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CRISPR/Cas9建立IL-12p35基因敲除大鼠C6细胞系表达研究 被引量:6
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作者 孙瑾 张俊卿 +3 位作者 黄延林 杨芳裕 董桂江 田新华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期2452-2456,共5页
目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除大鼠C6细胞系的IL-12p35基因,构建IL-12p35基因稳定敲除细胞株。方法:构建Lenti-sgRNA-EGFP质粒CRISPR/Cas9系统的Cas9核酸内切酶基因,慢病毒感染C6细胞后进行MTT[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphen... 目的:运用CRISPR/Cas9技术敲除大鼠C6细胞系的IL-12p35基因,构建IL-12p35基因稳定敲除细胞株。方法:构建Lenti-sgRNA-EGFP质粒CRISPR/Cas9系统的Cas9核酸内切酶基因,慢病毒感染C6细胞后进行MTT[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]检测及PI-FACS(Facial Action Coding System)细胞周期检测。结果:针对IL-12p35基因的KO1、KO2、KO3三个靶点,进行慢病毒转染,转染效率均大于80%。酶切前后靶点活性均下调,免疫印迹验证C6细胞中靶点有效性。MTT检测结果IL-12p35基因敲除后于第5天细胞增殖倍数明显降低。IL-12p35基因敲除后显著影响细胞周期G1期,G2/M期。结论:本研究构建IL-12p35基因的CRISPR/Cas9敲除系统,获得稳定的IL-12p35基因敲除细胞株,为后期IL-12p35与胶质瘤细胞的发生、发展机制方面研究提供基础。 展开更多
关键词 CRISpR/Cas9 C6 il-12p35 慢病毒源性载体
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寻常性银屑病皮损及非皮损中IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA的表达 被引量:4
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作者 陈旭娥 谭志建 +3 位作者 岳青 刘厚君 刘志香 李家文 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期14-16,18,共4页
目的检测寻常性银屑病患者皮损及非皮损处IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA表达,探讨其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测寻常性银屑病患者皮损、非皮损处及正常人皮肤中IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA的表达... 目的检测寻常性银屑病患者皮损及非皮损处IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA表达,探讨其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测寻常性银屑病患者皮损、非皮损处及正常人皮肤中IL-23(p19/p40)和IL-12(p35/p40)mRNA的表达水平。结果寻常性银屑病患者皮损中IL-23p19及p40(IL-23/IL-12)mRNA的表达均高于非皮损组织和正常皮肤组织(P<0.05),且非皮损处高于正常对照组,差异有显著性(P<0.05);IL-12p35mRNA在银屑病皮损处、非皮损处和正常对照中表达水平差异无显著性(P>0.05)。结论在寻常性银屑病发病过程中,IL-23可能发挥较IL-12更重要的作用。 展开更多
关键词 银屑病 il-23 p19 p40(il-23/il-12) il-12 p35
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人外周血IL-12 P35 cDNA的巢式PCR扩增、克隆与测序
3
作者 雷明军 吴少庭 +4 位作者 戴五星 高世同 张仁利 黄达娜 袁仕善 《中国热带医学》 CAS 2003年第4期432-434,共3页
目的 克隆中国汉族人IL -12P3 5cDNA序列 ,并进行序列测定。 方法 利用反转录巢式PCR从健康人外周血总RNA中扩增IL -12P3 5cDNA序列 ,插入T载体PMD -T中 ,重组质粒转化大肠杆菌JM10 9,所获克隆经PCR初筛后进行酶切鉴定 ,阳性克隆进行... 目的 克隆中国汉族人IL -12P3 5cDNA序列 ,并进行序列测定。 方法 利用反转录巢式PCR从健康人外周血总RNA中扩增IL -12P3 5cDNA序列 ,插入T载体PMD -T中 ,重组质粒转化大肠杆菌JM10 9,所获克隆经PCR初筛后进行酶切鉴定 ,阳性克隆进行DNA测序。 结果 从健康人外周血总RNA中扩增出约 670bp条带 ,与预期大小相同 ,PCR与酶切鉴定证明得到PMD/P3 5阳性克隆 ,DNA测序证实了插入片段的正确性。 结论 在体外成功的扩增、克隆了中国汉族人IL -12P3 5cDNA序列。为继续开展IL -12的基础与应用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人外周血 il-12 p35 CDNA 巢式pCR扩增 克隆 测序 细胞因子 白细胞介素-12
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兔抗鼠IL-12p35多克隆抗体的制备及应用
4
作者 门颖丽 康巧珍 +5 位作者 王小龙 江慧 刘诗梦 汲振余 王婷 刘鑫 《南昌大学学报(理科版)》 CAS 北大核心 2017年第1期72-76,共5页
利用分子克隆方法构建重组载体pGEX-4T-1-IL-12a,转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱纯化后,获得重组融合蛋白GST-IL-12p35。以此蛋白为免疫抗原免疫新西兰大耳白兔制备IL-12p35多克隆抗体。采用ELISA法评估... 利用分子克隆方法构建重组载体pGEX-4T-1-IL-12a,转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱纯化后,获得重组融合蛋白GST-IL-12p35。以此蛋白为免疫抗原免疫新西兰大耳白兔制备IL-12p35多克隆抗体。采用ELISA法评估抗体效价,Western blot检测抗体特异性。LPS刺激小鼠脾细胞,ELISA法检测IL-12抗体阻断后细胞培养上清中的IFN-γ的分泌量。结果:成功构建重组载体pGEX-4T-1-IL-12a,并获得重组融合蛋白GST-IL-12p35(约48kDa)。抗原免疫新西兰大耳白兔制备IL-12p35多克隆抗体,ELISA法测得IL-12p35多克隆抗体效价为1256 000,Western blot证实制备的多克隆抗体能够识别结合重组蛋白。IL-12p35多克隆抗体能够有效地抑制LPS诱导的脾细胞IFN-γ的表达。 展开更多
关键词 il-12a il-12p35多克隆抗体 LpS IFN-Γ
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The Expression of Interleukin-23 (p19/p40) and Inteleukin-12 (p35/p40) in Psoriasis Skin 被引量:3
5
作者 陈旭娥 谭志建 +3 位作者 岳青 刘厚君 刘志香 李家文 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2006年第6期750-752,共3页
In order to investigate the mRNA expression and function of interleukin-23 (p 19/p40) and interleukin-12 (p35/p40) in the psoriatic lesion, no-lesion and normal human skin, reverse transcriptase-polymerase chain r... In order to investigate the mRNA expression and function of interleukin-23 (p 19/p40) and interleukin-12 (p35/p40) in the psoriatic lesion, no-lesion and normal human skin, reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the expression of IL-23 (p19/p40) and IL-12 (p35/p40). The results showed that the expression of IL-23p19 mRNA and p40 (IL-12/IL-23) mRNA were higher in psoriatic lesion than those of non-lesional skin and normal skin. The levels of IL-23p19 mRNA and p40 (IL-12/IL-23) mRNA were higher in psoriatic non-lesional skin than normal skin. However, no significant difference was found in the level of IL-12p35 mRNA among the psoriatic lesional skin, nonesional skin and normal skin. It was suggested that IL-23 might be more important in the pathogenesis of psoriasis than IL- 12. 展开更多
关键词 pSORIASIS il-23p19 il-23/il-12p40 il-12p35
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原花青素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制的研究 被引量:10
6
作者 梅寒芳 谢朝阳 祝其锋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期227-231,共5页
目的 探讨原花青素(Procyanidins,PC)对β淀粉样肽25~35(β amyloid peptide25-35,Aβ25-35)诱导PCI2细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst 33258-P1荧光染色法检测凋亡,RT-PCR检测P53和bcl-2基因mRN... 目的 探讨原花青素(Procyanidins,PC)对β淀粉样肽25~35(β amyloid peptide25-35,Aβ25-35)诱导PCI2细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst 33258-P1荧光染色法检测凋亡,RT-PCR检测P53和bcl-2基因mRNA表达,Western blot检测P53和Bcl-2蛋白表达。结果 不同剂量PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的凋亡,提高细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的核固缩,凝聚和碎裂,降低P53 mRNA表达以及P53蛋白表达,增加bcl-2mRNA表达以及Bcl-2蛋白表达。结论 PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因P53和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。 展开更多
关键词 原花青素 AΒ25-35 pC12细胞 凋亡 p53 BCL-2
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p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用 被引量:6
7
作者 曾季平 王立祥 +5 位作者 胡晓燕 秦文 孔峰 杨玲玲 崔行 刘新垣 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2004年第6期625-628,共4页
目的:探讨p35基因对氯化锰(MnCl2)诱导的PC12细胞凋亡的作用。方法:将p35基因转染PC12细胞得到可稳定表达p35基因的PC12/p35细胞株,使用相差显微镜观察、MTT染色和流式细胞分析等方法检测p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞凋亡的作用。结果:... 目的:探讨p35基因对氯化锰(MnCl2)诱导的PC12细胞凋亡的作用。方法:将p35基因转染PC12细胞得到可稳定表达p35基因的PC12/p35细胞株,使用相差显微镜观察、MTT染色和流式细胞分析等方法检测p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞凋亡的作用。结果:p35基因在PC12细胞中的稳定表达可以有效地抑制MnCl2诱导的PC12细胞凋亡。结论:p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞具有保护作用。 展开更多
关键词 氯化锰 pC12细胞 基因 p35 细胞凋亡
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姜黄素影响Aβ_(25-35)诱导PC12细胞周期变化与细胞凋亡的可能机制 被引量:8
8
作者 谢朝阳 祝其锋 吴斌华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期217-221,共5页
目的探讨姜黄素(curcum in,Cur)对β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloidpeptide-(25-35),Aβ25-35]诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期异常与凋亡保护作用的可能机制。方法5μmol.L-1Cur预处理同步于G0期的PC12细胞,加入终浓度为25μmol.L-1A... 目的探讨姜黄素(curcum in,Cur)对β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloidpeptide-(25-35),Aβ25-35]诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期异常与凋亡保护作用的可能机制。方法5μmol.L-1Cur预处理同步于G0期的PC12细胞,加入终浓度为25μmol.L-1Aβ25-35处理0~20h,用RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21、CDK4、E2F1、bax的表达。结果与Aβ25-35诱导组比较,Cur保护组p21mRNA和p21蛋白的表达增加;CDK4、E2F1、baxmRNA和CDK4、Bax蛋白的表达降低。结论Cur可能通过上调p21的表达,下调CDK4、E2F1、bax的表达,对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期异常与凋亡起保护作用。 展开更多
关键词 姜黄素 Aβ_25-35 pC12细胞 基因表达 p21 CDK4 E2F1 Bax
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Aβ_(25-35)诱导PC12细胞周期紊乱及对P53和Cyclin D1基因表达的影响 被引量:6
9
作者 谢朝阳 梅寒芳 祝其锋 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2007年第1期31-35,43,共6页
目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分... 目的:探讨Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化及对P53和Cyclin D1基因表达的影响。方法:PC12细胞同步于G0期,采用终浓度为0-45μmol/L或浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,用MTT比色法分析细胞存活率;流式细胞仪检测分析细胞周期的改变;RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测P53和Cyclin D1基因的变化。结果:随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);流式细胞仪分析表明去血清培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8,16,24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P<0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);P53 mR-NA表达和P53蛋白表达降低、Cyclin D1 mRNA表达和Cyclin D1蛋白表达增高。结论:Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与下调P53的表达,上调Cyclin D1的表达有关。 展开更多
关键词 AΒ25-35 pC12细胞 细胞周期 p53 CYCLIN D1
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Cdk5及p35在NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡中的作用研究 被引量:2
10
作者 沈晗 吴少波 +2 位作者 张百芳 彭芳芳 武栋成 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期372-376,共5页
目的:探讨Cdk5及p35在神经生长因子(NGF)撤退诱导的PC12细胞凋亡中的作用机制。方法:建立NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡模型,Western blotting检测Cdk5及p35在凋亡过程中表达变化情况,利用Cdk5特异性抑制剂Roscovitine预处理已分化P... 目的:探讨Cdk5及p35在神经生长因子(NGF)撤退诱导的PC12细胞凋亡中的作用机制。方法:建立NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡模型,Western blotting检测Cdk5及p35在凋亡过程中表达变化情况,利用Cdk5特异性抑制剂Roscovitine预处理已分化PC12细胞,检测其对NGF撤退诱导的凋亡作用影响,向已分化PC12细胞转染真核表达质粒pCMV-p35-IRES-Cdk5,检测过表达Cdk5/p35对PC12细胞凋亡的影响。结果:NGF撤退36h会引起已分化PC12细胞出现典型的DNA Ladder凋亡特征,MTT检测结果也显示,NGF撤退对PC12细胞的损伤呈时间依赖性;Roscovitine预处理已分化PC12细胞可以抑制NGF撤退诱导的细胞凋亡率,但不影响Cdk5/p35蛋白表达水平;向已分化PC12细胞中转染真核表达质粒后,能检测到Cdk5/p35蛋白的过表达,并引起PC12细胞出现凋亡样改变。结论:Cdk5及p35的活化与NGF撤退诱导的已分化PC12细胞凋亡过程密切相关,抑制Cdk5的活化有抑制细胞凋亡保护神经元的作用。 展开更多
关键词 CDK5 p35 NGF撤退 pC12细胞 凋亡
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姜黄素对β-淀粉样肽(25-35)诱导去血清培养PC12细胞周期异常与细胞凋亡的影响 被引量:3
11
作者 谢朝阳 祝其锋 吴斌华 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期36-40,共5页
目的:探讨姜黄素(Cur)对β-淀粉样肽(25-35)(βamyloid peptide-25-35,Aβ25-35)诱导体外去血清培养的PC12细胞周期异常与凋亡的影响。方法:PC12细胞用常用的去血清培养使细胞同步于G0期,用MTT比色法分析细胞存活率,流式细胞仪检测分析... 目的:探讨姜黄素(Cur)对β-淀粉样肽(25-35)(βamyloid peptide-25-35,Aβ25-35)诱导体外去血清培养的PC12细胞周期异常与凋亡的影响。方法:PC12细胞用常用的去血清培养使细胞同步于G0期,用MTT比色法分析细胞存活率,流式细胞仪检测分析细胞周期与凋亡,Hoechst33258荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21基因的变化。结果:用不同终浓度(0,1.25,2.5,5,10,20μmol.L-1)Cur预处理去血清培养的PC12细胞1 h,再用Aβ25-35处理24 h,细胞存活率增加;Aβ25-35引起的S期细胞百分率明显减少,凋亡率明显降低(P<0.01),亚二倍体峰消失;核固缩、碎裂减少;p21 mRNA表达和P21蛋白表达增加。结论:Cur可以影响Aβ诱导的去血清培养PC12细胞周期分布及减少凋亡,可能与上调p21的表达有关。 展开更多
关键词 姜黄素 β-淀粉样肽25—35 pC12细胞 细胞周期 凋亡 p21
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OSCC和OLK患者口腔黏膜组织中IL-12p35和Ebi3的表达及意义 被引量:1
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作者 王方方 江南 +1 位作者 罗亮 蔡扬 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第3期335-339,共5页
目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)和口腔白斑(OLK)患者口腔黏膜组织中白细胞介素35(IL-35)α链p35亚基(IL-12p35)和β链EB病毒诱导基因3亚基(Ebi3)的表达及意义。方法选取OSCC患者34例、OLK患者32例及正颌手术、良性非炎症性肿瘤切除术患... 目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)和口腔白斑(OLK)患者口腔黏膜组织中白细胞介素35(IL-35)α链p35亚基(IL-12p35)和β链EB病毒诱导基因3亚基(Ebi3)的表达及意义。方法选取OSCC患者34例、OLK患者32例及正颌手术、良性非炎症性肿瘤切除术患者15例分别作为OSCC组、OLK组及正常组,取3组患者口腔黏膜组织,采用苏木精-伊红染色法(HE)染色进行形态学观察和病理学诊断,采用免疫组织化学超敏二步法(IHC)检测IL-12p35和Ebi3蛋白的表达。结果OSCC、OLK组患者口腔黏膜组织Ebi3、IL-12p35蛋白阳性表达率均高于正常组(P<0.001),且OSCC与OLK组间Ebi3蛋白的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.001);IL-12p35、Ebi3蛋白阳性表达分别与上皮异常增生程度呈正相关关系(r IL-12p35=0.370,P=0.001;r Ebi3=0.380,P<0.001);OSCC组中Ebi3、IL-12p35蛋白表达与患者淋巴结转移有关(P<0.05),但与其性别、年龄、分化程度及TNM分期无关(P>0.05)。结论IL-12p35和Ebi3在OSCC及OLK患者口腔黏膜组织中表达上调,IL-35可能在口腔黏膜癌变发展过程中起重要作用。 展开更多
关键词 白斑 口腔 口腔鳞状细胞癌 口腔黏膜 白细胞介素35 EB病毒诱导基因3 白细胞介素p35亚基
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糜烂型口腔扁平苔藓患者EBi3、IL-12p35的表达及临床意义
13
作者 孙丽美 《中外医疗》 2019年第7期1-3,6,共4页
目的探讨糜烂型口腔扁平苔藓患者EB病毒诱导基因3(EBi3)及IL-12p35的表达及临床意义。方法方便选取2016年1月—2018年2月该院收治的口腔扁平苔藓患者56例作为研究组,选取同期健康体检者60名作为对照组,采取免疫组织化学法检测其EBi3及IL... 目的探讨糜烂型口腔扁平苔藓患者EB病毒诱导基因3(EBi3)及IL-12p35的表达及临床意义。方法方便选取2016年1月—2018年2月该院收治的口腔扁平苔藓患者56例作为研究组,选取同期健康体检者60名作为对照组,采取免疫组织化学法检测其EBi3及IL-12p35阳性的表达情况,分析EBi3及IL-12p35与糜烂型口腔扁平苔藓患者临床病理特征的关系。结果研究组EBi3、IL-12p35阳性表达率分别为60.71%、41.07%,均高于对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);EBi3及IL-12p35蛋白表达与口腔扁平苔藓患者临床分型有关(χ~2=32.323,13.333,P<0.05),与年龄、性别、病程无关(P>0.05)。结论口腔扁平苔藓病损组织中EBi3、IL-12p35表达上调,其与口腔扁平苔藓患者临床分型有关,提示EBi3、IL-12p35可能在口腔扁平苔藓病损形成中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 糜烂型 口腔扁平苔藓 EBi3 il-12p35
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IL-12 p35 silenced dendritic cells modulate immune responses by blocking IL-12 signaling through JAK-STAT pathway in T lymphocytes
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作者 Xu, H. Zhang, Y. H. Hua, Y. B. Chen, T. Wang, H. Q. Wu, W. X. 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期423-423,共1页
关键词 JAK-STAT路径 淋巴细胞 RNA干涉 细胞因子 移植 免疫 il-12 p35 基因沉默
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原花青素对Aβ25-35诱导去血清培养PC12细胞细胞周期相关基因表达变化的影响
15
作者 梅寒芳 谢朝阳 祝其锋 《中国药理通讯》 2005年第3期35-35,共1页
目的探讨原花青素(Proanthocyanidins,PAC)对β-淀粉样肽(25—35)[βamyloid peptide-(25—35),Aβ25-35]诱导体外去血清培养PC12细胞周期相关基因p21、CDK4、磷酸化pRb、E2F1表达异常的影响。方法种入培养瓶的PC12细胞贴壁后... 目的探讨原花青素(Proanthocyanidins,PAC)对β-淀粉样肽(25—35)[βamyloid peptide-(25—35),Aβ25-35]诱导体外去血清培养PC12细胞周期相关基因p21、CDK4、磷酸化pRb、E2F1表达异常的影响。方法种入培养瓶的PC12细胞贴壁后用常用的去血清培养法使细胞同步于C0期,分为0对照组、Aβ25-35诱导组、PAC保护组,按实验需要分别在不同时间加入药物并收集细胞,通过RT—PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21、cdk4、pRb、E2F1基因表达水平的变化。 展开更多
关键词 AΒ25-35 pC12细胞 去血清培养 细胞周期 原花青素 基因表达变化 相关 Western 基因p21
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姜黄素对Aβ25-35诱导去血清培养PC12细胞p53、p21基因表达的影响
16
作者 谢朝阳 梅寒芳 祝其锋 《中国药理通讯》 2005年第3期34-35,共2页
目的:在β-淀粉样肽(25—35)[βamyloid peptide-(25—35),Aβ25—35]诱导去血清培养PC12细胞周期异常模型的基础上.研究姜黄素(Curcumin,Cur)对Ap25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞p53、p21基因表达的影响;方法:种入培养... 目的:在β-淀粉样肽(25—35)[βamyloid peptide-(25—35),Aβ25—35]诱导去血清培养PC12细胞周期异常模型的基础上.研究姜黄素(Curcumin,Cur)对Ap25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞p53、p21基因表达的影响;方法:种入培养瓶的PC12细胞贴壁后用常用的去血清培养法使细胞同步于G0期,每次实验分对照组(0)、诱导组和保护组,通过RT—PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p53、p2l基因表达水平的变化.结果用5μmol/LCur预处理细胞1h,再加入终浓度为25μmol/L Aβ25-35处理0~20h,与Aβ25-35诱导组比较, 展开更多
关键词 AΒ25-35 pC12细胞 p21基因表达 去血清培养 姜黄素 Western β-淀粉样肽 细胞周期异常 基因表达水平
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猪白细胞介素12 p35、p40亚基基因的克隆和序列分析
17
作者 袁远英 方强 +3 位作者 孙新 王雪梅 李柏青 夏惠 《蚌埠医学院学报》 CAS 2008年第6期644-647,共4页
目的:克隆猪白细胞介素(IL)-12p35、p40亚基基因,为制备猪囊尾蚴的复合基因疫苗奠定基础。方法:分别分离成年猪的外周血单个核细胞和脾细胞,培养10h后用IFN-γ(100ng/ml)刺激增殖12h,随后加入细菌脂多糖(1μg/ml)刺激培养3h,分别收集细... 目的:克隆猪白细胞介素(IL)-12p35、p40亚基基因,为制备猪囊尾蚴的复合基因疫苗奠定基础。方法:分别分离成年猪的外周血单个核细胞和脾细胞,培养10h后用IFN-γ(100ng/ml)刺激增殖12h,随后加入细菌脂多糖(1μg/ml)刺激培养3h,分别收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增猪IL-12p35、p40cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,经PCR和双酶切鉴定后进行序列测定。结果:猪IL-12p35、p40cDNAPCR产物电泳结果证明所克隆的基因分别为616bp和1011bp,基因测序结果与GenBank报道的基因序列各有一个碱基差异,但编码氨基酸无差异,证实分别为猪IL-12p35、p40cDNA编码基因。结论:成功克隆了猪IL-12p35、p40cDNA编码基因。 展开更多
关键词 囊尾蚴病 白细胞介素12 p35 p40 RT-pCR 基因克隆 序列测定
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Protective effects of proanthocyanidins on beta-amyloid peptide (25-35)-induced PC12 cell apoptosis by blocking S-phase and increasing p53 gene expression 被引量:2
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作者 Hanfang Mei Zhaoyang Xie Qifeng Zhu 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第2期108-112,共5页
BACKGROUND: Current studies related to the effects of proanthocyanidins on Alzheimer's disease have focused primarily on the signal transduction pathway of cellular apoptosis. However, the influence of p53 gene expr... BACKGROUND: Current studies related to the effects of proanthocyanidins on Alzheimer's disease have focused primarily on the signal transduction pathway of cellular apoptosis. However, the influence of p53 gene expression on cell cycle regulation, with regard to the protective mechanisms of proanthocyanidins, has not been reported. OBJECTIVE: To observe the effect of proanthocyanidins on cell cycle distribution, cellular apoptosis and p53 gene expression in β-amyloid peptide (25-35) (Aβ25-35)-induced PC12 cells cultured in serum-free media, and to investigate the molecular neuroprotective mechanisms of proanthocyanidins with regard to cell cycle regulation. DESIGN, TIME AND SETTING: A parallel, controlled, at the Institute of Biochemistry and Molecular Biology cellular, and molecular study was performed Guangdong Medical College from July 2006 to July 2008. MATERIALS: Proanthocyanidins were provided by Nanjing Xuezi Medical and Chemical Research Center, China; Aβ25-35 was provided by Sigma, USA; PC12 cells were provided by the Institute of Basic Medical Science, Academy of Military Medical Sciences; and rabbit anti-p53 polyclonal antibody was provided by Santa Cruz Biotechnology, USA. METHODS: PC12 cells were cultured in serum-free media for 24 hours. Cells from the model group were treated with 25 μmol/L Aβ25-35 for 24 hours. Cells in the drug protection group were pre-treated with 30 mg/L proanthocyanidins for 1 hour and then treated with 25 μmol/LAβ2^-35 for 24 hours. The control group was not treated. MAIN OUTCOME MEASURES: Flow cytometry was used to detect cell cycle distribution and rate of apoptosis; reverse-transcriptase polymerase chain reaction was used to detect p53 mRNA expression; and Western blot was used to detect p53 protein expression. RESULTS: After treating with 25 μmol/LAβ25-35 for 24 hours, the rate of apoptosis and the percentage of cells in S phase were significantly increased (P 〈 0.01 ), and p53 mRNA and protein expressions were decreased. Pretreatment with proanthocyanidins for 1 hour blocked the increase in apoptosis and the percentage of cells in S phase in Aβ25-35-induced PC12 cells (P 〈 0.01 ) and increased p53 mRNA and protein expressions. CONCLUSION: Proanthocyanidins blocked apoptosis and S-phase arrest in Aβ25-35-induced PC12 cells cultured in serum-free media. The protective mechanism could be related to increased p53 mRNA and protein expressions. 展开更多
关键词 pROANTHOCYANIDINS β-amyloid peptide (25-35 Alzheimer's disease pC12 cells p53 gene neural regeneration
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氯化钴对PC12细胞的凋亡作用 被引量:5
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作者 曾季平 王立祥 +3 位作者 胡晓燕 于清水 秦文 崔行 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期105-107,共3页
目的 确定氯化钴(CoCl2 )对PC12细胞的影响。方法 构建CoCl2 诱导的PC12细胞模型,检测CoCl2 对PC12细胞的毒性作用;将Caspases的抑制基因p3 5转染PC12细胞得到可稳定表达p3 5基因的细胞株PC12 p3 5 ,检测p3 5对CoCl2 诱导的PC12细胞... 目的 确定氯化钴(CoCl2 )对PC12细胞的影响。方法 构建CoCl2 诱导的PC12细胞模型,检测CoCl2 对PC12细胞的毒性作用;将Caspases的抑制基因p3 5转染PC12细胞得到可稳定表达p3 5基因的细胞株PC12 p3 5 ,检测p3 5对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用;检测Caspases特异性多肽抑制剂Z VAD FMK对CoCl2 诱导的PC12细胞的作用。结果 分别以10 0、3 0 0、5 0 0、70 0和10 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h或以5 0 0 μmol LCoCl2 分别诱导PC12细胞12、2 4、3 6、48和60h后,PC12细胞存活率均明显下降(P <0 0 1) ,并与CoCl2 诱导的时间和浓度呈正相关;细胞亚显微结构检测,流式细胞分析和DNA片段化结果也表明5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h可使PC12细胞出现明显凋亡特征。构建可稳定表达Caspase蛋白酶抑制基因p3 5的PC12细胞株,或分别加入5 0和10 0 μmol LCaspases多肽抑制剂Z VAD FMK预处理PC12细胞1h后,以5 0 0 μmol LCoCl2 诱导PC12细胞2 4h ,形态学观察结果,细胞存活率检测和流式细胞分析均表明p3 5基因和Z VAD FMK均可有效地抑制CoCl2 诱导的PC12细胞凋亡(P <0 0 1)。结论 CoCl2 可诱导PC12细胞凋亡。 展开更多
关键词 氯化钴 凋亡作用 Caspases pC12细胞凋亡 Caspase蛋白酶 Z-VAD-FMK CoCl2 流式细胞分析 pC12细胞株 p35基因 细胞存活率 DNA片段化 稳定表达 抑制基因 特异性多肽 亚显微结构 mol/L 500 24h 细胞模型 毒性作用 观察结果
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β淀粉样肽_(25-35)对PC细胞p53和bcl-2基因表达的影响 被引量:1
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作者 谢朝阳 梅寒芳 祝其锋 《广东医学院学报》 2005年第2期121-124,127,共5页
目的:观察β淀粉样肽2 5- 35(βamyloid peptide2 5- 35,Aβ2 5- 35)诱导PC12细胞凋亡和对p5 3及bcl- 2基因表达的影响。方法:采用终浓度分别为0、5、10、2 0 μmol/ L Aβ2 5- 35处理PC12细胞2 4 h,用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst3... 目的:观察β淀粉样肽2 5- 35(βamyloid peptide2 5- 35,Aβ2 5- 35)诱导PC12细胞凋亡和对p5 3及bcl- 2基因表达的影响。方法:采用终浓度分别为0、5、10、2 0 μmol/ L Aβ2 5- 35处理PC12细胞2 4 h,用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst332 5 8- PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,DNA电泳观察梯状条带(DNA- L adder) ,RT- PCR和Westernblot检测p5 3和bcl- 2基因表达变化。结果:随着Aβ2 5- 35剂量的增加,PC12细胞存活率降低,凋亡明显增加,p5 3基因表达增加,bcl- 2基因表达降低。结论:Aβ2 5- 35诱导PC12细胞凋亡可能与上调p5 3基因,下调bcl- 2基因有关。 展开更多
关键词 β-淀粉样肽25-35 pC12细胞 p53 BCL-2 基因表达
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