定位表达的新城疫病毒HN蛋白对荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫作用

背景与目的新城疫病毒HN蛋白是新城疫病毒产生溶瘤作用的重要免疫原。在前期体外实验基础上,比较定位表达细胞不同部位的HN蛋白体内抗肿瘤免疫作用。方法通过构建荷瘤小鼠,瘤内注射定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN蛋白,即胞浆型(Cy-HN)、跨膜型(M-HN)、分泌型(Sc-HN)重组真核表达质粒,比较荷瘤小鼠的肿瘤生长速度,脾淋巴细胞增殖反应和细胞毒T细胞活性。结果瘤内注射跨膜型重组真核表达质粒的荷瘤小鼠肿瘤生长缓慢,与瘤内注射胞浆型和分泌型重组真核表达质粒的荷瘤小鼠相比有统计学差异(第18天:P=0.022;第21天:P<0.01),同时,该组荷瘤小鼠的淋巴细胞增殖反应和细胞毒T细胞活性也较高[M-HNvsCy-HN,P=0.019;M-HNvsSc-HN,P=0.043;M-HNvspcDNA3.1(+),P<0.01]。结论定位表达于细胞不同部位的HN蛋白体内抗肿瘤免疫作用存在差异,跨膜型HN蛋白的重组DNA质粒能够提高荷瘤小鼠的特异性细胞免疫应答。

再障饮配合西药治疗再生障碍性贫血临床观察

目的 :研究中药复方再障饮对慢性再生障碍性贫血患者免疫功能的影响。方法 :测定再障饮治疗前后患者T淋巴细胞亚群、血清肿瘤坏死因子 (TNF α)、白细胞介素 2 (IL 2 )的水平 ,并用常规治疗组和正常组做对照分析其变化规律。结果 :再障饮治疗前CD4 明显降低、CD8升高、CD4 /CD8降低 ;TNF α、IL 2均升高 ,与正常组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。再障饮治疗后CD4 升高、CD8降低、CD4 /CD8升高 ;TNF α、IL 2均降低 ,与治疗前及对照组比较差异均有显著性 (P <0 0 5 )。结论 :再障饮可能通过改善T淋巴细胞比例及减少TNF α、IL 2等造血负调控因子的释放 ,解除对造血功能的抑制而促进造血功能的恢复。

血淋巴细胞亚群与脑星形细胞瘤病理类型及预后的关系

本文报道了40例脑星形细胞瘤患者淋巴细胞亚群的检测结果,按病理类型分组与正常人30例进行对照分析,全部病例进行随访,随访期30～36个月,平均34个月。结果表明:脑星形细胞瘤患者CD_4^+/CD_8^+值显著低于对照组(P<0.01),其中Ⅲ～Ⅳ级组CD_4^+值明显降低,CD_8^+值显著升高,CD_4^+/CD_8^+呈倒置;复发组CD_8^+明显增高,CD_4^+/CD_8^+值下降(1.13±0.12);预后不良组CD_4^+/CD_8^+值明显低于预后良好组。认为:淋巴细胞亚群的检测可作为估计脑星形细胞瘤恶性程度和判断预后的指标之一。

干扰肿瘤微环境对细胞毒性T淋巴细胞瘤体内归巢和杀伤活性的影响

目的探讨应用低剂量环磷酰胺(cyclophosphamide,CYC)干扰荷瘤小鼠体内微环境对改善过继回输的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)瘤体内归巢和杀伤活性的作用。方法建立C57BL/6荷瘤小鼠模型并分为对照组、CYC注入(CYCI)组、0.9%Na Cl溶液注入(NSI)+CTL组和CYCI+CTL组,每组40只,分别给CYCI组、CYCI+CTL组每只小鼠腹腔注入CYC(20mg/kg),NSI+CTL组小鼠注入等量0.9%Na Cl溶液。检测注射前后不同时间小鼠瘤体内调节性T细胞(Treg)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)水平变化。于注射后第4天回输CFSE-CTL,每只0.2 ml,含5×l06个细胞。流式检测对比NSI+CTL组和CYCI+CTL组瘤体内CFSE-CTL比例。结果 NSI+CTL组小鼠Treg、IL-10、TGF-β水平随着瘤体增长而逐渐增高;CYCI+CTL组比NSI+CTL组回输的CFSE-CTL在肿瘤内归巢明显增加和持久(P<0.05)。各组肿瘤体积除对照组和CYCI组外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论提前应用低剂量CYC干预荷瘤小鼠体内微环境,可降低瘤体内Treg、IL-10和TGF-β水平,使过继回输的CTL在肿瘤中的归巢聚集明显增强,杀伤肿瘤效率提高。

消化系统恶性肿瘤患者细胞免疫功能分析及其临床意义

目的:检验消化系统恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群,了解细胞免疫功能状态及其变化。方法:用实用McAb-A-E直接法检验消化系统恶性肿瘤患者72例及37例健康正常对照组的外周血抗凝血CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+指标。并将恶性肿瘤组与健康正常对照组进行比较。结果:恶性肿瘤组CD3(+%)、CD4(+%)、CD8(+%)和CD4+/CD8+分别为:63.88±14.26、34.44±12.14、37.42±10.01和0.96±0.38;健康对照组分别为:69.24±9.46、44.41±5.96、33.30±4.38和1.35±0.20。恶性肿瘤组与健康对照组、正常值CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+相比,恶性肿瘤组(食道癌、胃癌、肝癌、肠癌)CD3+和CD4+细胞阳性率和CD4+/CD8+比值均降低,CD8+细胞阳性率增高,方差分析结果均P<0.05和0.01,有统计学意义。结论:消化系统恶性肿瘤患者的CD3+、CD4+细胞阳性率和CD4+/CD8+比值均降低,CD8+细胞阳性率增高,说明消化系统恶性肿瘤患者的细胞免疫功能处于抑制状态。

子宫内膜异位症患者免疫功能的变化

目的 为了探讨子宫内膜异位症发病的免疫机制。方法 采用间接免疫荧光法对子宫内膜异位症患者外周血中的 Ｔ细胞亚群、 Ｂ 细胞， Ｎ Ｋ 细胞及 Ｉ Ｌ－ ２ Ｒ＋ 细胞进行检测，并采用酶联免疫双抗体夹心法对子宫内膜异位症患者外周血及腹腔液中的 Ｔ Ｎ Ｆ－ α浓度进行了检测。结果 子宫内膜异位症患者外周血中 Ｔ 细胞亚群失衡、 Ｂ 细胞增多，外周血及腹腔液中的 Ｔ Ｎ Ｆ－ α浓度显著升高。结论 外周血中 Ｔ 细胞亚群失衡、 Ｂ 细胞增多，腹腔液中 Ｔ Ｎ Ｆα浓度升高可能与子宫内膜异位症的发生，发展密切相关。

颅内肿瘤患者免疫功能指标的初步观察

木文报告96例颅内肿瘤病人外周血常规免疫指标的测定,并与53例正常人相对比。结果,脑瘤组与对照组两者间的淋巴细胞转化率 (LTT),E--玫瑰花环形成率 (E-RFC)、淋巴细胞计数(Lym) 均呈现极显著性差异 (P<0.001),免疫球蛋白IgG和补体C_3也呈现显著性差异 (P<0.05)。

不同T淋巴细胞亚群在恶性肿瘤患者外周血中的临床检测价值

目的探讨恶性肿瘤患者外周血中不同T淋巴细胞检测的临床价值。方法选择在我院接受治疗的147例恶性肿瘤患者作为观察组,选择同期在我院接受体检的健康人群80例作为对照组,检测并比较两组外周血中CD3^+、CD4^+、CD8^+不同亚群T细胞以及CD4^+/CD8^+水平差异。结果观察组患者治疗前CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+均明显低于对照组(P<0.05),治疗后CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+均明显高于治疗前(P<0.05),但仍明显低于对照组(P<0.05)。观察组患者治疗前后CD8^+比较及与对照组之间比较均无明显差异(P>0.05)。观察组内各不同癌症T淋巴细胞水平不受肿瘤类型影响。结论恶性肿瘤患者外周血T细胞亚群不同指标的检测有助于了解患者的细胞免疫功能状态,从而为患者治疗方案的确定和调整以及治疗效果的评估提供参考依据。

巨噬细胞在颅内动脉瘤发生发展中的作用研究进展

大量研究表明慢性炎性反应是颅内动脉瘤(IA)形成和破裂的核心环节,作为IA病变中最多见的炎症细胞,巨噬细胞通过多种途径调控IA的发生、发展。骨髓来源单核细胞分化而来的巨噬细胞及组织固有巨噬细胞浸润血管壁;浸润后的巨噬细胞受不同刺激极化为以M1型和M2型巨噬细胞为主的各类极化表型;各种极化表型的巨噬细胞既能通过释放细胞因子和调控其他免疫细胞调控炎性反应,也能释放不同细胞因子作用于细胞外基质重塑过程,从而调控颅内动脉瘤的发生、发展。临床上,以巨噬细胞为靶点的检测和治疗手段已取得一定进展。本文为深入理解IA发病机制和寻找阻止颅内动脉瘤形成和破裂的药物治疗提供理论依据。

抗T淋巴细胞单克隆抗体对再生障碍性贫血患者细胞免疫功能的调节作用

为了探讨再生障碍性贫血(AA)的免疫发病机制及抗T淋巴细胞单克隆抗体(MdAb-T)的免疫调节治疗作用,采用酶联免疫法和放射免疫法,检测30例AA患者McAb-T治疗前后周围血T淋巴细胞亚群,血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)水平及其中10例AA外周血单个核细胞(PBMNC)体外诱生TNF-α和IL-2水平的变化。结果表明:治疗前AA患者T淋巴细胞亚群CD4/CD8比值降低或倒置(P<0.001);淋巴细胞HLA-DR抗原表达增高(P<0.001);血清TNF-α水平显著增高(P<0.01);PBMNC诱生的TNF-α和IL-2水平均明显高于正常对照(P<0.01)。治疗后T淋巴细胞亚群比例恢复正常,血清TNF-α和PBMNC诱生的TNF-α和IL-2水平降低,与对照组比较无显著差异(P>0.05)。T淋巴细胞亚群比例失调和TNF-α与IL-2等造血调控因子异常分泌在AA发病机制中起重要作用。McAb-T能发挥特异性的免疫调节作用,解除T淋巴细胞及相关细胞因子对造血功能的直接或间接抑制作用。

DC-CIK细胞免疫联合化疗对结肠癌CME术后患者的肿瘤标志物和淋巴细胞免疫的影响

目的 探讨结肠癌患者完整结肠系膜切除术(CME)术后应用树突状细胞与同源细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK细胞)免疫联合化疗对肿瘤标志物和淋巴细胞免疫的影响。方法 100例结肠癌行CME术后的患者,根据治疗方案不同分为研究组(42例)与对照组(58例)。研究组采用DC-CIK细胞免疫联合常规化疗,对照组采用常规化疗。对比两组治疗前后血清中肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、糖类抗原242(CA242)、糖类抗原199(CA199)、人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)]及淋巴细胞免疫指标(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)。结果 治疗后,研究组CA199、CA242、CEA、HIF-1α水平分别为(46.55±7.09)U/ml、(29.52±4.13)U/ml、(11.27±1.92)ng/ml、(126.46±15.46)pg/ml,对照组CA199、CA242、CEA、HIF-1α水平分别为(73.87±9.36)U/ml、(40.38±6.55)U/ml、(18.98±2.61)ng/ml、(212.58±27.63)pg/ml。治疗后,研究组血清中CA199、CA242、CEA、HIF-1α水平均显著低于本组治疗前,对照组血清中CEA水平显著低于本组治疗前, CA199、CA242、HIF-1α水平显著高于本组治疗前,差异具有统计学意义(P<0.05);且研究组治疗后血清中CA199、CA242、CEA、HIF-1α水平均显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+分别为(74.46±3.52)%、(43.59±6.93)%、(25.41±3.06)%、(1.59±0.41),对照组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+分别为(50.43±7.62)%、(34.36±10.95)%、(35.63±3.21)%、(0.99±0.40)。治疗后,研究组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著高于本组治疗前, CD8+显著低于本组治疗前,对照组CD3+显著低于本组治疗前, CD8+显著高于本组治疗前,差异具有统计学意义(P<0.05);对照组治疗后CD4+、CD4+/CD8+与本组治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05);研究组治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著高于对照组, CD8+显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 DC-CIK细胞免疫联合化疗用于结肠癌CME术后患者,可改善淋巴细胞免疫应答,使血清肿瘤标志物水平下降。

外周血淋巴细胞免疫表型检验评价恶性肿瘤患者细胞免疫功能的价值分析

目的:分析外周血淋巴细胞免疫表型检验评价恶性肿瘤患者细胞免疫功能的价值。方法:选择86例恶性肿瘤患者作为观察组,选取90例体检健康者作为对照组。采集入选者空腹静脉血,通过流式细胞仪对淋巴细胞免疫表型检验。分析两组及观察组中不同化疗周期及肿瘤转移与否患者的淋巴细胞免疫表型检测结果。结果:观察组CD3^+CD4^+、总T淋巴细胞低于对照组,CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+高于对照组(P<0.05);肿瘤转移患者CD3^+CD4^+低于肿瘤未转移患者,CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+高于肿瘤未转移患者(P<0.05);未化疗、化疗1~6周期患者CD3^+CD4^+低于对照组,化疗>6周期患者CD3^+CD4^+高于未化疗患者;未化疗、化疗1~6周期患者CD3^+CD8^+高于对照组,化疗>6周期患者CD3^+CD8^+低于未化疗患者;未化疗、化疗不同周期患者CD3^+CD56^+高于对照组;未化疗患者总T淋巴细胞低于对照组,不同化疗周期患者CD3^+CD56^+、总T淋巴细胞高于未化疗者(P<0.05)。结论:细胞免疫功能在肿瘤发生发展中起到主导作用,能够通过检验CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+、总T淋巴细胞评估患者细胞免疫功能状态,利于判断患者预后。

燃煤型砷中毒患者外周血淋巴细胞表型特征及临床意义

目的探讨燃煤型砷中毒患者免疫功能改变及其规律，为肿瘤风险评估提供依据。方法70例患者均系贵州省黔西南州燃煤型砷中毒高发区既往经临床及实验室确诊的燃煤型砷中毒病例，其中男性44例。女性26例．年龄24-71岁，平均年龄41岁。接病程及是否癌变分为4组：〈10年组，23例；10～19年组，21例；≥20年组，20例；癌变组（病程≥20年），6例。对照组为健康职工和大学生自愿者，26例。采静脉血，流式细胞仪分析各组人群外周血淋巴细胞亚群CD3^＋（总T细胞）、CD3^＋CD4^＋（诱导性／辅助性T细胞）、CD3^＋CD8^＋（抑制性／细胞毒性T细胞）、CD19^＋（B淋巴细胞）和CD56^＋CD16^＋（自然杀伤细胞，NK）细胞组成比例，并对淋巴细胞膜人类白细胞组织相容性抗原-DR（HLA—DR）、细胞表面抗原（CD）25和CD38分子表达率进行检测。结果〈10年组、10～19年组、≥20年组和癌变组人群外周血CD3^＋细胞百分率分别为（63．76±9．32）％、（55．63±12．97）％、（51．00±12．23）％、（49．83±9．89）％，均低于对照组[（68．10±8．62）％]，组间比较差异有统计学意义（F=12．862，P〈0．05）。CD3^＋CD4^＋细胞比例上述各组分别为（31．35±6．62）％、（28．38±8．66）％、（24．13±6．46）％、（19．17±4．96）％，明显低于对照组[（34．28±7．32）％]，组间比较差异有统计学意义（F=10．455，P〈0．05）。≥20年组和癌变组CD19^＋细胞百分率[（9．00±5．32）％、（9．00±3．29）％]低于对照组和〈10年组[（11．80±3．43）％、（12．35±4．53）％]，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；其余各组之间两两比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。癌变组淋巴细胞CD25和CD38表达率[（17．96±4．98）％、（41．38±8．54）％]明显高于对照组[（13．10±3．38）％、（28．60±5．51）％]，组间两两比较差异有统计学意义（P〈0．05）；HLA—DR表达率在10—19年组[（18．20±6．25）％]明显高于对照组[（10．72±7．06）％]和〈10年组[（11．78±5．13）％]，≥20年组[（20．30±8．01）％]与癌变组[（21．82±10．97）％]在同一水平。结论砷所致机体细胞免疫功能削弱可能是燃煤型砷中毒患者皮肤癌变的重要机制．细胞免疫功能状态可作为燃煤砷中毒患者皮肤癌变的预警信号。

合欢皮总皂苷对H22荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响

目的:观察合欢皮总皂苷对H22荷瘤小鼠CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群、细胞因子白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,凋亡诱导因子(Fas),凋亡诱导因子配体(Fas L)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响,探讨其对细胞免疫功能的干预机制。方法:昆明种小鼠60只随机分为正常组、模型组、环磷酰胺组、合欢皮总皂苷高、中、低剂量组,建立小鼠H22荷瘤模型。给药组分别按环磷酰胺20 mg·kg-1·d-1,合欢皮总皂苷4,2,1 mg·kg-1·d-1ip,连续治疗11 d后,检测抑瘤率,血清IL-2,TNF-α水平,免疫组化染色检测肿瘤细胞Fas,Fas L和PCNA蛋白的表达;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态。结果:与模型组比较,合欢皮总皂苷高、中、低剂量组小鼠移植瘤的平均质量均显著下降(P<0.05,P<0.01),合欢皮总皂苷中剂量组能明显提高CD4+T细胞,CD8+T细胞数量(P<0.05,P<0.01),对CD4+/CD8+无影响,合欢皮总皂苷中、高剂量组IL-2水平明显上升(P<0.05),TNF-α水平无变化,合欢皮总皂苷各剂量组Fas L,PCNA蛋白表达显著降低(P<0.01),中、高剂量组Fas表达水平显著升高(P<0.01)。结论:合欢皮总皂苷能够调节细胞免疫功能,其机制可能与其上调CD4+,CD8+T细胞亚群,促进IL-2分泌,提高Fas蛋白表达并抑制Fas L,PCNA蛋白表达有关。

外周血淋巴细胞免疫表型检验在恶性肿瘤患者细胞免疫功能评价中的应用价值

目的探讨外周血淋巴细胞免疫表型检验在恶性肿瘤患者细胞免疫功能评估中的应用价值。方法选取荆州市第二人民医院150例恶性肿瘤患者及150例健康体检者作为研究对象,分别纳入观察组与对照组。采集两组研究对象的外周静脉血,对外周血淋巴细胞进行免疫表型检验,对比两组的检测结果。同时对观察组不同化疗周期者、有无肿瘤转移者的检测结果进行对比分析。结果观察组人群的总淋巴细胞绝对值、总T淋巴细胞、CD3^+CD4^+比例均显著低于对照组(t值分别为19.127、4.147、5.198,P值均<0.05);CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+、CD3^-CD56^+水平均显著高于对照组(t值分别为5.273、8.656、3.946,P值均<0.05)。两组的CD3^-CD19^+水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。未化疗者的总T淋巴细胞、CD3^+CD4^+、CD3^+CD56^+比例最低,而随着化疗周期的增加,患者总T淋巴细胞、CD3^+CD4^+、CD3^+CD56^+、CD3^-CD56^+比例均逐渐升高,CD3^+CD8^+比例逐渐降低。肿瘤转移组患者与未转移组患者的总T淋巴细胞、CD3^-CD19^+比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤转移组患者的CD3^+CD4^+比例显著低于未转移组(t=2.441,P<0.05),而CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+、CD3^-CD56^+比例均显著高于未转移组(t值分别为2.860、3.087、3.061,P<0.05)。结论细胞免疫功能在恶性肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用,在临床上可通过外周血淋巴细胞免疫表型检验来评估肿瘤患者的细胞免疫功能状态。

人肝癌浸润淋巴细胞的分离培养及其CD8阳性亚群特性研究

目的从原发性肝癌(HCC)患者术后的肿瘤组织中提取、培养肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs),进一步分选、扩增其CD8阳性亚群(CD8+TILs),并研究其特性。方法标本取自38例肝癌根治术后的肿瘤组织,免疫组织化学染色观察癌巢组织和癌旁组织TILs的分布,通过机械剪碎、混合酶消化和不连续密度梯度离心法分离提取TIL前体细胞。采用重组人白介素2进行激活,抗CD3、抗CD28抗体进行共刺激扩增,用磁珠分选出CD8+TILs,CCK8法观察CD8+TILs对肝癌细胞Hep3B、HepG2生长的影响。结果 TILs富集于癌旁组织,12例成功提取TILs,6例培养并实现大量扩增,扩增17~50倍后细胞数为(1.2~2.5)×10^8个,CD3+细胞比例为(77.53±16.37)%,CD3+CD4+比例为(27.08±21.56)%,CD3+CD8+比例(44.55±12.73)%,细胞活力为(90.5±3.0)%,CD8+TILs对肿瘤细胞系Hep3B、HepG2有较强的生长抑制作用。结论本研究成功建立高效提取、培养CD8+TILs的方法,获得具有高抗肿瘤活性的CD8+TILs,为晚期肝癌等实体瘤的过继免疫治疗提供研究基础。

肿瘤浸润淋巴细胞免疫治疗的临床研究进展

肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)具有高度异质性,TIL的过继性细胞免疫治疗作为免疫治疗的重要手段之一,通过对TIL体外扩增后回输,在多种晚期实体肿瘤中具有治疗作用,且不良反应较少。TIL同时还具有评价抗肿瘤治疗预后的作用。现通过对TIL疗法在不同癌种的临床研究进展、TIL作为肿瘤预后的预测指标的研究进展以及TIL疗法面临的问题进行综述,旨在为后续研究以及TIL疗法在临床上的使用提供依据。