。结果 MS-PCR法检测显示Raji细胞的Id4基因存在高甲基化状态,RT-PCR法未检测出Id4 mRNA表达。结论人Burkitt’s淋巴瘤细胞株Raji细胞Id4基因呈现高甲基化状态,Id4基因表达沉默。

白血病复发患儿骨髓DNA结合抑制因子4蛋白表达及意义

目的探讨DNA结合抑制因子4(inhibitor of DNA binding 4,ID4)蛋白表达与儿童白血病复发的关系。方法采用免疫组化对48例确诊并进行系统治疗的白血病患儿初发、缓解时骨髓片进行ID4蛋白表达分析。结果 13例复发儿童白血病初发时骨髓片ID4蛋白均为阴性(0%),缓解时仅有4例ID4蛋白为阳性(30.8%);未复发病例初发时ID4蛋白5例为阳性(14.3%),缓解时ID4蛋白阳性者25例(71.4%)。缓解时ID4蛋白阳性率两者差异有统计学意义(P=0.019)。结论白血病复发病例在缓解时ID4蛋白表达率低,缓解时骨髓ID4蛋白表达与否可作为白血病复发的观察指标。

儿童急性淋巴细胞白血病抑癌基因ID4甲基化状态及其与疾病进展的关系

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)抑癌基因ID4甲基化状态及其与疾病进展的关系。方法选择ALL患儿80例作为研究对象,根据病情程度分为慢性期32例,加速期28例,急变期20例。检测所有患儿抑癌基因-DNA结合抑制因子4(ID4)甲基化状态,随访患儿的预后并进行相关性分析。结果慢性期、加速期、急变期患儿的ID4甲基化率分别为3.1%、46.4%和90.0%,对比差异都有统计学意义(P<0.05)。80例患儿总生存时间平均为(18.29±1.22)个月,无事件生存时间平均为(10.48±1.78)个月,其中慢性期、加速期、急变期患儿的总生存时间、无事件生存时间对比差异都有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析显示ID4甲基化率与临床分期、总生存时间、无事件生存时间都存在相关性(P<0.05)。多因素logistic回归方法显示ID4甲基化率、临床分期都为影响患儿总生存时间、无事件生存时间的主要影响因素(P<0.05)。结论随着病情的进展,ALL患儿的ID4甲基化率逐渐升高,且与患儿预后生存时间相关。ID4甲基化可作为ALL患儿预后评估的新的指标。

DNA结合抑制因子4研究进展

DNA结合抑制因子4(Id4)属于螺旋-环-螺旋(HLH)蛋白家族,可与碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)蛋白分子形成二聚体,负性调节bHLH的功能,影响相关基因的转录。Id4在正常组织与肿瘤中有不同的表达谱,与肿瘤进程有密切关系。在肿瘤发生、发展过程中,Id4通过竞争结合转录因子等途径而发挥重要作用。Id4基因是抗癌治疗的靶因子,其启动子区在多种肿瘤中发生甲基化导致基因沉默,可以用于临床诊断和治疗,有广阔的应用前景。

慢性髓系白血病患者SHP-1基因、id4基因甲基化状态及其与疾病进展的关系

目的探究慢性髓系白血病(CML)患者含SH2结构域的磷酸酶1(SHP-1)基因、DNA结合抑制因子4(id4)基因甲基化状态及其与疾病进展的关系。方法选取2015年5月—2019年5月中国人民解放军联勤保障部队第九六四医院血液科收治CML患者78例为研究对象(病例组),选取同期于医院健康体检者42例作为健康对照组。使用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)法对2组受试者骨髓中SHP-1基因、id4基因甲基化表达进行检测,分析CML患者慢性期、加速期及急变期SHP-1基因、id4基因甲基化率。结果SHP-1、id4基因mRNA表达水平比较,健康对照组>慢性期>加速期>急变期,差异均有统计学意义(F=83.813、424.699,P均=0.000)。健康对照组、CML慢性期、加速期及急变期的SHP-1基因甲基化阳性率分别为0%、25.00%、96.67%及100.00%,差异具有统计学意义(χ^2=98.127,P=0.000);而id4基因甲基化阳性率分别为0%、0%、66.67%及70.83%,差异亦具有统计学意义(χ^2=65.490,P=0.000)。结论SHP-1基因、id4基因在健康者中呈非甲基化,在CML慢性期甲基化率较低,在加速期或急变期则呈高甲基化状态,因而其甲基化可作为预测CML疾病进展的标志因子,对CML的诊断及治疗具有积极意义。

白血病患者ID4、hMLH1、CDX2基因启动子区异常甲基化及mRNA表达分析

目的分析白血病患者DNA结合抑制因子4(ID4)、人类Mut L同源物1(hMLH1)、尾型同源盒转录因子-2(CDX2)基因启动子区异常甲基化及mRNA表达。方法选取2015年1月—2019年3月中国人民解放军联勤保障部队第九六四医院确诊的白血病患者90例作为研究组,按照白血病类型分为急性髓系白血病(AML)38例、慢性粒细胞白血病(CML)24例、急性淋巴细胞白血病(ALL)28例,并选取同期健康志愿者30例作为健康对照组。比较各组ID4、hMLH1、CDX2基因启动子区异常甲基化及mRNA表达情况。结果AML、CML、ALL患者ID4基因甲基化发生率分别为73.68%、75.00%、85.71%,明显高于健康对照组的3.33%(χ^2=52.683,P<0.001),AML、CML、ALL患者hMLH1基因甲基化发生率分别为57.89%、58.33%、60.71%,明显高于健康对照组的6.67%,差异均有统计学意义(χ^2=24.772,P<0.001);AML、CML、ALL患者CDX2基因甲基化发生率均为100.00%,与健康对照组的96.67%比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。AML、CML、ALL患者ID4、hMLH1、CDX2基因mRNA表达均明显低于健康对照组,差异均有统计学意义(F=349.916、339.255、114.064,P<0.001)。结论白血病患者ID4、hMLH1、CDX2基因启动子区异常甲基化与白血病的发病机制密切相关,ID4、hMLH1基因的mRNA表达受到甲基化的影响,CDX2基因的mRNA表达与甲基化无关。

DNA结合抑制因子4与肿瘤关系的研究进展

DNA结合抑制因子4(ID4)属于螺旋-环-螺旋(HLH)转录因子家族,它能够与碱性的HLH(bHLH)转录因子形成异二聚体,负性调节bHLH转录因子对相关基因的转录调控。ID4在人体正常组织和肿瘤中的表达不同,ID4基因启动子区域甲基化异常所致基因表达沉默或高表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关,ID4可能成为肿瘤治疗的潜在靶点及判断肿瘤预后的重要指标。

子宫内膜异位症组织中Id-1基因的表达

目的 探讨DNA结合抑制蛋白-1基因在子宫内膜异位症组织中的表达.方法 选取体外培养成功的第3代培养量多的子宫内膜异位症患者的在位、异位子宫内膜细胞和对照组在位子宫内膜细胞各5例,采用Super Array功能分类基因芯片检测的方法 筛选子宫内膜异位症血管生成相关基因DNA结合抑制蛋白-1,并用逆转录-聚合酶链反应方法 进行验证.结果 基因芯片检测各组子宫内膜细胞中DNA结合抑制蛋白-1基因的表达水平差异有统计学意义（F=77.819,P=0.000）.子宫内膜异位症患者的在位、异位子宫内膜组织中DNA结合抑制蛋白-1比正常在位子宫内膜上调表达（t值分别为3.178、3.284,均P〈0.05）.各组间DNA结合抑制蛋白-1mRNA表达水平不同,其均数比较差异有统计学意义（F=126.699,P=0.000）.结论 子宫内膜异位症患者的异位内膜组织中DNA结合抑制蛋白-1水平较正常内膜组织明显上调表达,表明异位病灶血管生成可能与DNA结合抑制蛋白-1基因有关.

T系和B系急性淋巴细胞白血病ID4甲基化状态分析

目的探讨DNA结合抑制因子4(ID4)基因甲基化与T系、B系及T/B双表达儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MS-PCR)对18例初发ALL患儿进行ID4基因启动子区甲基化状况分析。18例ALL患儿中T系(T-ALL)2例,B系(B-ALL)13例,T/B双表达(T/B-ALL)3例。以34例同期住院的非肿瘤性疾病患儿为对照组。结果 ID4基因启动子区在初发ALL患儿中的完全甲基化率(15/18,83%)显著高于部分甲基化率(3/18,17%),P<0.05。T-ALL、B-ALL和T/B-ALL患儿的完全甲基化率分别为50%,85%,100%,显著高于对照组(18%;P<0.05),部分甲基化率和非甲基化率低于对照组(P<0.05)。T-ALL、B-ALL及T/B-ALL患儿之间ID4启动子区甲基化状态差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ID4基因的甲基化可能与儿童ALL发病有关,T-ALL、B-ALL及T/B-ALL之间的ID4甲基化状态一致。

乳腺癌中ID4基因启动子区甲基化状态及其表达

目的检测乳腺癌中DNA结合抑制因子4(ID4)基因启动子区甲基化水平及其表达。方法采用焦磷酸测序法定量检测乳腺癌(A组,40例)及正常乳腺组织(B组,20例)标本中ID4基因启动子区甲基化水平,分析其与临床病理特征间的相关性;免疫组织化学SP法检测组织标本中ID4的表达。结果 A组ID4启动子区甲基化水平为(31.16±1.5)%,高于B组的(19.89±0.22)%(P<0.01);雌激素受体(ER)阳性乳腺肿瘤组织中ID4甲基化水平为(36.57±1.97)%,高于ER阴性组织的(27.91±1.83)%(P<0.01)。在乳腺癌组织和正常组织中,ID4的蛋白表达水平与其启动子甲基化水平呈负相关(r=-0.478,P<0.01)。结论 ID4基因在乳腺癌中呈高甲基化状态(特别在ER阳性的乳腺癌中);ID4基因启动子区甲基化可能是乳腺癌的发病机制之一。

骨形态发生蛋白4/DNA结合抑制剂2信号通路在晚期内皮祖细胞修复血管内皮损伤中的作用

目的研究骨形态发生蛋白4(BMP4)信号通路在晚期内皮祖细胞(LEPC)介导的血管内皮修复中的作用与分子机制。方法分离健康人外周血单核细胞体外培养7d和28d分别得到早期内皮祖细胞(EEPC)和LEPC,观察BMP4在EEPC和LEPC中的表达情况。体外采用短发卡RNA(shRNA)沉默技术和基因转染干预BMP4的表达,观察其下游分子靶点DNA结合抑制剂2(Id2)表达情况及对LEPC的迁移、黏附等功能的影响。建立裸鼠颈动脉内膜拉脱损伤模型,在体观察干预BMP4信号通路如何介导LEPC修复血管内皮损伤。结果相对于EEPC,BMP4选择性高表达于LEPC(P<0.01)。shRNA法沉默LEPC的BMP4表达后,其下游靶点Id2的表达水平下调(P<0.01);相应的LEPC体外迁移、黏附能力明显减低(P<0.01);将沉默了BMP4的LEPC在体移植到裸鼠后其颈动脉内皮损伤的修复面积明显减小[(34±6)%比(58±7)%,P<0.01]。基因转染上调LEPC的BMP4表达后,其下游的Id2表达明显增强(P<0.01),LEPC的迁移、黏附功能改善(P<0.01),移植到裸鼠体内后其颈动脉内皮损伤的修复面积明显增加[(75±5)%比(59±6)%,P<0.01]。结论LEPC修复血管内皮损伤的作用与BMP4/Id2信号通路的表达密切相关。

BMP4通过诱导ID1的上调表达抑制口蹄疫病毒的复制

口蹄疫病毒(FMDV)能够感染多种偶蹄动物,对畜牧业发展造成极大威胁。骨形成蛋白4(BMP4)是转化生长因子超家族成员之一,能够调节细胞的增殖、分化、凋亡和迁移,研究表明BMP4在肿瘤生长及侵袭迁移中发挥重要作用。DNA结合抑制分子-1(ID1)是广泛存在于哺乳动物细胞中的核转录因子负调控蛋白,在细胞生长、衰老和分化中发挥作用,与肿瘤的发生和发展密切相关。BMP4在FMDV感染过程中所起的作用仍不清楚。为了研究BMP4抑制FMDV复制的分子机制,采用蛋白免疫印迹(Western-blotting)和实时荧光定量(qRT-PCR)研究BMP4、ID1与FMDV之间的关系。利用FMDV感染BHK-21细胞,发现病毒感染后BMP4的m RNA和蛋白水平均有所上调,表明BMP4可能参与FMDV复制的调控。外源鼠BMP4重组蛋白刺激试验表明,BMP4可抑制FMDV的复制,并且与宿主ID1的表达呈正相关。为了验证BMP4是否通过ID1抑制FMDV的复制,利用ID1基因敲除细胞系进行感染试验,发现在ID1正常表达的细胞系中,BMP4可抑制FMDV的复制。而在ID1基因敲除细胞系中,BMP4不能抑制FMDV的复制。结果表明,BMP4通过诱导ID1蛋白的上调表达从而抑制FMDV的复制。