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鸽新城疫病毒可视化LAMP检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 唐艳荣 张小梅 +3 位作者 郭建立 曹院章 张海云 李壹 《中国家禽》 北大核心 2024年第3期120-124,共5页
为建立一种简便、快速,适用于基层检测鸽Ⅰ型副黏病毒的方法,研究针对鸽Ⅰ型副黏病毒全基因组保守序列,设计了1组可检测基因Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅩ、ⅩⅪ型分离株的环介导等温扩增(LAMP)引物,通过优化反应条件及体系,建立鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAM... 为建立一种简便、快速,适用于基层检测鸽Ⅰ型副黏病毒的方法,研究针对鸽Ⅰ型副黏病毒全基因组保守序列,设计了1组可检测基因Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅩ、ⅩⅪ型分离株的环介导等温扩增(LAMP)引物,通过优化反应条件及体系,建立鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAMP检测方法。结果显示:建立的鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAMP检测方法可检测基因Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅩ、ⅩⅪ型鸽新城疫病毒,与H9亚型禽流感病毒、马立克病病毒、禽网状内皮组织增殖病病毒、小鹅瘟病毒以及禽白血病病毒以及新城疫病毒La Sota疫苗株均无交叉反应,最低检测限为10^(1)copies/μL。研究表明所建立的鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAMP检测方法快速、简便,特异性强,灵敏度高,可应用于基层快速检测鸽Ⅰ型副黏病毒。 展开更多
关键词 鸽新城疫 lamp 可视化 检测
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鸡圆圈病毒3型可视化LAMP检测方法的建立及应用
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作者 张民秀 谢芝勋 +6 位作者 张艳芳 谢志勤 谢丽基 李孟 罗思思 曾婷婷 王粲 《河南农业科学》 北大核心 2024年第4期128-136,共9页
建立鸡圆圈病毒3型(GyV3)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为临床上快速检测鸡GyV3提供一种诊断方法。参考GyV3的VP3基因序列,设计1套LAMP特异性引物,分别通过温度优化、引物浓度优化和反应时间的优化,确定鸡GyV3可视化LAMP诊断方... 建立鸡圆圈病毒3型(GyV3)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为临床上快速检测鸡GyV3提供一种诊断方法。参考GyV3的VP3基因序列,设计1套LAMP特异性引物,分别通过温度优化、引物浓度优化和反应时间的优化,确定鸡GyV3可视化LAMP诊断方法的扩增温度、引物浓度和反应时间,通过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测,验证鸡GyV3可视化LAMP诊断方法的特异性、敏感性、稳定性和可靠性。结果显示,鸡GyV3 LAMP检测方法的反应体系:总体积为20.0μL,包括DNA模板1.0μL,2×Master Mix 10.0μL,内引物GyV3-FIP和GyV3-BIP混合液(工作浓度16.0μmol/L)2.0μL,外引物GyV3-F3和GyV3-B3混合液(工作浓度2.0μmol/L)2.0μL,环引物GyV3-LF和GyV3-LB混合液(工作浓度8.0μmol/L)2.0μL,ddH_(2)O 3μL;鸡GyV3 LAMP检测方法的扩增程序:66℃反应20 min,80℃灭活5 min。鸡GyV3可视化LAMP检测方法能特异性检测GyV3,最低检测浓度为10^(1)拷贝/μL,组内和组间变异系数小于5%;与常规PCR方法检测临床样品的结果比较,两者结果符合率达100%。建立的鸡GyV3可视化LAMP检测方法能特异性检测GyV3,具有特异性好、敏感性高及污染小等优点,且检测结果可通过肉眼观察进行判断,适用于GyV3的临床快速筛查。 展开更多
关键词 鸡圆圈病毒3型(GyV3) 可视化lamp 特异性引物 诊断方法 敏感性
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虾类十足目虹彩病毒1(DIV1)LAMP-HNB快检方法的建立
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作者 王雯琼 葛明峰 +4 位作者 卢先东 刘艳红 斯烈钢 申屠基康 徐胜威 《安徽农业科学》 CAS 2024年第15期192-196,共5页
[目的]建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法,实现基层养殖户自检。[方法]针对十足目虹彩病毒1(DIV1),设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化,建立LAMP与羟基萘酚蓝(HNB)结合... [目的]建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法,实现基层养殖户自检。[方法]针对十足目虹彩病毒1(DIV1),设计环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化,建立LAMP与羟基萘酚蓝(HNB)结合的LAMP-HNB可视化快速检测方法。[结果]在LAMP反应体系中添加12 mmol/L Mg^(2+)和250μmol/L HNB,65℃恒温条件下反应60 min最佳;DIV1病原质粒最低检出限为102 copies/μL,稳定性和特异性较好,通过带有靶标基因的阳性质粒进行16次重复性试验结果均较为稳定,多种模板扩增试验均未发生假阳性情况,符合试验要求。[结论]该研究建立的LAMP-HNB可视化快速检测方法,适用于上述对虾DIV1的现场快速检测。 展开更多
关键词 南美白对虾 lamp HNB 十足目虹彩病毒1 快速检测
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Security and Privacy in Solar Insecticidal Lamps Internet of Things:Requirements and Challenges
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作者 Qingsong Zhao Lei Shu +3 位作者 Kailiang Li Mohamed Amine Ferrag Ximeng Liu Yanbin Li 《IEEE/CAA Journal of Automatica Sinica》 SCIE EI CSCD 2024年第1期58-73,共16页
Solar insecticidal lamps(SIL) can effectively control pests and reduce the use of pesticides. Combining SIL and Internet of Things(IoT) has formed a new type of agricultural IoT,known as SIL-IoT, which can improve the... Solar insecticidal lamps(SIL) can effectively control pests and reduce the use of pesticides. Combining SIL and Internet of Things(IoT) has formed a new type of agricultural IoT,known as SIL-IoT, which can improve the effectiveness of migratory phototropic pest control. However, since the SIL is connected to the Internet, it is vulnerable to various security issues.These issues can lead to serious consequences, such as tampering with the parameters of SIL, illegally starting and stopping SIL,etc. In this paper, we describe the overall security requirements of SIL-IoT and present an extensive survey of security and privacy solutions for SIL-IoT. We investigate the background and logical architecture of SIL-IoT, discuss SIL-IoT security scenarios, and analyze potential attacks. Starting from the security requirements of SIL-IoT we divide them into six categories, namely privacy, authentication, confidentiality, access control, availability,and integrity. Next, we describe the SIL-IoT privacy and security solutions, as well as the blockchain-based solutions. Based on the current survey, we finally discuss the challenges and future research directions of SIL-IoT. 展开更多
关键词 CHALLENGES Internet of Things(IoT) privacy and security security requirements solar insecticidal lamps(SIL)
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Observation of therapeutic effect of lamp irradiation combined with purple gromwell oil gauze on alleviating intestinal colic in patients
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作者 Bi-Zhi Cen Yin-Song Chen +2 位作者 Li-Ping Li Jing-Wen Wu Yan-Fen Xie 《World Journal of Gastrointestinal Surgery》 SCIE 2024年第6期1749-1755,共7页
BACKGROUND Intestinal colic is a common complication in patients who have undergone radical surgery for colorectal cancer.Traditional Chinese medicine has advantages,including safety and stability,for the treatment of... BACKGROUND Intestinal colic is a common complication in patients who have undergone radical surgery for colorectal cancer.Traditional Chinese medicine has advantages,including safety and stability,for the treatment of intestinal colic.Lamp irra-diation for abdominal ironing has been applied in the treatment of many gas-trointestinal diseases.Purple gromwell oil has the effects of clearing heat,cooling blood,reducing swelling,and relieving pain.RESULTS The general effective rate in the observation group was 95.00%,which was significantly higher than that in the control group(86.67%,P<0.05).Before treatment,there was no significant difference in the duration of symptoms between the groups(P>0.05).After 1,2,3,and 4 d of treatment,the duration of symptoms in both groups were decreased,and the duration in the observation group was significantly lower than that in the control group(96.54±9.57 vs 110.45±11.23,87.26±12.07 vs 104.44±11.68,80.45±16.21 vs 99.44±14.95,73.18±15.58 vs 92.17±14.20;P<0.05).After 1,3,5,and 7 d of treatment,the NRS scores in both groups were decreased,and the NRS scores in the observation group were significantly lower than those in the control group(3.56±0.41 vs 4.04±0.58,3.07±0.67 vs 3.74±1.02,2.52±0.76 vs 3.43±0.85,2.03±0.58 vs 3.03±0.82;P<0.05).There was no significant difference in the rate of adverse reaction occurrence between the groups(P>0.05).CONCLUSION The use of lamp irradiation combined with purple gromwell oil gauze in patients with intestinal colic after radical surgery for colorectal cancer can reduce symptom duration,alleviate intestinal colic,and improve treatment efficacy,and this approach is safe.It is worth promoting the use of this treatment in clinical practice. 展开更多
关键词 lamp irradiation Purple gromwell oil gauze Intestinal colic Radical surgery for colorectal cancer Therapeutic effect
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基于CP基因的云南烟草花叶病毒RT-LAMP快速检测体系的构建
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作者 赵正婷 盖晓彤 +3 位作者 张俊蕾 卢灿华 姜宁 刘雅婷 《山东农业科学》 北大核心 2024年第5期154-162,共9页
为快速检测云南烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),本研究根据来自云南烟草TMV分离物的外壳蛋白(CP)基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对反应的温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度及内、外引... 为快速检测云南烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),本研究根据来自云南烟草TMV分离物的外壳蛋白(CP)基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对反应的温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度及内、外引物浓度比等进行逐一优化,建立了云南烟草TMV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系。结果表明,最佳引物组为第4组,最适反应温度为60℃,甜菜碱、dNTPs、Mg^(2+)的最佳反应浓度分别为0.6、0.4、2.0 mmol/L,最佳内、外引物浓度比为4∶1,最佳反应时间40 min。优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可肉眼判断结果,特异性高,灵敏度是常规RT-PCR的10倍。RT-LAMP检测体系的建立为云南烟草TMV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 CP基因 RT-lamp 特异性 灵敏度
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南洋臀纹粉蚧生物学特性及LAMP检测
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作者 黄鹏 张杰 +2 位作者 姚锦爱 蓝炎阳 余德亿 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1052-1062,共11页
【目的】明确南洋臀纹粉蚧Planococcus lilacinus生物学特性及实现对该虫的可视化检测。【方法】室内观察记录南洋臀纹粉蚧不同发育阶段的形态特征和历期及雌成虫的繁殖能力;以南洋臀纹粉蚧28S rDNA序列为靶标,设计其特异性的环介导等... 【目的】明确南洋臀纹粉蚧Planococcus lilacinus生物学特性及实现对该虫的可视化检测。【方法】室内观察记录南洋臀纹粉蚧不同发育阶段的形态特征和历期及雌成虫的繁殖能力;以南洋臀纹粉蚧28S rDNA序列为靶标,设计其特异性的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物组用于建立相应的可视化检测方法,并进行特异性、灵敏度及稳定性验证。【结果】南洋臀纹粉蚧雌雄虫具有不同的世代生活史,卵初产时即可见虫体轮廓,并具1对暗红色单眼;1龄若虫行动活泼,雌雄难辨;2龄若虫体缘出现白色细蜡棒,雌雄体型出现分化;3龄若虫仅存在雌虫,形似雌成虫;蛹仅存在雄虫,分为预蛹期和蛹期;雌成虫体表覆盖厚实的白色蜡粉,体缘18对粗蜡棒突出明显;雄成虫有一对透明发达的前翅,腹部末端具1对白色长蜡丝。该虫卵历期(1.37±0.26)h,雌成虫历期(32.67±4.82)d,各龄若虫、蛹和雄成虫历期均不超过(7.65±0.82)d;两性生殖的单雌产卵量和卵孵化率分别为(531.92±69.98)粒和96.02%±1.35%,孤雌生殖的单雌产卵量和卵孵化率分别为(403.50±71.11)粒和88.41%±3.03%。建立的LAMP可视化检测方法能有效扩增南洋臀纹粉蚧DNA,最佳反应温度和时间及最低检测浓度分别为66℃、55 min和100 fg/μL,反应产物呈绿色阳性,检出率达91.67%~100.00%,但无法扩增其他7种近缘种属粉蚧DNA,反应产物呈橙黄色阴性。【结论】南洋臀纹粉蚧雌雄二型,生长发育快,繁殖力强,急需作好其检测与监测工作;该虫的LAMP可视化检测方法便捷高效、特异性强、灵敏度高且稳定性好,有望用于非专业鉴定人员对该虫的现场快速、准确识别。 展开更多
关键词 南洋臀纹粉蚧 形态特征 发育繁殖 lamp 可视化检测
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智慧校园视域下基于LAMP的在线考试系统敏捷设计与实现
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作者 余久久 张继山 +4 位作者 吴宁 胡雪 解雪杨 刘丽 张错玲 《西昌学院学报(自然科学版)》 2023年第4期48-54,共7页
智慧校园是高校信息化建设发展的趋势。为了更好地提供高校教师出(组)卷管理、学生在线考试与试卷提交等功能,从当前主流智慧校园所具备的功能体系视角,依托本地试点A高校智慧校园微服务与微应用技术架构,采用软件敏捷开发模型Scrum,快... 智慧校园是高校信息化建设发展的趋势。为了更好地提供高校教师出(组)卷管理、学生在线考试与试卷提交等功能,从当前主流智慧校园所具备的功能体系视角,依托本地试点A高校智慧校园微服务与微应用技术架构,采用软件敏捷开发模型Scrum,快速设计并实现出一个基于LAMP(Linux+Apache+MySQL+PHP)的在线考试系统。该系统服务器端共享A高校校园应用数据中心,客户端采用PHP工具开发,系统性能稳定,操作便捷。最后提出了后续研究工作:为该考试系统建立统一的校园微信公众号以增强用户体验;构建基于云计算的移动互联“办事大厅”以提升消息响应速度。 展开更多
关键词 智慧校园 敏捷开发模型Scrum 在线考试系统 lamp 微服务与微应用
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基于原位LAMP技术的牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)易感宿主调查 被引量:3
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作者 张翔 谷莉 +5 位作者 郑玉东 李晨 白昌明 辛鲁生 王崇明 刘金兰 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2023年第2期174-185,共12页
牡蛎疱疹病毒(Ostreidherpesvirus1,Os HV-1)给世界双壳贝类养殖业造成了严重的经济损失。10余种双壳贝类陆续被认定为易感宿主,仍有其他几种贝类仅有PCR核酸阳性数据,因确诊证据不足导致其易感性未得到充分评估。原位环介导等温核酸扩... 牡蛎疱疹病毒(Ostreidherpesvirus1,Os HV-1)给世界双壳贝类养殖业造成了严重的经济损失。10余种双壳贝类陆续被认定为易感宿主,仍有其他几种贝类仅有PCR核酸阳性数据,因确诊证据不足导致其易感性未得到充分评估。原位环介导等温核酸扩增(LAMP)检测技术相对传统原位杂交技术具有灵敏度高、方便快捷、可作为病原微生物感染证据的优点。为了在Os HV-1流行病学调查过程中实现病毒感染的快速检测和确诊,根据已报道的Os HV-1特异性LAMP检测引物,设计内引物,优化反应条件,建立了Os HV-1的原位LAMP检测方法。基于该方法对2019年以来采集的长牡蛎(Crassostreagigas)、福建牡蛎(Crassostrea angulata)、栉孔扇贝(Chlamysfarreri)、虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)、毛蚶(Scapharca subcrenata)和菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)样本进行检测。结果显示,毛蚶样本的Os HV-1原位LAMP检测结果呈阳性;其他几种贝类部分样本的实时定量PCR (qPCR)检测呈阳性,但原位LAMP检测呈阴性。对毛蚶样本的原位LAMP检测结果分析发现,病毒杂交信号主要分布在外套膜和肝胰腺等器官的结缔组织,推测感染的细胞为成纤维细胞和血淋巴细胞;在闭壳肌和斧足肌肉组织的肌细胞细胞核中也发现较多杂交信号。鳃丝内和周边偶现阳性信号,推测来自渗出的血淋巴细胞。基于原位LAMP技术的Os HV-1检测结果显示,毛蚶是Os HV-1的一种易感宿主,毛蚶结缔组织、肌肉组织和血淋巴细胞对该病毒有强亲嗜性。 展开更多
关键词 牡蛎疱疹病毒 原位lamp 易感性 流行病学调查
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二重荧光RT-LAMP鉴别检测禽呼肠孤病毒和鸡滑液囊支原体
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作者 曾婷婷 谢芝勋 +9 位作者 谢丽基 王盛 谢志勤 黄娇玲 万丽军 任红玉 张艳芳 张民秀 范晴 邓显文 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第9期66-75,共10页
本研究旨在建立一套通过添加荧光探针FD,反应后可使用成像仪直接观测结果的鉴别检测禽呼肠孤病毒(ARV)和鸡滑液囊支原体(MS)的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据ARV和MS的保守基因片段,设计了2套LAMP引物,并各添加1条FD荧光探针,2条FD探针... 本研究旨在建立一套通过添加荧光探针FD,反应后可使用成像仪直接观测结果的鉴别检测禽呼肠孤病毒(ARV)和鸡滑液囊支原体(MS)的二重荧光RT-LAMP检测方法。根据ARV和MS的保守基因片段,设计了2套LAMP引物,并各添加1条FD荧光探针,2条FD探针分别标记CY5和6-FAM荧光基团。结果:ARV阳性对照在成像仪下发出红色荧光,MS阳性对照发出绿色荧光,双重模板经过图像融合后为黄色荧光;特异性结果显示,该二重荧光RT-LAMP检测方法仅能扩增ARV和MS两种病原,对其他常见病原如鸡毒支原体(MG)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)等无扩增反应;敏感性结果显示,该二重荧光RT-LAMP检测方法对ARV和MS的最低检测量分别为1.7×10^(2)copies和1.9×10^(2)copies;使用该方法检测40份临床样品,检出率与本实验室前期建立的二重荧光RT-PCR检测结果相同。综上,该二重荧光RT-LAMP检测方法可特异、敏感地鉴别检测ARV和MS,通过添加FD荧光探针和成像仪观测结果,为不同条件的实验室提供了新的检测手段。 展开更多
关键词 FD荧光探针 二重荧光RT-lamp 禽呼肠孤病毒 鸡滑液囊支原体
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奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌PCR和LAMP检测方法的建立 被引量:1
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作者 罗阳 田唯嘉 +6 位作者 何芳 浣成 刘伯承 张佰忠 宋武 杨青 易康乐 《河南农业科学》 北大核心 2023年第2期145-150,共6页
为快速鉴定因肺炎克雷伯菌侵染引起的奶牛乳房炎,进一步为该疾病提供更合理的治疗方案,分别以肺炎克雷伯菌16S-23S rDNA内部转录间隔层序列(Internal transcribed spacer,ITS)和脲酶UreD基因为靶点,利用PCR技术和环介导等温扩增技术(Loo... 为快速鉴定因肺炎克雷伯菌侵染引起的奶牛乳房炎,进一步为该疾病提供更合理的治疗方案,分别以肺炎克雷伯菌16S-23S rDNA内部转录间隔层序列(Internal transcribed spacer,ITS)和脲酶UreD基因为靶点,利用PCR技术和环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)构建奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌快速鉴定方法。结果表明,利用PCR技术扩增ITS序列能准确鉴定出肺炎克雷伯菌,在核酸质量浓度为5×10^(-2)ng/μL的环境中依然能实现稳定扩增;利用LAMP技术扩增UreD基因的最佳反应温度为62℃,其最低检测核酸质量浓度为5×10^(-7)ng/μL,检测灵敏度是PCR方法的105倍。综上,建立了PCR技术和LAMP技术快速鉴定奶牛乳房炎型肺炎克雷伯菌的方法,特异性强且灵敏度高。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 肺炎克雷伯菌 UreD基因 PCR lamp
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牛溶血性曼氏杆菌可视化LAMP检测方法的建立 被引量:1
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作者 刘宁宁 易萍 +2 位作者 郭爱珍 胡长敏 陈颖钰 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期32-37,共6页
为建立一种能够快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的可视化LAMP检测法,利用LAMP引物设计软件,以溶血性曼氏杆菌保守基因lktC序列设计内引物、外引物及环引物,对其反应温度、Mg^(2+)浓度、dNTPs浓度等条件进行优化... 为建立一种能够快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的可视化LAMP检测法,利用LAMP引物设计软件,以溶血性曼氏杆菌保守基因lktC序列设计内引物、外引物及环引物,对其反应温度、Mg^(2+)浓度、dNTPs浓度等条件进行优化,并检测了方法的敏感性、特异性及实用性。结果显示,该方法在68.2℃、6 mmol/L Mg^(2+)、1.6 mmol/L dNTPs条件下达到最佳,40 min内完成检测并可通过肉眼判定结果,对细菌的最低检测限为6.7×10^(-1)cfu/μL,对lktC重组质粒的最低检测限为7.9×10^(2)copies/μL,敏感性高;与15种病原均不发生交叉反应,特异性好;对背景清晰小鼠肺组织样本检测结果显示该方法实用性良好,且优于普通PCR方法。表明该方法可快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌。 展开更多
关键词 环介导等温扩增(lamp) lktC基因 溶血性曼氏杆菌 可视化检测 综合防控
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新疆外来入侵杂草豚草属LAMP快速检测技术的建立
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作者 于海鑫 付开赟 +4 位作者 丁新华 贾尊尊 吐尔逊·阿合买提 王兰 郭文超 《生物安全学报》 CSCD 北大核心 2023年第3期277-281,共5页
【目的】开发外来入侵生物三裂叶豚草和豚草不同生育期、不同部位的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以达到田间快速、准确和高效识别的目的。【方法】以SYBR Green Ⅰ为指示剂,分别针对三裂叶豚草和... 【目的】开发外来入侵生物三裂叶豚草和豚草不同生育期、不同部位的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以达到田间快速、准确和高效识别的目的。【方法】以SYBR Green Ⅰ为指示剂,分别针对三裂叶豚草和豚草不同发育阶段(幼苗期、生长期、种子期)开展LAMP技术开发。【结果】特异性验证结果显示,所检测杂草的LAMP产物均呈阳性(产生白色沉淀),而与其对照的其他2种杂草的LAMP产物均为阴性(无白色沉淀)。灵敏度检测结果显示,该体系的DNA最低检测限为10^(-10) ng·μL-1,比常规聚合酶链式反应灵敏度高。【结论】本研究建立的LAMP检测体系能有效应用于三裂叶豚草和豚草样本的快速检测,为其快速、高效识别提供技术支撑。 展开更多
关键词 三裂叶豚草 豚草 环介导等温扩增(lamp) 快速检测技术
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辣椒番茄斑萎病毒(TSWV)分子鉴定及环介导等温扩增(LAMP)检测技术 被引量:2
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作者 韦建明 黄鑫 +3 位作者 耿坤 李文彪 冯文卓 李云洲 《中国蔬菜》 北大核心 2023年第8期69-78,共10页
为明确侵染贵州辣椒的番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)株系,并建立TSWV环介导等温扩增(LAMP)等快速检测技术,从贵州省辣椒主产区采集疑似感染TSWV的辣椒样本12份和西花蓟马样本10份,并应用RT-PCR、LAMP检测技术,以及基于T... 为明确侵染贵州辣椒的番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)株系,并建立TSWV环介导等温扩增(LAMP)等快速检测技术,从贵州省辣椒主产区采集疑似感染TSWV的辣椒样本12份和西花蓟马样本10份,并应用RT-PCR、LAMP检测技术,以及基于TSWV-N基因系统发育树构建进行研究。通过分子诊断和测序结果分析,确认疑似感染辣椒样本被TSWV侵染。此外,贵州息烽地区辣椒TSWV病毒病原分离物与贵州番茄TSWV-N分离物相似度最高,为99%。基于这些发现,成功建立了针对辣椒作物和传播媒介西花蓟马的TSWV快速检测系统,为贵州辣椒病毒病害的监测和防控提供有力支持。 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒 西花蓟马 lamp检测 分子诊断
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猪流行性腹泻病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立与初步应用 被引量:2
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作者 李林岳 李任峰 +6 位作者 袁嘉康 秦保亮 庞俊增 蔡琳琳 赵晓会 范国英 王自良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期814-821,828,共9页
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)可视化反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究根据PEDV ORF1a/b基因的保守序列,设计了8组特异性引物,以PEDC cDNA为模板,采用试剂盒推荐的各反应条件经LAMP扩增,根据LAMP反应产物琼脂糖凝胶电泳... 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)可视化反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,本研究根据PEDV ORF1a/b基因的保守序列,设计了8组特异性引物,以PEDC cDNA为模板,采用试剂盒推荐的各反应条件经LAMP扩增,根据LAMP反应产物琼脂糖凝胶电泳结果筛选最佳引物组。以筛选的外引物PE2 F3/B3经PCR从PEDV cDNA中扩增ORF1a/b基因,构建重组质粒pPE-ORF1-2并分别经PCR和测序鉴定。结果显示,2号引物组(内引物PE2 FIP/PE2 BIP,外引物PE2 F3/PE2 B3)为最佳引物。PCR和测序鉴定结果表明重组质粒正确构建,经计算其浓度为1.56×1011拷贝/μL,将其稀释1000倍后作为质粒标准品。为建立检测PEDV的RT-LAMP方法,本研究对该方法的反应时间、反应温度、Mg2+浓度、内、外引物及dNTP浓度进行了优化,结果显示,RT-LAMP反应体系为:60℃反应50 min,Mg2+浓度80 mmol/L,内外引物终浓度分别为32μmol/L和5μmol/L,dNTP浓度10 mmol/L;通过在上述体系中加入甲酚红指示剂,初步建立了可视化RT-LAMP检测方法。特异性试验结果显示,该方法仅能检出PEDV,与猪德尔塔冠状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪传染性胃肠炎病毒均无交叉反应,且阳性管体系颜色由紫红色变为黄色,阴性反应管体系颜色保持紫红色,特异性较强;将重组质粒标准品pPE-ORF1-210倍倍比稀释(1.65×100拷贝/μL~1.65×108拷贝/μL)后作为模板,采用本研究建立的可视化RT-LAMP方法进行敏感性试验,结果显示,该方法对pPE-ORF1-2检测限为10拷贝/μL,比以重组质粒pPE-M-GB为模板,以引物PEGBF/PEGBR的PEDV国标RT-PCR方法的敏感性高1个数量级,敏感性较高;重复性试验结果显示,该方法对不同浓度质粒标准品的批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%,重复性较好。对53份临床样品检测结果显示,RT-LAMP和RT-PCR对PEDV的检出率分别为32.1%(17/53)和28.3%(15/53)。二者的总符合率为96.2%(51/53)。本研究建立的PEDV RT-LAMP检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便、结果可视化等优点,为PEDV的现场快速检测提供了新的技术支持。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 RT-lamp 快速检测 可视化
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LAMP方法鉴定玫瑰冠基因型研究 被引量:1
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作者 贡继尚 占雅婷 +4 位作者 崔芳芳 吴有平 黄艳明 刘杰 许继国 《中国家禽》 北大核心 2023年第4期8-13,共6页
为了建立快捷的玫瑰冠等位基因分型方法,试验基于LAMP技术,设计特异性引物,在结合浊度法与金属离子指示剂法等方法下,对玫瑰冠等位基因分型进行可行性研究。结果显示:三组引物中,Rose1-1无特异性,Rose4-1和Rose4-2具有一定的特异性,其中... 为了建立快捷的玫瑰冠等位基因分型方法,试验基于LAMP技术,设计特异性引物,在结合浊度法与金属离子指示剂法等方法下,对玫瑰冠等位基因分型进行可行性研究。结果显示:三组引物中,Rose1-1无特异性,Rose4-1和Rose4-2具有一定的特异性,其中Rose4-1在利用HNB作为染料,不添加环引物时的体系组合,可以在24个已知基因型的个体中准确筛选出纯合子与杂合子个体。结果表明,通过LAMP技术进行玫瑰冠个体基因分型具有可行性,同时也为优化其他性状的分子标记辅助选择提供了有益参考。 展开更多
关键词 玫瑰冠 基因分型 lamp 丝羽乌骨鸡
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葡萄卷叶伴随病毒-3 RT-LAMP检测体系的建立与应用 被引量:1
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作者 张强强 王雯雯 +3 位作者 闫思远 李玲 王若彤 顾沛雯 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2166-2174,共9页
为实现葡萄生产中对葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)的快速检测。本研究以GLRaV-3的CP基因序列(GenBank登录号:KC477128.1)为靶序列设计并合成了3对逆转录环介导恒温扩增技术(RTLAMP)引物,建立并优化GLRaV-3的RT-LAMP检测方法。结果表明,... 为实现葡萄生产中对葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)的快速检测。本研究以GLRaV-3的CP基因序列(GenBank登录号:KC477128.1)为靶序列设计并合成了3对逆转录环介导恒温扩增技术(RTLAMP)引物,建立并优化GLRaV-3的RT-LAMP检测方法。结果表明,该方法能够实现在恒温64℃下反应1 h完成对GLRaV-3的检测,引物GLRaV3-LAMP-Ⅰ特异性高,不与GLRaV-1~2、葡萄扇叶病毒、沙地葡萄茎痘相关病毒、葡萄病毒A、灰皮诺葡萄病毒和葡萄浆果内坏死病毒等7种葡萄常见病毒发生交叉反应;RNA最低检测限为10 pg·μL^(-1),灵敏度是逆转录PCR(RT-PCR)的10倍。田间样品检测验证结果表明,该方法与常规RT-PCR法检测一致率为100%。综上,本研究建立的GLRaV-3 RT-LAMP检测体系具有高特异性、高灵敏度和实用性强等特点,可应用于田间葡萄卷叶病样的检测。 展开更多
关键词 葡萄卷叶伴随病毒3 RT-lamp 引物筛选 反应条件优化 田间检测
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小体积水样中鼠伤寒沙门菌氨基磁珠富集的LAMP可视化检测方法 被引量:1
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作者 石雪梅 蒲荣春 +2 位作者 郑江梅子 刘恋 阮佳 《净水技术》 CAS 2023年第3期189-197,共9页
研究建立了小体积(1 mL)水样中鼠伤寒沙门菌氨基磁珠富集-环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法。研究对氨基磁珠富集水中鼠伤寒沙门菌的pH和时间进行优化,考察了氨基磁珠富集-LAMP可视化检测方法的特异性、抗干扰能力和灵敏度,并用所建... 研究建立了小体积(1 mL)水样中鼠伤寒沙门菌氨基磁珠富集-环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法。研究对氨基磁珠富集水中鼠伤寒沙门菌的pH和时间进行优化,考察了氨基磁珠富集-LAMP可视化检测方法的特异性、抗干扰能力和灵敏度,并用所建立的方法对人工模拟水样和实际水样进行检测。在pH值=7.0的条件下,氨基磁珠与水样作用60 min,氨基磁珠对水中的鼠伤寒沙门菌的捕获效率接近100%。氨基磁珠富集-LAMP扩增体系特异性好,抗干扰能力强,对水中鼠伤寒沙门菌的检测灵敏度为2.39 CFU/mL,阳性结果可直接观察到反应管由橙黄色变成草绿色,而阴性体系不变色。将所建立的方法用于人工模拟水样,检测结果均为阳性,对成都市新都区河流或景观湖等水样检测,共检出1份鼠伤寒沙门菌阳性水样。本研究建立的氨基磁珠富集-LAMP方法能够实现小体积水样中鼠伤寒沙门菌高效、准确的可视化检测。 展开更多
关键词 水环境 鼠伤寒沙门菌 富集 氨基磁珠 环介导等温扩增(lamp)
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黄芪根腐病尖孢镰刀菌LAMP可视化快速检测方法的建立 被引量:1
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作者 梁伊菲 王春伟 《山西农业科学》 2023年第4期420-426,共7页
由于黄芪的轮作周期缩短、连作面积连续增加,导致黄芪根腐病的发病率大大增加。目前,黄芪根腐病成为限制黄芪产量的主要因素之一,严重制约着黄芪产业的持续发展。虽然多种镰刀菌在整个种植季均可侵染黄芪,但尖孢镰刀菌(Fusarium oxyspor... 由于黄芪的轮作周期缩短、连作面积连续增加,导致黄芪根腐病的发病率大大增加。目前,黄芪根腐病成为限制黄芪产量的主要因素之一,严重制约着黄芪产业的持续发展。虽然多种镰刀菌在整个种植季均可侵染黄芪,但尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)是造成黄芪根部腐烂最主要的病原菌之一。镰刀菌在不同的培养基上形态不同,由多种镰刀菌引起的黄芪根腐症状通常很难根据其形态学的特征加以区分,需要通过一些基因测序手段。翻译延伸因子(TEF-1alpha)已被广泛应用于研究镰刀菌属的种内和种间变异和系统发育。因此,可以针对TEF-1alpha区域为靶点设计LAMP引物。为了给尖孢镰刀菌的野外和现场快速检测提供新思路,为黄芪根腐病病害的田间快速诊断提供一个简便快速的新技术,研究针对尖孢镰刀菌翻译延伸因子(TEF-1alpha)序列设计引物,优化环介导等温扩增(LAMP)反应时间和温度,测试LAMP反应的灵敏性和特异性,构建黄芪根腐病尖孢镰刀菌的LAMP快速检测方法。结果表明,反应最适温度为62℃,最适时间为30 min;在最佳反应条件下,黄芪根腐病尖孢镰刀菌的LAMP快速检测方法对尖孢镰刀菌具有良好的特异性,灵敏度可达到10 pg/μL;在反应开始前加入SYBR Green I显色剂,可在反应结束后观察检测结果。 展开更多
关键词 环介导等温扩增(lamp) 尖孢镰刀菌 黄芪 根腐病 可视化 快速检测
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辣椒轻斑驳病毒RT-LAMP快速检测方法的建立
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作者 邵煜尊 张万红 +6 位作者 王惠 王玉洁 苗圃 申莉莉 李莹 焦裕冰 杨金广 《中国蔬菜》 北大核心 2023年第12期42-48,共7页
辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMo V)是发生在辣椒上的一种重要病毒病。通过逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),以PMMo V外壳蛋白CP序列为靶标基因,设计F3/B3、FIP/BIP 4条引物,构建了基于RT-LAMP技术的PMMo V快速检测方... 辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMo V)是发生在辣椒上的一种重要病毒病。通过逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),以PMMo V外壳蛋白CP序列为靶标基因,设计F3/B3、FIP/BIP 4条引物,构建了基于RT-LAMP技术的PMMo V快速检测方法。结果表明,该方法在60 min内便可完成对PMMo V的特异性检测,灵敏度比传统RT-PCR技术高10倍,检测过程中与其他相关病毒无交叉反应。本试验建立的PMMo V RT-LAMP检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高,可用于田间生产中对PMMo V的快速检测。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 RT-lamp检测 快速检测
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