SOCS3通过PYK2信号通路调控小细胞肺癌的HIF-1α表达及增殖潜能

目的通过观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在小细胞肺癌中表达及增殖情况,探讨细胞因子信号途径抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)通过脯氨酸丰富的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,PYK2)信号通路对HIF-1α表达的影响。方法首先采用免疫荧光法检测转染Ad5-SOCS3后SOCS3的表达水平并绘制细胞生长曲线;其次建立实验用裸鼠移植瘤模型并分组,观察并记录移植瘤的生长速率、测量肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线图,并对瘤体称重;再次采用蛋白质印迹法检测HIF-1α、SOCS3、PYK2及Tyr402在裸鼠移植瘤中的表达情况。结果与Ad5转染组相比,Ad5-SOCS3转染组SOCS3蛋白的表达水平显著升高,小细胞肺癌细胞株和皮下移植瘤的增殖速率显著下降;而Ad5-SOCS3-HIF-1α共转染组的SOCS3蛋白表达水平、小细胞肺癌细胞株和皮下移植瘤的增殖速率均介于上述两组之间,且差异均有统计学意义(均P<0.05)。与未转染组相比,Ad5-SOCS3转染组和Ad5-SOCS3-HIF-1α共转染组小细胞肺癌HIF-1α表达水平、PYK2及其磷酸化活性形式Tyr402的表达水平均显著降低(均P<0.05);Ad5-SOCS3-HIF-1α共转染组的HIF-1α表达水平显著高于Ad5-SOCS3转染组(P<0.05),但两组PYK2和Tyr402的表达水平均无差异。结论 SOCS3可能通过调控HIF-1α表达水平来影响小细胞肺癌的增殖潜能。SOCS3可能通过PYK2信号通路调控HIF-1α的表达。

厄洛替尼作用后表皮生长因子受体突变的人肺腺癌HCC827细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞的杀伤敏感性

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼及EGFR下游主要分子对人肺腺癌HCC827细胞表面NKG2D配体表达的影响,探讨厄洛替尼作用于肺腺癌HCC827细胞后,细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞对HCC827细胞杀伤活性的变化。方法 HCC827细胞分为空白对照组及厄洛替尼5、10μmol·L-1组,应用流式细胞仪检测细胞表面NKG2D配体主要组织相容性复合体I类链相关蛋白(MIC)A、B及UL16结合蛋白(ULBP)1、2、3的表达。HCC827细胞培养24 h后,分别以EGFR下游分子磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂LY294002、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂SB203580、信号传导及转录激活因子3抑制剂STAT21、蛋白激酶C抑制剂Rottlerin进行作用,应用流式细胞仪分析HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3的表达,并与空白对照组进行比较。乳酸脱氢酶释放法检测CIK细胞对空白对照组和厄洛替尼组HCC827细胞的杀伤活性。结果与空白对照组比较,厄洛替尼5、10μmol·L-1组HCC827细胞表面NKG2D配体MICB、ULBP1表达显著增高(P<0.05),MICA、ULBP2、ULBP3表达差异无统计学意义(P>0.05);厄洛替尼5μmol·L-1组与10μmol·L-1组比较,HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,SB203580组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达差异无统计学意义(P>0.05),STAT21组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA、MICB表达显著增高(P<0.05),LY294002组的HCC827细胞表面NKG2D配体MICA表达显著降低(P<0.05),Rottlerin组的HCC827细胞表面NKG2D配体ULBP1表达显著增高(P<0.05)。同一效靶比时,CIK细胞对厄洛替尼作用后组HCC827细胞的杀伤率均显著高于未经药物作用组(P<0.05)。效靶比20∶1时经NKG2D单抗封闭后的CIK细胞对未经药物作用组和10μmol·L-1厄洛替尼作用后组HCC827细胞的杀伤率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论厄洛替尼能增高HCC827细胞表面NKG2D配体表达,增强CIK细胞的杀伤活性。

富脯氨酸蛋白酪氨酸激酶2在机械通气肺损伤致病机制中作用的研究

目的:构建大鼠机械通气肺损伤(VILI)模型,观察富脯氨酸蛋白酪氨酸激酶2(Pyk2)在VILI致病过程中的信号启动作用以及Pyk2特异性抑制剂预给药对VILI的影响。方法:30只健康SD大鼠,随机分为3组,每组10只,A组采用8ml/kg潮气量机械通气;B组采用40ml/kg潮气量机械通气;C组采用40ml/k g潮气量机械通气,并在机械通气前1小时腹腔注射TAT-Pyk2-CT;3组呼吸频率均为80次/分钟,吸/呼比为1:1,PEEP为0mmHg,吸入气体为室内空气。机械通气2小时后处死大鼠,取肺组织光镜下观察,测定髓过氧化物酶活性、磷酸化p38水平;收集支气管肺泡灌洗液测定总蛋白、肿瘤坏死因子-α水平,并进行白细胞计数。结果:与A组比较,B组支气管肺泡灌洗液总蛋白、白细胞计数、肿瘤坏死因子-α及肺组织髓过氧化物酶活性、磷酸化p38水平均显著升高(均P<0.05),肺组织病理学改变严重;与B组比较,C组上述指标均降低(均P<0.05),肺组织病理学改变明显减轻。结论:Pyk2特异性抑制剂TAT-Pyk2-CT预先给药可减轻大鼠VILI,其机制与抑制了p38通路的激活有关。

白细胞介素-2诱导型酪氨酸激酶抑制剂研究进展

白细胞介素-2诱导型酪氨酸激酶(ITK)属于在肝癌细胞中表达的酪氨酸激酶(Tec)家族,主要在T细胞中表达。ITK通过参与T细胞受体(TCR)信号传导,在下游发挥作用,控制促炎细胞因子的表达。研究表明,ITK与自身免疫性疾病的发病有关。通过使用ITK抑制剂,可以使免疫性炎症得到抑制。通过对ITK的结构、在T细胞中的信号通路及其在炎症中的作用进行介绍并综述ITK抑制剂的研究进展,旨在为ITK抑制剂的开发提供参考。

JNK信号通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质iNOS表达的影响

目的：研究JNK在1-甲基4-苯基-1，2，3，6-四氢毗啶（MPTP）所致小鼠帕金森病（PD）模型中对诱导型一氧化氮合酶（iNOs）表达的调控作用，探讨PD黑质多巴胺（DA）能神经元变性失活的可能机制。方法：采用神经毒素MPTP制备亚急性PD小鼠模型，健康雄性C57BL／6N小鼠随机分为模型组、JNK抑制剂组和对照组，采用行为学观察、免疫组织化学和免疫印迹法，观察模型小鼠行为学变化及中脑黑质酪氨酸羟化酶（TH）、iNOS和磷酸化cJun（p-c-Jun）的表达变化；观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125对上述变化的影响。结果：与对照组相比，模型小鼠出现典型PD样症状。中脑黑质区TH阳性神经元下降约65％，中脑黑质TH表达水平显著降低约75％；黑质区iNOS和p-c-Jun阳性细胞明显增加，且矿pJun特异性表达于细胞核，中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显升高。经SP600125处理后，模型小鼠PD样症状减轻，与对照组比较，TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15％和25％，与模型组比较，黑质区iNOS与p-c-Jun阳性细胞减少，且p-c-Jun仅表达于胞质，中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显下降。结论：JNK通路在MPTP诱导的亚急性PD小鼠黑质iNOS表达中可能起重要的调控作用；JNK通路特异性抑制剂SP600125可能对帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用。

酪氨酸蛋白激酶2特异性抑制剂AG490对妊娠期高血压综合征大鼠血管内皮细胞分泌功能的作用机制研究

目的探讨酪氨酸蛋白激酶2特异性抑制剂(AG490)通过抑制酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)/细胞因子信号转录抑制因子-1(SOCS1)信号通路对妊高征大鼠血管内皮细胞分泌功能的影响。方法用静脉注射亚硝基左旋精氨酸甲酯法制备妊娠期高血压综合征大鼠模型。按照体重将造模成功大鼠随机分为2组:妊娠对照组和实验组,每组12只;另取12只未妊娠大鼠作为空白对照组。妊娠第18天,实验组大鼠注射5 mg·kg-1的AG490(0.2 mL),空白对照组和妊娠对照组均注射等量0.9%NaCl,3组大鼠均连续干预7 d。以无创尾动脉血液监测仪检测尾动脉血压,以酶联免疫吸附法检测一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,以蛋白印迹法检测胎盘组织JNK2/STAT3/SOCS1蛋白表达水平。结果妊娠25 d,空白对照组、妊娠对照组和实验组大鼠收缩压水平分别为(104.29±8.52),(138.43±8.15)和(118.09±7.27)mmHg;上述3组的NO水平分别为(26.27±3.42),(15.32±2.76)和(22.37±3.07)μmol·L-1;上述3组的TNF-α水平分别为(83.47±26.45),(141.03±28.14)和(114.26±22.37)ng·L-1;上述3组的p-JAK2/JAK2蛋白表达比值分别为0.23±0.08,0.61±0.13和0.42±0.07;上述3组的p-STAT3/STAT3蛋白表达比值分别为0.31±0.06,0.64±0.15和0.46±0.08;上述3组的SOCS1蛋白相对表达水平分别为0.25±0.08,0.58±0.10和0.41±0.07。上述指标:妊娠对照组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与妊娠对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论AG490干预妊高症可抑制JAK2/STAT3/SOCS1通路激活,改善血管内皮分泌功能,调节细胞因子分泌,降低收缩压水平。

依布替尼的临床应用及相关不良反应研究进展

依布替尼(Ibrutinib)是一种小分子激酶抑制剂,通过共价结合的方式选择性、不可逆性地抑制布鲁顿酪氨酸激酶(bruton tyrosine kinase,BTK)和白细胞介素-2诱导型T细胞激酶(interleukin-2-inducible T-cell kinase,ITK)的活性,损害B细胞和T细胞的功能。BTK是表达于多种造血细胞、B细胞淋巴瘤和白血病细胞的B细胞受体(B cell receptor,BCR)信号激酶[1]。