以jetPEI-RGD为载体的^(125)I-(α_v)ASODN投递对人肝癌细胞侵袭力的影响

目的:探讨以jetPEI-RGD为转染载体的125I-(αV)ASODN投递在体外对HepG2细胞侵袭力的影响。方法:125I标记整合素αV亚基的ASODN,以聚乙烯亚胺衍生物jetPEI-RGD为载体,通过受体介导的转染方式进入HepG2细胞,利用Boyden小室侵袭模型评估复合物对HepG2细胞侵袭力的影响,并计算实验组和各对照组的抑制率。结果:jetPEI-RGD/125I-(αV)ASODN组、jetPEI-RGD/(αV)ASODN组、jetPEI-RGD组、125I-(αV)ASODN组、(αV)ASODN组和Na125I组的抑制率分别为(52.60±4.11)%、(39.73±3.40)%、(30.05±5.19)%、(14.14±2.94)%、(12.79±2.68)%和(0.91±2.91)%,相对于其他各实验对照组,jetPEI-RGD/125I-(αV)ASODN组减低了HepG2细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论:以jetPEI-RGD为载体投递125I-(αv)ASODN能有效抑制HepG2细胞的侵袭力。

αv整合素沉默对结肠癌多细胞球药物敏感性的影响

目的应用反转录病毒介导的shRNA沉默αv整合素,探讨后者在结肠癌多细胞球(MCSs)对奥沙利铂耐药中的作用。方法构建针对αv整合素的反转录病毒质粒,脂质体转染质粒至结肠癌细胞株HT29。采用改良liquid overlay技术培养MCSs;Western blotting检测MCSs中αv整合素蛋白的表达;Cell Counting Kit-8检测梯度浓度(0、5、50、500、5 000μg/L)的奥沙利铂处理后MCSs的存活率。结果测序证实质粒构建成功。Western blotting结果显示反转录病毒质粒介导的shRNA能有效、特异、稳定地沉默αv整合素基因。沉默αv整合素基因后,MCSs对奥沙利铂的药物敏感性显著增加。奥沙利铂50、500μg/L处理48h后,MCSs的存活率为0.86%±0.05%和0.43%±0.04%,转染反转录病毒的MCSs则下降为0.77%±0.06%和0.30%±0.04%(P<0.05)。结论反转录病毒介导的shRNA能有效沉默αv整合素基因。沉默αv整合素能有效提高结肠癌MCSs对化疗药物奥沙利铂的敏感性。

整合素β3亚基真核表达载体的构建及αvβ3的表达

目的 :构建人整合素 β3亚基真核表达载体 ,并探讨如何使人整合素αvβ3在CHO细胞表面有效表达 .方法 :构建编码人整合素β3真核表达载体 pcDNA3.1 β3;将其与编码人整合素αv亚基真核表达载体分别及共转染至中国仓鼠卵巢 (Chinahamsterovary,CHO)细胞中进行表达 ;采用间接免疫荧光法 (IFA)检测外源基因的表达 .结果 :共转染组目的蛋白呈高效的细胞膜表达 ;pcDNA3.1 β3单独转染组 β3亚基细胞膜表达较共转染组弱 ;而 pcDNA3 αv单独转染组则未见有效的细胞膜表达 .结论 :人整合素αvβ3在CHO细胞表面的有效表达需要

jetPEI-RGD介导的^(125)I-(α_V)ASODN对人HCC细胞生长抑制作用的研究

目的探讨jetPEI-RGD介导的125I-(αV)ASODN体外对人HCC细胞生长抑制的影响。方法用125I标记整合素αV亚基的ASODN,以聚乙烯亚胺衍生物jetPEI-RGD为转运载体转染进入Hep G2细胞,MTT法检测复合物对Hep G2细胞生长的抑制率。结果jetPEI-RGD/125I-(αV)ASODN组的细胞抑制率与jetPEI-RGD/(αV)ASODN组比较,差异无统计学意义(P>0.05),与其余各实验对照组比较,细胞抑制率增高,差异具有统计学意义(P<0.001),且在一定的范围内抑制率与投药剂量呈正相关(r=0.879)。结论jetPEI-RGD介导的125I-(αV)ASODN能有效抑制Hep G2细胞的生长增殖。

化疗对骨肉瘤α_V和β_3整合素表达影响的研究

目的:探讨化疗对骨肉瘤αV、β3整合素表达的影响。方法:免疫组化法检测20例化疗前和31例化疗后骨肉瘤αV、β3整合素的表达情况。结果:αV、β3整合素在骨肉瘤细胞呈强阳性表达,而正常骨细胞均呈阴性表达,P=0.000;化疗后两者表达明显下降,P=0.000。秩和检验表明,化疗后αV整合素与肿瘤Enneking分期(P=0.014)、侵袭(P=0.007)、复发(P=0.021)明显相关;β3整合素表达与肿瘤复发明显相关,P=0.003。多因素分析显示,化疗后αV整合素表达水平是影响骨肉瘤侵袭独立因素,化疗后β3整合素是影响骨肉瘤复发独立因素。结论:αV、β3整合素可能成为骨肉瘤诊断的辅助指标;化疗可能通过下调骨肉瘤细胞αV、β3整合素表达而改变其相应的生物学活性;αV、β3整合素可能分别是影响骨肉瘤侵袭、复发的独立因素;αV、β3整合素可能作为判断骨肉瘤化疗预后的指标及化疗药物作用的靶分子。

以αv为靶向的整合素作为肺纤维化的药物靶点

特发性肺纤维化是一种病因不明、预后不良的慢性进行性间质性肺疾病,尽管接受了治疗,大多数患者病情仍有可能进展或恶化。整合素是异二聚体细胞表面蛋白,是干预肺纤维化有希望的治疗靶点。αv整合素是纤维化发展的核心,因为它们激活潜伏的TGF-β,一种已知的促纤维化细胞因子。αv亚基可以与β1、β3、β5、β6或β8亚基形成异二聚体,这些整合素中的一种或多种对于肺纤维化的发展至关重要,但尚不清楚它们的相对重要性。本综述总结了肺纤维化与αv整合素相关联的知识,以及有关αv整合素抑制剂的新出现的临床前研究和临床试验。

αvβ6整合素siRNA抑制人卵巢癌细胞体外及体内侵袭作用的研究

目的:研究整合素αvβ6小干扰RNA对人卵巢癌HO-8910PM细胞侵袭生长的抑制作用。方法:以脂质体法将整合素αvβ6-siRNA(siRNA组)及无义寡核苷酸质粒(Neo组)转染人卵巢癌HO-8910PM细胞,通过实时定量PCR及蛋白质印迹试验,分别测定siRNA组、Neo组和空白对照组αvβ6整合素mRNA和蛋白的表达,MTT法和Transwell小室法分别测定其体外增殖能力和侵袭力。将各组细胞接种于裸小鼠皮下,观察移植瘤生长速度,并用免疫组化法检测整合素αvβ6的表达。结果:与Neo组和空白对照组相比较,siRNA组中αvβ6整合素mRNA和蛋白表达强度明显降低;转染的卵巢癌HO-8910PM细胞侵袭力明显下降(P<0.01);各组细胞体外增殖能力差异无统计学意义(P>0.05),但siRNA组细胞裸鼠皮下移植瘤生长速度明显低于其他两组,免疫组化显示,转染整合素αvβ6-siRNA的移植瘤中整合素αvβ6为阴性表达。结论:αvβ6整合素siRNA转染HO-8910PM细胞后,通过降低αvβ6整合素mRNA和蛋白表达水平,抑制其对细胞外基质的侵袭,进而抑制裸鼠移植瘤的生长。

负载小鼠bEnd．3细胞抗原的树突状细胞诱导小鼠抗同种子宫颈癌U14细胞的免疫反应

目的 探讨负载小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3抗原的树突状细胞（DC）诱导小鼠抗同种宫颈癌U14细胞的体液和细胞免疫反应.方法 培养小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3,逆转录（RT）-PCR技术检测血管内皮细胞增殖相关抗原血管内皮生长因子受体2（VEGF-R2）和整合素αV的表达,并制备bEnd.3细胞的冻融抗原,用抗原负载DC（即bEnd.3-DC）.采用bEnd.3-DC免疫小鼠（bEnd.3-DC组）,共4次,每周1次,设DC组和磷酸盐缓冲液（PBS）组作为对照;免疫结束后1周皮下注射小鼠宫颈癌U14细胞,观察荷瘤小鼠的肿瘤生长情况,检测免疫后小鼠脾T淋巴细胞体外靶向血管内皮细胞的细胞毒T淋巴细胞（CTL）效应、脾CD＋3 CD＋8T淋巴细胞百分率和免疫后小鼠血清的抗体滴度,通过免疫细胞化学方法和蛋白印迹法进行小鼠抗血清的特异性免疫反应分析.结果 经RT-PCR技术证实,bEnd.3细胞在mRNA水平表达VEGF-R2和整合素αV.PBS组小鼠的肿瘤生长最快,DC组和bEnd.3-DC组小鼠肿瘤也有生长,但生长较慢;在免疫小鼠2周后,bEnd.3-DC组小鼠肿瘤消失,PBS组小鼠肿瘤体积为（3.38 ±0.34）cm3,DC组小鼠肿瘤体积为（0.11±0.13）cm3.小鼠脾T淋巴细胞体外CTL实验结果显示,bEnd.3-DC组有明显的特异性靶向杀伤bEnd.3细胞的作用,其杀伤率超过60%.脾CD＋3 CD＋8 T淋巴细胞的百分率,PBS组为（30.0±0.9）%,DC组为（32.8±0.4）%,bEnd.3-DC组为（38.6 ±0.7）%,3组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.bEnd.3-DC组免疫小鼠血清的抗体滴度为1∶3200,DC组为1∶800,PBS组则为0.免疫细胞化学检测显示,bEnd.3-DC组的抗血清与bEnd.3细胞有特异性的抗原抗体反应;蛋白印迹法结果显示,在相对分子质量为220 000处有特异性的VEGF-R2蛋白条带.结论 负载小鼠bEnd.3细胞抗原的DC对小鼠宫颈癌Ui4细胞的生长有抑制作用,其原因是诱导小鼠产生了特异性的靶向血管内皮细胞的CTL和针对bEnd.3细胞中的某些血管内皮细胞增殖相关抗原的细胞和体液免疫应答.

整合素αvβ6在大鼠呼吸机相关性肺损伤中的作用

目的探讨整合素αvβ6在大鼠呼吸机相关性肺损伤（VILI）中的作用。方法清洁级雄性SD大鼠24只，随机分为3组（n=8），对照组（C组）不行机械通气；高潮气量组（H组）行高潮气量（40ml／kg）机械通气4h，呼吸频率40次／min，氧浓度21％；高潮气量＋阻滞剂S247组（HS组）腹腔注射S247（含有αv亚单位整合素非特异性阻滞剂）100mg／kg，1次／d，持续2周，在最后一次腹腔注射S247后30min行高潮气量机械通气，参数设定同H组。C组和H组于上述相应时点腹腔注射等量生理盐水。通气结束后处死大鼠，观察肺组织病理学，计算肺湿／干重比（W／D），记录支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞（WBC）计数，测定总蛋白（TP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）的浓度、整合素αvβ6 mRNA及其蛋白的表达水平。结果C组未见肺损伤的发生；H组肺泡结构严重破坏，肺泡内渗出物、出血和间质水肿明显；HS组中等程度炎性细胞浸润，肺泡内出血和肺泡壁增厚。与C组比较，H组和HS组肺W／D、BALF中WBC计数、TP浓度升高，整合素αvβ6 mRNA及其蛋白表达上调，H组BALF中MIP-2浓度升高（P〈0．01）；与H组比较，HS组肺W／D、BALF中WBC计数、TP、TNF-α、MIP-2浓度降低，整合素αvβ6 mRNA及其蛋白表达下调（P〈0．05或0．01）。结论整合素αvβ6参与了大鼠VILI的发生。

整合素α_vβ_3和VEGF在骨折愈合过程中的表达及意义

[目的]探讨整合素αvβ3和VEGF在骨折愈合过程中的表达及意义。[方法]将新西兰大白兔20只,随机分为4组,每组5只,手术制作左侧兔桡骨中段骨干缺损模型,作为实验组。右侧作假手术处理,作为对照组;应用免疫组织化学链霉亲合素-生物素酶复合物(SABC)法检测术后2、4、8、12周骨痂组织中整合素αvβ3和VEGF的表达。[结果]在骨折愈合的不同时期,整合素αvβ3和VEGF的表达上调,对照组与实验组的表达差异有统计学意义(P<0.05)。术后2周整合素αvβ3和VEGF的表达水平最高,术后12周表达水平最低。[结论]整合素αvβ3和VEGF可能在骨折愈合的过程中起重要作用,检测整合素αvβ3和VEGF的表达有助于对骨折预后的判断。

生长激素对SD大鼠子宫内膜容受性的影响

目的观察生长激素对着床期SD大鼠子宫内膜整合素αvβ3（Itgαvβ3）及骨桥蛋白（OPN）表达的影响，以探讨改善子宫内膜容受性的方法。方法随机将50只雌性SD大鼠平均分成两组，对照组为生理盐水（NS）组，实验组为生长激素（GH）组。取发现阴栓后第4天子宫内膜，用免疫组织化学技术检测子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达，同时首次通过SYBR Green嵌合荧光实时定量PCR技术检测子宫内膜上述两种因子mRNA的表达。结果GH组子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达呈强阳性，对照组表达弱于GH组，两组差异有统计学意义（Itgαvβ3：77．33±4．23比92．56±16．80，OPN：71．75±8．77比80．73±13．00，均P〈0．05）。实时荧光定量PCR结果与免疫组织化学结果相符。结论生长激素可以增强着床期子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达，可能可改善子宫内膜容受性，提高临床妊娠率。