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特异腐质酶Humicola insolens Y1耐热型木聚糖酶基因的克隆及酶学性质分析
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作者 李雅楠 余利红 +2 位作者 李昀楷 马文康 张伟 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期121-128,共8页
利用简并PCR和TAIL-PCR从嗜热特异腐质霉Humicola insolens Y1中克隆得到一个新的耐热型木聚糖酶基因xynD。该基因全长1 104 bp,共编码367个氨基酸,不含有内含子,N端的22个氨基酸为信号肽。成熟蛋白在毕赤酵母中进行了重组表达,重组蛋... 利用简并PCR和TAIL-PCR从嗜热特异腐质霉Humicola insolens Y1中克隆得到一个新的耐热型木聚糖酶基因xynD。该基因全长1 104 bp,共编码367个氨基酸,不含有内含子,N端的22个氨基酸为信号肽。成熟蛋白在毕赤酵母中进行了重组表达,重组蛋白经超滤和离子交换柱纯化后达到电泳纯。对其酶学性质分析表明,XynD的最适pH为6.0,在pH 4.0~7.0可以保持80%以上的酶活性,在pH 5.0~10.0具有良好的pH稳定性。最适作用温度为70℃,在60℃条件下保持稳定。多数金属离子对XynD酶活力没有明显的影响。麦芽汁降解实验表明,XynD与商用β-葡聚糖共同作用可以提高麦芽的过滤速率(45.7%)并降低粘度(8.1%)。因此XynD在酿酒业,特别是啤酒制造业具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 Humicola insolens Y1 木聚糖酶 基因克隆与表达 酶学性质
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重组Humicola insolens角质酶的高密度发酵优化 被引量:2
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作者 黄燕 孙益荣 +1 位作者 吴敬 宿玲恰 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期63-70,共8页
在采用前期已构建的重组菌E. coli BL21(DE3)/pET20b(+)-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂... 在采用前期已构建的重组菌E. coli BL21(DE3)/pET20b(+)-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为9. 8U/mg(NPB水解比活力为1 047. 6 U/mg),在卵黄平板出现了明显的反应圈现象。在此基础上尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略,以进一步提高重组酶在3L罐中的表达水平。优化后的最佳条件及结果为:OD_(600)为75时,恒速流加0. 8g/(L·h)的乳糖溶液,发酵24h后,酶活达到最大值4 788. 0U/ml,约为摇瓶发酵酶活的28倍,与OD_(600)为50时、流加0. 2 g/(L·h)进行诱导的发酵策略(酶活2 233. 0 U/ml)相比,提高幅度约为114. 0%,发酵时间缩短40. 0%。 展开更多
关键词 Humicola insolens 角质酶 磷脂酶活性 高密度发酵
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Cloning and expression of endo-β-glucanase II gene in Humicola insolens H31-3
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作者 Huifang TAN Guoqing ZHANG +2 位作者 Guangyu ZHENG Fumian CUI Shijun QIAN 《Frontiers in Biology》 CSCD 2008年第3期287-292,共6页
Endo-β-glucanase II(EG II)gene cDNA was isolated from the fungus Humicola insolens H31-3 by RT-PCR.It was cloned into the expression vector pGAPZαA.The resultant recombinant plasmid was introduced into Pichia pastor... Endo-β-glucanase II(EG II)gene cDNA was isolated from the fungus Humicola insolens H31-3 by RT-PCR.It was cloned into the expression vector pGAPZαA.The resultant recombinant plasmid was introduced into Pichia pastoris GS115 by electroporation after being linearized by BspHI digestion.The recombinant Pichia pastoris strain was obtained and SDS-PAGE showed that the molecular weight of the expression protein was about 55 kD.The cultivation condition and the characteristics of the recombinant EG II were also explored. 展开更多
关键词 Humicola insolens Pichia pastoris endoglucanase II secretive expression
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