遗传工程菌Fhhh降解精对苯二甲酸与mnp基因表达

跨界融合构建的遗传工程菌Fhhh及其亲株黄孢显毛平革菌 (PC) ,降解精对苯二甲酸的比降解率受到Mn2 + 、酒石酸铵、H2 O2 、pH共 4因素的影响 .除pH值外 ,其余 3个因素影响 2菌株比降解率大小的排序完全一致 .pH值对PC菌的影响排序处于第 3位 ,对Fhhh则处于第 1位 .Fhhh比降解率比PC高出 11 11% ;mnp基因表达的锰过氧化物酶 (MnP)比活力水平比PC高出 15 2 2 % .降解精对苯二甲酸 4因素优化水平 ,也是mnp基因表达的优化条件 .比降解率与MnP的比活力水平之间有显著或极显著正相关性 (r>r0 .0 5( 4) ,r >r0 .0 1( 4) ) .

金属元素对跨界融合子Fhhh降解污染物过程中MnP水平调控

跨界融合构建出的基因工程菌Fhhh在降解有机污染物过程中 ,分泌的锰过氧化物酶(MnP)活力水平受到Mn2 +、Cu2 +、Zn2 +、Se4 +4种金属元素的调控 .研究结果表明 ,Fhhh及其亲株黄孢原毛平革菌 (PC)在降解污染物过程中 ,4种金属元素影响比降解率 (SDR)高低的排序均为Mn2 +>Cu2 +>Zn2 +>Se4 +;在食品废水中的 4种金属元水平素处于优化条件下 ,Fhhh分泌的MnP比活力为 :2 0 .52 90± 0 .0 530个单位 ,高于亲株PC菌的 13.2 755± 0 .0 34 5;在精对苯二甲酸 (PTA)溶液中的 4种金属元素处于自然水平时 ,Fhhh分泌的MnP比活力为 :6.560 5±0 .0 567个单位 ,高于亲株PC菌的 5.772 6± 0 .0 398.研究结果为Fhhh基因表达出高水平的MnP ,提高降解污染物的效率 ,提供了分子生物学的调控依据 .

平菇与香菇属间原生质体融合的研究

通过分离和出菇试验,获得了纯化的平菇(Pleurotus sapidus)和香菇(Lentinus edodes)单孢系。用溶壁酶去细胞壁制备成原生质体。以PEG为融合诱导剂,诱导两者原生质体融合。1988年获得了可以出菇的融合子。这些融合子形成的子实体,从形态、生长习性和菌伞的颜色特征上都与双亲有明显的差异。大部分氨基酸含量介于双亲之间。同功酶分析也显示出融合子呈现与双亲不同的酶带。融合子出现的上述新性状,可能是平菇与香菇的原生质体基因重组的结果。

酿酒酵母与粟酒裂殖酵母属间原生质体融合选育降解苹果酸强的葡萄酒酵母

采用赖氨酸缺陷型酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)L1原生质与肌醇缺陷型粟酒裂殖酵母 (Schizosac charomycespombe)PM 5原生质体融合选育了葡萄酒发酵性能良好且具有降解苹果酸能力的酵母菌株。对融合子菌落形态、遗传稳定性、降解苹果酸能力和葡萄酒发酵性能进行了研究。结果表明 :用促融合剂 [30 %聚乙二醇(MW6 0 0 0 )、0 0 2mol/LCaCl2 和 17g/ 10 0mL蔗糖 ]处理两亲本进行属间融合 ,获得 19株融合子 ,融合率为 4 7×10 -6～ 3 1× 10 -7。融合子具有降解苹果酸能力和葡萄酒发酵性能好的双亲优良特性 ,证实了其杂种特征。

蒽降解菌与铜绿假单胞菌融合子的特性研究

将蒽降解菌An815和绿色荧光蛋白标记铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa/EGFP)P原生质体融合,得到了既能高效降解蒽,又能产生生物表面活性剂的融合子F。研究了它的形态特征、生理生化特性、产表面活性剂的能力、对蒽的降解性能及生长繁殖情况。结果表明,融合子菌落和菌体形态,产脓青素,荧光色素的特性类似于铜绿假单胞菌亲本,但其大多生理生化特性酷似An815亲本而不同于铜绿假单胞菌亲本;融合子有较好产表面活性剂的能力,72 h内将表面张力由70.2 mN/m降至36.5mN/m;在蒽的反应体系中,32h内融合子和亲本An815对蒽的降解转化率分别为86.7%,59.4%,融合子对蒽的降解速率比An815提高了27.3%;在蒽的反应体系中融合子和亲本生长曲线相似。

通过灭活原生质体融合选育啤酒酵母新菌株

将生产用啤酒酵母（ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） ＬＱ１６ 和ＱＳＢ７ 分别进行单倍体化，并筛选ＬＱ１６（Ｉｌｅ － ，Ｄａｔｒ） 和ＱＳＢ７（Ａｌａ－ ，Ｈ２Ｓ－ ） 的遗传标记。经摇振培养后，酶解制备原生质体，对前者进行紫外灭活，而后者进行热灭活，再利用ＰＥＧ 进行融合，在ＭＭＲ 和ＳＭＭＲ 培养基上再生，挑选融合子。连续传代稳定后鉴定融合子ＱＳＢＸＩ６ 。通过细胞体积和生物量的测定，以及遗传型的分析和细胞ＤＮＡ 含量测定等均证实了获得的是融合子。经对啤酒感观评价，双乙酰含量测定与多种成分的气相色谱分析以及啤酒的发酵度，絮凝性、稳定性测定，并经连续多次生产试验证实ＱＳＢＸＩ６ 是一株口味独特、发酵度高、絮凝性强、遗传性能稳定兼具有多种优良性状的啤酒酵母生产新菌株。

高效絮凝菌的细胞融合及产絮特性研究

从含油废水处理曝气池活性污泥中分离到具有絮凝特性的絮凝菌株F2、F6,絮凝率在80%以上.对絮凝菌F2、F6的絮凝基因进行基因定位.首先对菌株F2、F6进行药物抗性遗传标记选择,然后提取质粒,其中F6无质粒,则絮凝基因在染色体上;F2有质粒,将具有絮凝特性的菌株F2的质粒转化到无絮凝特性的受体菌DH5α细胞中,最后对转化菌进行絮凝特性检测.结果表明,转化菌株的絮凝效果明显低于原始亲株F2.初步判断F2、F6絮凝基因定位于染色体DNA上,不在质粒上.因此,为了提高絮凝菌的絮凝效果,利用高效产絮菌株F2、F6作为亲本菌株,进行原生质体融合,对融合条件进行优化,并对融合子进行絮凝测定.实验结果确定了青霉素GK的最适浓度,F2为0.6U·mL-1、F6为0.1U·mL-1,得到了相应的原生质体及融合子;经絮凝试验对融合子的验证,结果表明,数株融合子表现出产絮特性,融合子絮凝效果与亲本菌株F2、F6相当.

光合细菌与酵母跨界融合子降解味精废水性能测定

为了筛选出能综合双亲优势的杂种细胞，为废水资源化生产ＳＣＰ提供更为理想的菌株来源，将原核球形红假单胞菌细胞（ＮｔｒＳｍｓ）与真核酿酒酵母细胞（ＮｔｓＳｍｒ）的原生质体融合，构建成跨界杂种细胞（ＮｔｒＳｍｒ）．从中筛选出Ｆ１３，Ｆ１５，Ｆ２０三株高絮凝性融合细胞，在起始ＢＯＤ５浓度为１９１—６９０ｍｇ／Ｌ．ｐＨ７．０３０℃的味精废水中振荡反应７—８ｈ，测得融合细胞和双亲菌株降解利用有机污染物的系列反应动力学参数μｍａｘ，ｑｍａｘ，Ｋａμ，ＫｓｑＹ和Ｋｄ．发现融合细胞降解废水的性能具有优势，利于废水资源化处理．

冬虫夏草与蛹虫草原生质体融合初探

采用正交设计和双灭活标记方法对冬虫夏草与蛹虫草进行原生质体融合研究,获得融合子。结果表明:最适融合条件为:40%PEG与0.08mol/LCa2+的混合溶液(pH7.0)助融,35℃融合20min,融合率为2.74×10-5;并用形态学、颉颃实验及分子生物学方法初步探讨了双亲和融合子三者之间的亲缘关系。

双歧杆菌和酿酒酵母原生质体融合子筛选方法的探讨

目的:探讨双歧杆菌(Bifidobacterium)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)原生质体融合子的筛选方法。方法:将双歧杆菌和酿酒酵母原生质体进行原生质体融合,采用10%乳糖中性红培养基进行融合子的初筛,并分析融合子传代稳定性、生物学特性,采用双歧杆菌属特异性寡核苷酸探针对亲本菌和融合子进行了荧光原位杂交检测比较。结果:结果表明,筛选得到的融合子具有双歧杆菌的特异性序列和亲本菌的生物学特性。结论:双歧杆菌和酿酒酵母原生质体融合,实现了厌氧菌和酵母的跨界融合,为双歧杆菌生物学功能的开发提供新思路、新途径。

光合细菌与酵母原生质体融合子连续发酵豆制品废水研究

研究光合细菌球形红假单胞菌Ｐ９４７９（ＮｔｒＳｍｓ）与酿酒酵母Ｙ９４０７（ＮｔｓＳｍｒ）的融合细胞Ｆｏａ和Ｆｚ１（ＮｔｒＳｍｒ）的性能表明：两融合子耐酸性能与酿酒酵母相似；Ｆｏａ耐热性近与酿酒酵母，Ｆｚ１的耐热性近与球形红假单胞菌．在Ｂ．Ｂｒａｕｎ反应器中，融合子Ｆｚ１的观测产率系数Ｙｏｂｓ和菌体产量ΔＸ高于球形红假单胞菌；对废水中污染物ＢＯＤ５的去除率Ｅ和容积负荷Ｕｖ在底物浓度ＢＯＤ５为４６００ｍｇ／Ｌ时均优于双亲；融合子Ｆｚ１的生物负荷Ｕｂ和菌体比降解率ｑ高于酿酒酵母，絮凝效率Ｐ优于任一亲株．

酿酒酵母与雨生红球藻的细胞融合子的RAPD鉴定

用7条随机引物对雨生红球藻(Haemotococcumpluvies)、酿酒酵母(Saccaromycescerevisiae)及其融合酵母变株进行RAPD分析.在融合子的54条谱带中,有7条为双亲共有,占12.96%,与酿酒酵母相同的18条(33%),与雨生红球藻相同的17条(30.9%),其余12条(23.54%)为融合子的新谱带,结果表明该融合子很可能是雨生红球藻、酿酒酵母细胞杂种.

应用原生质体融合技术培育平菇与杏鲍菇优良新菌株

为了培育出具有优良互补性状的平菇和杏鲍菇新菌株,以高产、抗杂能力强的平菇品种CCEF89和优质、适应性强的杏鲍菇品种PL7为亲本菌株,建立原生质体聚乙二醇(PEG)融合体系,得到最佳融合条件:两亲本原生质体数量按1∶1混合,30%PEG 6000,0.01 mol·L^-1Ca^2+,32℃水浴30 min,融合率达0.0101%~0.0282%。通过拮抗反应试验和Rep-PCR分子鉴定,从515个融合再生菌株中获得12个融合菌株P1~P12;出菇试验表明,P1和P5为杏鲍菇新菌株,其他为平菇新菌株。P1和P5的产量、生物学效率均显著高于其亲本菌株PL7,并且抗杂能力显著提高;与亲本菌株CCEF89相比,平菇新菌株P4、P10和P11长满培养料和形成原基的时间缩短5.5~7.3 d,第1茬平均产量提高18.0%~24.0%,总生物学效率提高21.00%~27.67%。利用原生质体融合技术培育出了具有亲本优良互补性状的平菇和杏鲍菇新菌株,为同时进行2种不同食用菌的种质资源创新和新品种选育提供了一种新途径。

原生质体融合子代的筛选和鉴定

介绍了绿色木霉N6 和黑曲霉 85 6原生质体融合子代的研究。经传代、发酵、筛选 ,从 11株初筛的融合子中得到了 3株纤维素酶活高且稳定的菌株AT2 3、AT16、AT34,其CMC酶活分别为亲本绿色木霉N6 的 2 2倍、1 4倍、1 2倍。并对其进行制霉菌素抗性试验和可溶性蛋白质凝胶电泳分析鉴定。试验结果证明了AT2 3、AT16、AT34是基因发生了重组的融合子且具有杂种优势。

融合株SPSC发酵生产酒精的工艺研究 Ⅰ.絮凝速率、发酵过程的最适温度和pH值

酿酒酵母属(S. cereviae)变异株和粟酒裂殖酵母属(S. pombe)变异株进行属间原生质体融合得到融合株SPSC,该融合株比S. cereviae具有强的自身絮凝能力。以葡萄糖浓度150g/L的底物在30～44℃的温度范围内进行摇瓶厌氧发酵,获得最佳温度范围为34～38℃,最高发酵温度为40℃。在有效容积2.35L悬浮床反应器中,在pH值3.0～5.0范围内进行连续发酵,获得最适发酵pH为3.5～4.5。

选育蒽降解微生物耦合系统菌株的电融合及融合子的筛选

对选育蒽降解微生物耦合降解系统菌株的电融合过程及融合子的筛选进行研究 .结果发现在 5 0 0kHz的交流频率 ,脉冲强度 30 0V/cm ,脉冲幅宽为 5 μs ,脉冲个数为 2 ,交流电场强度在 2 0～ 4 0V/cm范围内 ,总融合率较稳定 .可以用红霉素和氨苄青霉素的双抗平板来对表面活性剂产生菌与土生优势菌的融合子进行筛选 ,用含卡那霉素的蒽的高渗平板对蒽的高效降解菌和土生优势菌的融合子进行筛选 .2种融合子均可以用绿色荧光来确证 .

啤酒酵母原生质体融合株HN31-6的啤酒酿造中试研究

为了考察啤酒酵母融合株HN31-6的啤酒酿造生产性能,以12.5°Bx麦芽汁为培养基,用500 L发酵罐在12℃下发酵,发酵期间每天取样测定发酵液的发酵度和酒精度以及发酵液的双乙酰、乙醛、高级醇和酯类等挥发性物质的含量.结果表明:在上述条件下,发酵14 d,发酵液的发酵度和酒精度分别为69.9%和4.46%;双乙酰和乙醛的含量分别为0.036 4 mg/L和4.53 mg/L;异戊醇、异丁醇和正丙醇的含量分别为46.47、8.34和9.82 mg/L,总高级醇的含量为64.6mg/L;甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸异丁酯、乙酸异戊酯和己酸乙酯的含量分别为0.132、21.92、0.037、2.22和0.293 mg/L,总酯为24.6 mg/L;该菌株的发酵度以及发酵液的酒精、双乙酰、乙醛、总高级醇和一些酯类等的含量均达到国家优质啤酒的标准,啤酒口感良好.该融合株在啤酒酿造生产中具有很好的应用前景.

利用DOT-ELISA筛选酵母融合子

利用动物免疫方法制备了啤酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)和毕赤氏酵母 (Pichiapas toris)的免疫血清。将啤酒酵母和毕赤氏酵母单倍体化 ,通过原生质体融合技术促使其融合。融合后将再生菌落影印到硝酸纤维膜上分别和双亲免疫血清做Dot ELISA反应 ,呈现双阳性的即为双亲融合子。

酿酒酵母与酒类酒球菌融合子特性及分子生物学研究

对酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）与酒类酒球菌（0enos．oeni）的跨界融合子F-20-7进行抗生素筛选、降酸试验、生长试验等生产性能测试及相关基因鉴定研究。结果表明，氨苄青霉素对融合子的影响较小，融合子对L-苹果酸的降解率在54．06％～78．81％，在挑选出的融合子中仅有4株能够在YNB、模拟葡萄汁及天然葡萄汁中生长，其生长力较葡萄酒酵母差。PCR扩增结果显示，融合子质粒DNA中存在苹果酸-乳酸发酵的两个关键酶基因，即苹果酸乳酸酶基因MleA和苹果酸-乳酸通透酶基因MleP，测序结果表明MleP基因与GenBank中MleP基因序列的同源性高达97％，较好的解释了融合于的降酸行为。

Frankia与链霉菌融合子特性的研究

将Frankia菌株CcOl与金色链霉菌GL原生质体融合,得到3株融合子,均具有GL生长快的特性与CcOl的结瘤固氮能力.固体培养时,3株融合子呈现出与GL不同的颜色;且均具有Frankia菌的顶囊形态,以及链霉菌的链状孢子丝结构.与两亲本相同,3株融合子均对大肠杆菌有抗性,其中F4与GL的抗菌谱基本相同.在传10代之后,它们仍具有结瘤与固氮能力.血清学分析表明,F1与F6兼具两亲本的特异抗原,而F4仅具有GL的特异抗原,融合子F1、F6较F4在遗传上更为稳定.