质粒DNA单次脾内注射制备单克隆抗体

探索一种新的快捷有效DNA免疫制备单克隆抗体的方法,辅助实现构建高通量无蛋白纯化体系单克隆抗体制备和筛选。分别通过“重叠PCR”和“无模板PCR”在pVAX1真核载体中分别引入IL-2信号肽、IgG kappa链信号肽构建分泌型真核表达载体,将代表抗原基因的profilin1基因克隆到经改造带有信号肽基因的表达载体上,构建重组质粒pVAX-IL2-prof1和pVAX-Igκ-prof1,单次脾内注射重组质粒DNA免疫BALB/c小鼠。经过细胞融合、ELISA筛选,获得两株抗profilin1的单克隆抗体。单抗亚型分别为IgM和IgG3。单次脾内质粒DNA免疫便捷有效,是制备单克隆抗体的有效方法。

抗人CD4单克隆抗体制备及其抗HIV-1功能鉴定

目的制备具有抗HIV-1功能的抗人CD4单克隆抗体。方法构建人CD4真核表达质粒pcDNA3.1-hCD4,将该质粒DNA免疫BALB/c小鼠。免疫前血清作为阴性对照,通过HIV-1假病毒中和实验和ELISA方法检测多克隆抗体血清。通过杂交瘤技术制备鼠抗CD4单克隆抗体,HIV-1假病毒中和实验进行筛选。通过不同亚型假病毒中和实验和CD4D1D2蛋白ELISA方法分别检测腹水纯化单克隆抗体的中和活性和特异性结合力。结果 DNA免疫后第6周的多抗血清100倍稀释后对HIV-1假病毒的抑制率可达75%,第8周其抑制率可上升至95%。CD4D1D2蛋白ELISA结果显示,免疫后第4周多抗血清就显示出同CD4蛋白较强的特异性结合。共获得160余株对HIV-1假病毒B′、BC、AE亚型具有中和活性的单克隆抗体。选择其中中和活性较高的8株制备纯化腹水单抗,其中5株单抗IC50小于130μg/ml。ELISA检测结果显示腹水纯化单抗与CD4D1D2蛋白可以特异性结合。结论获得了具有抗HIV-1假病毒的抗CD4单克隆抗体。具有HIV-1广谱中和活性的抗CD4抗体可用于研发有效的被动免疫制剂,控制艾滋病传播。