川芎嗪对缺氧缺糖培养心肌细胞蛋白质、RNA合成及一氧化氮合酶基因表达的影响

目的：观察川芎嗪对心肌细胞缺氧缺糖损伤的保护作用。方法：本实验利用心肌细胞缺氧缺糖损伤模型，采用同位素掺入、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析方法，观察川芎嗪注射液对心肌细胞缺氧缺糖时蛋白质、ＲＮＡ合成及一氧化氮合酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的影响。结果：川芎嗪注射液可提高培养心肌细胞缺氧缺糖时３Ｈ亮氨酸（Ｌｅｕ）和３Ｈ尿嘧啶核苷（ＵＲ）的掺入率，促进蛋白质、ＲＮＡ合成，诱导ＮＯＳｍＲＮＡ在缺氧缺糖心肌细胞的表达。

川芎嗪对缺氧缺糖损伤的血管内皮细胞周期和前列环素的影响

目的 :研究在缺氧缺糖条件下 ,血管内皮细胞活性、前列环素生成和细胞周期的变化及川芎嗪对它们的影响。方法 :缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤 ,MTT比色法、流式细胞仪观察川芎嗪对血管内皮细胞作用及细胞周期的影响 ,放射免疫法测定细胞培养液中前列环素含量。结果 :川芎嗪抑制缺氧缺糖引起的血管内皮细胞减少 ,其作用主要使S期和G2 M期细胞比率增加 ,促进损伤的血管内皮细胞释放前列环素。结论 :川芎嗪具有保护缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤 ,其作用主要是通过增加S期和G2

HAMI 3379抑制自噬减轻BV2细胞缺氧缺糖损伤的机制

目的探讨HAMI 3379抑制自噬减轻BV2细胞缺氧缺糖损伤的机制。方法随机将对数生长期BV2细胞分为正常对照组、氧糖剥夺(OGD)组和1、10、100 nM HAMI 3379组,然后采用OGD处理对细胞进行造模,培养48 h,采用MTT检测、LDH释放检测及蛋白印记检测观察HAMI 3379对OGD处理后BV2细胞活性及自噬的影响。结果与正常对照组比较,1、10、100 nMHAMI 3379组细胞均有明显损伤,且LDH释放增加(P<0.05);而与OGD组比较,给予1 nM HAMI 3379有改善细胞活性趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);10、100 nM HAMI 3379可明显增加细胞存活率,减少LDH的释放(P<0.05)。与正常对照组比较,OGD组和10、100 n M HAMI 3379组Beclin-1表达量显著升高(P<0.05);而与OGD组比较,10、100 nM HAMI 3379组的BV2细胞Beclin-1表达量明显降低(P<0.05)。与正常对照组比较,OGD组和10、100 nM HAMI 3379组LC3Ⅱ/Ⅰ表达量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与OGD组比较,10、100 nM HAMI 3379组BV2细胞LC3Ⅱ/Ⅰ表达量明显降低(P<0.05)。结论HAMI 3379可改善OGD处理后BV2细胞活性,减少LDH释放,也可降低OGD处理激活的自噬信号分子Beclin-1和LC3的表达,说明HAMI 3379可通过调节自噬信号通路分子部分逆转OGD处理后BV2细胞的损伤。

NLRP3炎性小体在脂多糖诱导的高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及机制

目的 探究NLRP3炎性小体在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的心肌细胞高糖缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤中的作用及机制。方法 取正常对数期生长的H9C2心肌细胞,随机分为4组,即高糖(H)组(n=3)、高糖+缺氧/复氧(H+H/R)组(n=3)、高糖+LPS+H/R(H+LPS+H/R)组(n=3)和BAY11-7082干预高糖+LPS+H/R(H+LPS+BAY+H/R)组(n=3)。采用CCK-8法检测细胞活力,ROS检测试剂盒测定线粒体氧化应激水平,RT-PCR检测细胞NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平,Western blot法检测细胞NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的蛋白表达水平。结果 与高糖组比较,H+H/R组细胞活性降低、LDH水平升高、线粒体ROS产生增加,NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的mRNA表达上调,NF-κB、NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白水平增高(P<0.05);LPS处理后,H/R的高糖心肌细胞损伤进一步加重(P<0.05),而加用BAY11-7082后,LPS加重的损伤得以改善(P<0.05)。结论 BAY11-7082可以抑制NLRP3炎性小体激活,从而减轻LPS介导的H9C2细胞高糖H/R损伤。

丹参脂溶性成分对心肌细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的:建立丹参谱-效相关质量评价模型,研究丹参脂溶性成分对缺氧缺糖环境下体外心肌细胞的保护作用,选择适宜的药效学指标。方法:体外培养大鼠原代心肌细胞后,建立缺氧缺糖损伤模型,给予丹参脂溶性成分治疗后,观察心肌细胞的生长状态,检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:丹参脂溶性成分能明显改善受损细胞形态,显著减小心肌细胞的死亡率(P<0.01),丹参脂溶性中、高剂量可降低细胞培养基中LDH的含量(P<0.05)。结论:丹参脂溶性成分对心肌细胞缺氧缺糖损伤具有显著的保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化、提高细胞膜的通透性和提高心肌细胞对缺氧缺糖的耐受性有关。建立的药效学指标测定方法灵敏度高、重复性好,数据真实可信。

汉防己甲素对缺氧缺糖损伤BV2细胞炎症反应的影响

目的研究汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)对缺氧缺糖诱导的BV2细胞炎症反应的机制。方法将BV2细胞随机分为对照组、模型组和低、中、高剂量实验组。对照组正常培养,模型组糖氧剥夺(OGD)1 h再灌注24 h;低、中、高剂量实验组分别以0.1,1,10μmol·L^-1预孵育30 min并OGD/再灌注持续孵育。用细胞计数(CCK-8)法检测细胞存活率,以乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤,以免疫荧光法观察NLRP3表达变化,以酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)表达。结果与对照组比较,模型组对BV2细胞有明显损伤,细胞活性下降了23.45%,且LDH释放增加36%;与模型组比较,低剂量实验组有改善细胞活性趋势,而中、高剂量实验组可显著改善细胞活性(P<0.05),LDH释放减少(P<0.05)。OGD诱导BV2细胞NLRP3/IL-1β/IL-18炎症通路表达增加,实验组明显抑制NLRP3炎症小体表达。结论汉防己甲素能改善OGD诱导的BV2细胞损伤,部分是通过抑制NLRP3炎症通路起作用的。