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Generation of Control Moments in an Insect-like Tailless Flapping-wing Micro Air Vehicle by Changing the Stroke-plane Angle 被引量:6
1
作者 Hoang Vu Phan Hoon Cheol Park 《Journal of Bionic Engineering》 SCIE EI CSCD 2016年第3期449-457,共9页
We propose a control moment generator to control the attitude of an insect-like tailless Flapping-wing Micro Air Vehicle (FW-MAV), where the flapping wings simultaneously produce the flight force and control moments... We propose a control moment generator to control the attitude of an insect-like tailless Flapping-wing Micro Air Vehicle (FW-MAV), where the flapping wings simultaneously produce the flight force and control moments. The generator tilts the stroke plane of each wing independently to direct the resultant aerodynamic force in the desired direction to ultimately generate pitch and yaw moments. A roll moment is produced by an additional mechanism that shifts the trailing edge, which changes the wing rotation angles of the two flapping wings and produces an asymmetric thrust. Images of the flapping wings are captured with a high-speed camera and clearly show that the FW-MAV can independently change the stroke planes of its two wings. The measured force and moment data prove that the control moment generator produces reasonable pitch and yaw moments by tilting the stroke plane and realizes a roll moment by shifting the position of the trailing edge at the wing root. 展开更多
关键词 insect-like Flapping-wing Micro Air Vehicle (FW-MAV) control mechanism stroke plane beetle flight
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Aerodynamic analysis of insect-like flapping wings in fan-sweep and parallel motions with the slit effect 被引量:1
2
作者 Zenggang Zhu Jingtai Zhao +3 位作者 Yuanyuan He Shijun Guo Si Chen Bing Ji 《Biomimetic Intelligence & Robotics》 2022年第2期55-66,共12页
In this study,the aerodynamic performance of flapping wings using a parallel motion was investigated and compared with the insect-like‘‘fan-sweep’’motion,and the effect of adding a slit to the wings was analyzed.F... In this study,the aerodynamic performance of flapping wings using a parallel motion was investigated and compared with the insect-like‘‘fan-sweep’’motion,and the effect of adding a slit to the wings was analyzed.First,numerical simulations were performed to analyze the wing aerodynamics of two flapping motions with equivalent stroke amplitudes over a range of pitching angles based on computational fluid dynamics(CFD).The simulation results indicated that flapping wings with a rapid and short parallel motion achieved better lift and efficiency than those of the fan-sweep motion while maintaining the same aerodynamic characteristics regarding stall delay and leading-edge vortices.For a parallel motion with a pitching angle of 25◦and 100 mm stroke amplitude,the wings generated an average lift of 8.4 gf with a lift-to-drag ratio of 1.06,respectively,which were 1.8%and 26%greater than those of the fan-sweep motion with a corresponding 96◦stroke amplitude.This situation was reversed when the pitching angle and stroke amplitude were increased to 45◦and 144◦for the fan-sweep motion,which was equivalent to the parallel motion with a 150 mm stroke amplitude.The slit effect in the parallel motion was also evaluated,and the CFD results indicated that a slit width of 1 mm(1/50 wing chord)increased the lift of the wing by approximately 27%in the case of the 150 mm stroke amplitude.Further,the slit width slightly influenced the lift and aerodynamic efficiency. 展开更多
关键词 insect-like flapping wings Aerodynamic efficiency Fan-sweep Parallel flapping motion Wing slit
原文传递
用杆状病毒-昆虫细胞构建新型冠状病毒S突变的病毒样颗粒
3
作者 徐昆 米友军 +3 位作者 孔维泽 王文婷 徐晓楠 谭继英 《兰州大学学报(医学版)》 2023年第5期14-21,共8页
目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,构建以新型冠状病毒(SARS-CoV-2)Omicron和Delta刺突蛋白(S)突变的病毒样颗粒(VLP)。方法以Omicron为例,在兰州大学基础医学院病原生物研究所前期构建表达质粒pFastBac-EM基础上,将Omicron的S基因克... 目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,构建以新型冠状病毒(SARS-CoV-2)Omicron和Delta刺突蛋白(S)突变的病毒样颗粒(VLP)。方法以Omicron为例,在兰州大学基础医学院病原生物研究所前期构建表达质粒pFastBac-EM基础上,将Omicron的S基因克隆到pFastBac-EM,构建重组质粒pFastBac-EMS(ο),测序鉴定;pFastBac-EMS(ο)转化DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,获得重组杆粒Bacmid-EMS(ο),转染ExpiSf9TM昆虫细胞,获得重组杆状病毒;重组杆状病毒感染昆虫细胞表达组装VLP-EMS(ο);蔗糖密度梯度超速离心纯化、收集VLP-EMS(ο);免疫电镜鉴定纯化VLP-EMS(ο)形态及S蛋白的展示;蛋白质印迹法鉴定S蛋白表达。以相同方法构建Delta的VLP,命名为VLP-EMS(δ)。结果测序结果显示成功构建重组质粒pFastBac-EMS(ο)和pFastBac-EMS(δ);聚合酶链式反应验证重组杆粒Bacmid-EMS(ο)和Bacmid-EMS(δ)构建成功;重组杆粒转染ExpiSf9TM昆虫细胞获得VLP-EMS;免疫电镜显示VLP-EMS(ο)和VLP-EMS(δ)成功组装,S蛋白成功展示;蛋白质印迹法鉴定S蛋白成功表达。结论利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统成功构建SARS-CoV-2的VLP-EMS(ο)、VLP-EMS(δ),突变的S蛋白成功在VLP上组装并稳定表达,可以用于SARS-CoV-2抗原、疫苗和中和性抗体等的进一步研究。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 病毒样颗粒 刺突蛋白 昆虫细胞 杆状病毒
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微型仿昆飞行机器人翅运动模型及气动力分析 被引量:6
4
作者 周建华 颜景平 +1 位作者 王姝歆 张志胜 《扬州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2004年第1期36-39,共4页
对于微型仿昆飞行机器人的研制,提出了一个翅膀拍动的运动模型.该运动模型采用大迎角下拍和小迎角上拍的拍动形式,使其能产生较大的上升气动力.对该模型产生的气动力进行了分析和仿真计算,仿真结果表明:该运动模型在下拍阶段能产生大的... 对于微型仿昆飞行机器人的研制,提出了一个翅膀拍动的运动模型.该运动模型采用大迎角下拍和小迎角上拍的拍动形式,使其能产生较大的上升气动力.对该模型产生的气动力进行了分析和仿真计算,仿真结果表明:该运动模型在下拍阶段能产生大的上升和前进气动力,转动时间比γ、倾角β和翅膀拍动频率f对气动力的大小均有影响. 展开更多
关键词 仿昆飞行 微型机器人 拍动飞行 运动模型 仿真 气动力分析
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一种新型三维仿生扑翼机构设计与分析 被引量:10
5
作者 朱保利 昂海松 郭力 《南京航空航天大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期457-460,共4页
以昆虫翅膀运动机理为基础,提出了一种复合3种运动的仿生扑翼新机构。由于能使翼尖按8字形或香蕉形运动及机翼扭转,同时可保证两翼的运动对称,使扑翼运动更符合昆虫运动形态。为了实现生物运动轨迹,建立了机构参数的优化模型,并据此设... 以昆虫翅膀运动机理为基础,提出了一种复合3种运动的仿生扑翼新机构。由于能使翼尖按8字形或香蕉形运动及机翼扭转,同时可保证两翼的运动对称,使扑翼运动更符合昆虫运动形态。为了实现生物运动轨迹,建立了机构参数的优化模型,并据此设计了扑翼微型飞行器样机,其扑动规律能更逼真地模拟昆虫翼的扑动形态,为新型微型飞行器的设计提供样机。 展开更多
关键词 微型飞行器 仿生设计 三维扑翼机构 参数优化
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微型仿昆飞行机器人驻飞时姿态控制的研究 被引量:3
6
作者 周建华 王姝歆 颜景平 《测控技术》 CSCD 2004年第6期32-33,36,共3页
对于微型仿昆飞行机器人驻飞时姿态的控制 ,提出了一个基于平均力矩的控制方案 ,并且通过改变翅的迎角来获得所需的姿态控制平均力矩。在每个拍动周期结束后 ,根据状态反馈误差调整迎角。在假设驻飞时姿态偏离角度较小的情况下 ,对控制... 对于微型仿昆飞行机器人驻飞时姿态的控制 ,提出了一个基于平均力矩的控制方案 ,并且通过改变翅的迎角来获得所需的姿态控制平均力矩。在每个拍动周期结束后 ,根据状态反馈误差调整迎角。在假设驻飞时姿态偏离角度较小的情况下 ,对控制系统进行了线性化近似和解耦。最后对控制系统进行了仿真 。 展开更多
关键词 仿昆飞行 机器人 控制系统 姿态控制
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杆状病毒表达系统——有效的VLP构建工具 被引量:8
7
作者 刘拂晓 柳增善 王志亮 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期25-31,共7页
杆状病毒表达系统是以杆状病毒为外源基因载体,昆虫细胞或活体昆虫为受体的真核表达系统。相对于其他表达系统,杆状病毒表达系统具有特殊的优势:杆状病毒基因组作为表达载体可以容纳更多外源基因;杆状病毒极晚期启动子能有效调控外源蛋... 杆状病毒表达系统是以杆状病毒为外源基因载体,昆虫细胞或活体昆虫为受体的真核表达系统。相对于其他表达系统,杆状病毒表达系统具有特殊的优势:杆状病毒基因组作为表达载体可以容纳更多外源基因;杆状病毒极晚期启动子能有效调控外源蛋白的表达;昆虫细胞作为受体能够对外源蛋白进行加工修饰;杆状病毒通常只感染节肢动物,不会对人畜构成危害。因此,该系统越来越受到人们的重视,并已应用于亚单位疫苗的研发与生产,特别其对于构建病毒样颗粒,即由一种或多种病毒结构蛋白自行装配而成且不含病毒基因组的蛋白颗粒,具有不可比拟的优势。对此做详细评述并展望病毒样颗粒疫苗的发展趋势。 展开更多
关键词 杆状病毒 昆虫细胞 病毒样颗粒 杆状病毒表达系统 疫苗
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仿昆扑翼飞行器全解耦控制 被引量:1
8
作者 胡明朗 周向东 +3 位作者 魏瑞轩 王强 沈东 周新立 《机器人》 EI CSCD 北大核心 2009年第2期151-158,165,共9页
针对仿昆扑翼飞行器飞行控制所面临的欠驱动问题,基于平均理论,提出采用周期时变反馈策略控制仿昆扑翼飞行器的策略,并给出了设计周期时变反馈控制器的输入参数化设计方法.该方法对飞行昆虫的扑翼运动进行仿生模拟,通过调整根翅运动参数... 针对仿昆扑翼飞行器飞行控制所面临的欠驱动问题,基于平均理论,提出采用周期时变反馈策略控制仿昆扑翼飞行器的策略,并给出了设计周期时变反馈控制器的输入参数化设计方法.该方法对飞行昆虫的扑翼运动进行仿生模拟,通过调整根翅运动参数,实现了对6个方向气动力和力矩的独立控制.本质上就是用参数表示欠驱动系统的输入,并以此构造周期时变反馈函数;从而在原系统中引入更多数目的独立控制量,将原系统转化为完全能控系统.然后,将此可控系统线性化,并利用线性反馈控制器设计工具设计其反馈控制律.仿真结果表明,基于该策略设计的控制器具有响应速度快、稳定误差小、鲁棒性强等特点. 展开更多
关键词 微型飞行器 仿昆扑翼飞行器:欠驱动系统 周期时变反馈 平均理论
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PZT在拍翅式仿昆微型飞行机器人动力系统中的应用 被引量:1
9
作者 周建华 王姝歆 颜景平 《制造业自动化》 北大核心 2005年第2期30-31,34,共3页
分析了PZT驱动和拍翅式仿昆微型飞行机器人翅运动的特点,探讨了PZT在飞行机器人驱动 系统中的应用,设计了一种具有两自由度的驱动机构,能够带动翅膀实现复杂的运动形式。
关键词 仿昆飞行 微型机器人 机构 PZT
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神经网络在仿昆微型飞行机器人控制中的应用 被引量:1
10
作者 周建华 颜景平 +1 位作者 王姝歆 张志胜 《制造业自动化》 2004年第2期40-41,45,共3页
分析了拍翅式仿昆微型飞行机器人控制系统的特点,探讨了人工神经网络在飞行机器人控制系统中的应用,提出了一种具有神经辨识器NNI和神经PID控制器NNC的飞行机器人控制系统。
关键词 仿昆微型飞行机器人 控制系统 神经网络 动力学系统 运动学 动力学
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兔出血症病毒VP60基因在昆虫细胞中形成病毒样颗粒及其特性 被引量:6
11
作者 刘怀然 刘家森 +3 位作者 胡迎东 陈洪岩 单安山 曲连东 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第8期448-454,F0003,共8页
目的将兔出血症病毒(RHDV)VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒(VLPs)的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力。方法用Bac-to-Bac系统体外表达RHDVVP60全长基因。以免疫荧光及... 目的将兔出血症病毒(RHDV)VP60全长基因在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达,验证重组蛋白形成病毒样颗粒(VLPs)的能力及其生物学特性,探讨VLPs作为检测抗原及亚单位疫苗的潜力。方法用Bac-to-Bac系统体外表达RHDVVP60全长基因。以免疫荧光及Western blotting检测蛋白表达情况及确定蛋白最佳表达条件;免疫电镜观察VLPs形态,并对VLPs的血凝性、免疫原性进行检测。结果SDS-PAGE电泳分析表明,表达的重组蛋白分子量大小约为68KDa,在免疫荧光、琼脂扩散、ELISA试验中均与RHD多克隆抗血清特异性反应;接种重组病毒的Sf9细胞裂解液在电镜下可观察到与RHDV形态相似的VLPs;该VLPs可凝集人“O”、“B”型红细胞,凝集可被RHD多克隆抗血清所抑制;含VLPs的Sf9细胞裂解液可不经纯化用作间接ELISA抗原,所建立的ELISA方法与进口商品化试剂盒相比,特异性良好,敏感性、检出率稍低;将含VLPs的细胞裂解液加氟氏佐剂免疫兔,HI效价可达1∶40,可经受致死量病毒攻击。结论RHDV-VLPs的获得及其良好的免疫原性,为RHD血清学检测试剂的标准化、亚单位疫苗研制应用奠定基础,同时在转移载体及RHDV受体方面研究亦有潜在应用价值。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 基因 VP60 昆虫细胞 病毒样颗粒
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杆状病毒表达系统在兽用亚单位疫苗领域应用的研究进展 被引量:11
12
作者 刘春菊 任炜杰 王志亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期101-105,共5页
杆状病毒表达系统是以杆状病毒为蛋白质表达载体,昆虫细胞或幼虫为受体的真核表达系统。与原核细胞相比,昆虫细胞可对外源蛋白进行翻译后修饰,如多肽折叠、糖基化、酰基化、磷酸化、二硫键形成及蛋白质水解等。因杆状病毒对畜禽无致病性... 杆状病毒表达系统是以杆状病毒为蛋白质表达载体,昆虫细胞或幼虫为受体的真核表达系统。与原核细胞相比,昆虫细胞可对外源蛋白进行翻译后修饰,如多肽折叠、糖基化、酰基化、磷酸化、二硫键形成及蛋白质水解等。因杆状病毒对畜禽无致病性,这使得杆状病毒表达系统成为一种安全有效的兽用亚单位疫苗生产平台。作者对杆状病毒表达系统在兽用亚单位疫苗领域中的应用作了简要综述。 展开更多
关键词 杆状病毒表达系统 杆状病毒 昆虫细胞 兽用亚单位疫苗 病毒样颗粒 生产加工
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微型仿昆飞行机器人驻飞时动力学分析和仿真
13
作者 周建华 王姝歆 颜景平 《扬州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2005年第2期49-52,共4页
针对微型仿昆飞行机器人,建立了一个机体模型和驻飞时的翅运动形式,分析了驻飞时翅运动所产生的气动力,导出了微型仿昆机器人驻飞时的动力学方程,并对该方程进行了仿真分析.仿真结果表明,在一个拍动周期内,微型仿昆飞行机器人在一个小... 针对微型仿昆飞行机器人,建立了一个机体模型和驻飞时的翅运动形式,分析了驻飞时翅运动所产生的气动力,导出了微型仿昆机器人驻飞时的动力学方程,并对该方程进行了仿真分析.仿真结果表明,在一个拍动周期内,微型仿昆飞行机器人在一个小范围内振动;当一个周期结束后,机体回到原位置,驻飞时机体处于一个动态稳定状态. 展开更多
关键词 仿昆飞行 微型机器人 动力学
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人纤维介素蛋白2在昆虫杆状病毒系统中的表达及活性检测 被引量:1
14
作者 苏凯 徐莉 +1 位作者 杨道锋 宁琴 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2009年第4期213-216,220,共5页
目的:利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞(Sf9细胞)中表达人纤维介素蛋白2(hfgl2)凝血酶原酶并检测其蛋白活性。方法:首先将PCR扩增的目的基因hfgl2和pENTR/D-TOPO载体连接,再将pENTR/D-TOPO-hfgl2质粒与BaculoDirectTM线性DNA进行体外基... 目的:利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞(Sf9细胞)中表达人纤维介素蛋白2(hfgl2)凝血酶原酶并检测其蛋白活性。方法:首先将PCR扩增的目的基因hfgl2和pENTR/D-TOPO载体连接,再将pENTR/D-TOPO-hfgl2质粒与BaculoDirectTM线性DNA进行体外基因重组,采用脂质体转染法将重组DNA转染到生长良好的Sf9细胞中进行病毒包装,经过对重组杆状病毒三轮扩增后,用RT-PCR和Western blotting从基因和蛋白水平检测hfgl2表达情况,一期凝固试验检测其蛋白活性。结果:重组杆状病毒感染后,Sf9细胞停止生长,体积变大,细胞开始悬浮,破裂,呈现颗粒样外观。RT-PCR扩增和Western blotting从基因和蛋白水平证实Sf9细胞能够表达hfgl2,蛋白分子量约为63kDa。同时,在细胞上清液中检测到了可溶性hfgl2的表达,蛋白分子量约为50kDa。一期凝固试验证明表达的跨膜型hfgl2具有凝血活性。结论:hfgl2在昆虫杆状病毒表达系统中成功表达并具有生物学活性,为进一步研究hfgl2跨膜型以及可溶性蛋白功能提供了工具,亦可应用于开发重型肝炎蛋白芯片或ELISA诊断试剂盒。 展开更多
关键词 人纤维介素蛋白2凝血酶原酶 昆虫细胞(Sf9细胞) 杆状病毒表达系统
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微型仿昆扑翼飞行器解耦操控机制
15
作者 胡明朗 魏瑞轩 《机器人》 EI CSCD 北大核心 2007年第6期569-574,580,共7页
提出一种解耦操控机制,用于解决微型仿昆扑翼飞行器飞行控制中的欠驱动问题.首先通过理论分析和仿真试验分析了翅膀的振翅运动参数对气动力旋量的控制作用;然后在对昆虫飞行所采用的生物学振翅运动进行模拟的基础上,通过调整翅膀的振翅... 提出一种解耦操控机制,用于解决微型仿昆扑翼飞行器飞行控制中的欠驱动问题.首先通过理论分析和仿真试验分析了翅膀的振翅运动参数对气动力旋量的控制作用;然后在对昆虫飞行所采用的生物学振翅运动进行模拟的基础上,通过调整翅膀的振翅运动参数,设计了一个能对气动力和气动力矩实现独立控制的解耦操控机制.此操控机制采用周期函数将控制输入量参数化,从而在仿昆扑翼布局的动力学模型中引入更多数目的独立控制量.通过将原动力学系统转化为完全能控系统,解决了仿昆扑翼布局的欠驱动控制问题.同时,此操控机制仅仅要求转动角可控,有效地降低了仿昆扑翼飞行器的设计难度. 展开更多
关键词 微型飞行器 仿昆扑翼飞行器 振翅运动参数 欠驱动系统
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灰飞虱mucin-like基因全长cDNA的克隆及序列分析
16
作者 徐秋芳 张金凤 +3 位作者 乐文静 张晓霞 熊如意 周益军 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期1236-1241,共6页
昆虫肠黏蛋白(Insect intestinal mucin)是围食膜的重要组成部分,具有保护昆虫消化道免受病原物侵染的作用,同时也是昆虫生物防治的潜在靶标。获取灰飞虱肠黏蛋白基因对研究其基因功能及开发灰飞虱生物防治新靶标具有重要意义。该研究... 昆虫肠黏蛋白(Insect intestinal mucin)是围食膜的重要组成部分,具有保护昆虫消化道免受病原物侵染的作用,同时也是昆虫生物防治的潜在靶标。获取灰飞虱肠黏蛋白基因对研究其基因功能及开发灰飞虱生物防治新靶标具有重要意义。该研究根据灰飞虱mucin-like基因片段(GenBank登录号:AY578090)设计特异性引物,采用RACE方法克隆获取了灰飞虱mucin-like基因cDNA全长序列(GenBank登录号为JF502033)。核酸序列分析显示:该基因全长2 315 bp,开放阅读框为2 175 bp,编码725个氨基酸,在po1y(A)末端上游有1个典型的多聚腺苷酸信号序列AATAAA。根据cDNA序列推导的氨基酸序列分析结果表明,该序列具有5'端信号肽,但不含有O联糖基化位点和几丁质结合域。序列比对表明该基因与其他昆虫的肠黏蛋白基因没有明显的同源性,推测其是一种新的昆虫肠黏蛋白基因。 展开更多
关键词 灰飞虱 肠黏蛋白 mucin-like基因
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T4病毒研究进展
17
作者 易福明 张珈敏 +1 位作者 刘传凤 胡远扬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期792-798,共7页
T4病毒科由一类单股正链RNA病毒组成,分为松天蛾β样病毒属和松天蛾ω样病毒属.这2个属的病毒具有不同的基因组结构,β样病毒含单组分基因组,其结构蛋白由一亚基因组RNA表达;而ω样病毒含双组分基因组,2个RNA分子分别编码复制酶蛋白和... T4病毒科由一类单股正链RNA病毒组成,分为松天蛾β样病毒属和松天蛾ω样病毒属.这2个属的病毒具有不同的基因组结构,β样病毒含单组分基因组,其结构蛋白由一亚基因组RNA表达;而ω样病毒含双组分基因组,2个RNA分子分别编码复制酶蛋白和结构蛋白.在T4病毒基因组RNA 3′端有类似tRNA的二级结构.ω样病毒壳蛋白的氨基酸序列一致性高达66%~86%,而β样病毒壳蛋白的氨基酸同源性则要低得多.在昆虫细胞中表达壳蛋白基因时都能形成病毒类似粒子.该文还介绍了T4病毒复制机理以及T4病毒与其他病毒的进化关系. 展开更多
关键词 昆虫 T4病毒 基因组结构 tRNA类似结构 系统发育
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激活素受体样激酶4,5和7抑制剂体外高通量筛选模型的构建 被引量:2
18
作者 龙隆 李菲菲 +1 位作者 刘洪英 王莉莉 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期581-589,共9页
目的构建适于高通量筛选的激活素受体样激酶4(ALK4),ALK5和ALK7抑制剂的筛选模型。方法利用Bac to Bac昆虫杆状病毒表达系统,构建ALK4激酶结构域(ALK4kd),ALK5kd和ALK7kd及Smad2和Smad3蛋白的病毒表达系统,转染Sf9昆虫细胞,表达目的蛋白... 目的构建适于高通量筛选的激活素受体样激酶4(ALK4),ALK5和ALK7抑制剂的筛选模型。方法利用Bac to Bac昆虫杆状病毒表达系统,构建ALK4激酶结构域(ALK4kd),ALK5kd和ALK7kd及Smad2和Smad3蛋白的病毒表达系统,转染Sf9昆虫细胞,表达目的蛋白;通过谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和柱纯化,获得纯化的目的蛋白;分别以纯化的ALK4,ALK5,ALK7激酶片段与纯化的Smad3和ATP构建ALK4,ALK5,ALK7激酶活性测定体系,优化各反应底物浓度及反应条件,建立适于通量化分析的筛选模型;以已知ALK激酶抑制剂SB431542为工具分子,检测其对激酶的抑制活性,确证筛选模型的可靠性。结果经酶切和PCR鉴定,所得重组Bacmid均正确。转染Sf9昆虫细胞后纯化获得相应目的蛋白。经条件优化,反应体系中激酶和底物蛋白Smad3最佳浓度均为10 mg·L^(-1),ATP最佳初始浓度为10 nmol·L^(-1)。所得ALK4,ALK5和ALK7激酶抑制剂筛选体系的Z′因子分别为0.71,0.51和0.74,符合高通量筛选要求。已知SB431542在所建模型上对ALK4kd,ALK5kd和ALK7kd的抑制活性IC50值分别为22,188和91 nmol·L^(-1)。结论成功构建了ALK4,ALK5和ALK7激酶抑制剂的体外筛选模型。 展开更多
关键词 激活素受体样激酶 BAC to Bac昆虫杆状病毒表达系统 高通量筛选分析 SMAD3蛋白
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基孔肯雅病毒样颗粒的制备
19
作者 李会 徐靖雯 +2 位作者 丁开云 邹萌 刘红旗 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2021年第3期42-48,共7页
为制备高纯度、均一的基孔肯雅病毒的病毒样颗粒,将基孔肯雅病毒的结构蛋白基因序列(C-E3-E2-6K-E1)人工合成后克隆至杆状病毒-昆虫细胞表达载体中;重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组杆状病毒杆粒;重组杆... 为制备高纯度、均一的基孔肯雅病毒的病毒样颗粒,将基孔肯雅病毒的结构蛋白基因序列(C-E3-E2-6K-E1)人工合成后克隆至杆状病毒-昆虫细胞表达载体中;重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组杆状病毒杆粒;重组杆状病毒杆粒转染ExpiSf9昆虫细胞,包装获得重组杆状病毒,并再次感染ExpiSf9昆虫细胞表达基孔肯雅结构蛋白;通过细胞超薄切片验证杆状病毒的产生,并用流式细胞仪测定病毒滴度;免疫荧光、蛋白免疫印迹分析目的蛋白的表达,透射电镜鉴定病毒样颗粒的形成;最后,通过蔗糖密度梯度离心纯化病毒样颗粒。结果表明:成功构建了含基孔肯雅病毒结构蛋白的重组杆状病毒杆粒,获得了高滴度的重组杆状病毒,重组杆状病毒表达了基孔肯雅病毒的结构蛋白,结构蛋白自组装成60~70 nm的颗粒。这一研究通过昆虫杆状病毒表达系统成功制备了纯度高和均一性好的基孔肯雅病毒样颗粒,为基孔肯雅病毒的诊断试剂和疫苗研发奠定了基础。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 病毒样颗粒 昆虫杆状病毒表达系统 疫苗
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HCV结构蛋白在昆虫细胞中的表达及病毒样颗粒的形成
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作者 赵玮 廖国阳 +3 位作者 蒋燕军 孙明波 张新文 姜述德 《重庆医学》 CAS CSCD 2003年第10期1348-1350,共3页
目的 在昆虫细胞中同时表达HCV的核心蛋白C和包膜蛋白 (E1、E2 )以形成病毒样颗粒 (VLP)。方法 利用PCR技术得到HCV的核心蛋白和包膜蛋白基因 ,用基因重组技术分别构建表达HCVC、E1和E2蛋白的重组杆状病毒 ,用SDS PAGE电泳分析HCV结... 目的 在昆虫细胞中同时表达HCV的核心蛋白C和包膜蛋白 (E1、E2 )以形成病毒样颗粒 (VLP)。方法 利用PCR技术得到HCV的核心蛋白和包膜蛋白基因 ,用基因重组技术分别构建表达HCVC、E1和E2蛋白的重组杆状病毒 ,用SDS PAGE电泳分析HCV结构蛋白在昆虫细胞中的表达。电镜观察昆虫细胞内VLP的形成。结果 得到了能表达HCVC蛋白和同时表达E1、E2蛋白的重组杆状病毒reBV/C和reBV/E1、E2。reBV/C和reBV/E1、E2共感染的昆虫细胞同时表达了C、E1和E2蛋白 ,分子量分别为 2 0kD ,35kD和 6 6kD。电镜观察到表达HCV结构蛋白的昆虫细胞质中存在大量的直径为 4 0~ 6 0nm的VLP ,对照细胞无此结构。结论 在昆虫细胞中表达的HCVC。 展开更多
关键词 HCV核心蛋白 HCV包膜蛋白 病毒样颗粒 杆状病毒-昆虫细胞表达系统
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