蚊母草提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外运动能力的影响

目的研究蚊母草提取物(Extracts from Veronica peregrina L.,EVP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外运动能力的影响。方法采用MTT法检测EVP 40、80、160、320、640 g·L^(-1)生药浓度(相当于提取物浓度0.168、0.336、0.672、1.344、2.688 mg·mL^(-1))对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖的影响,计算各EVP处理组的细胞相对存活率。将MDA-MB-231细胞分为空白组、阳性对照组(BB-94组,终浓度为20 nmol·L^(-1))、EVP不同浓度组(终质量浓度为生药40、80、160 g·L^(-1)的EVP)。采用AP48 Chamber system和OrisTM细胞侵袭试剂盒分别检测EVP对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外迁移和侵袭能力的影响;鬼笔环肽(Phalloidin)染色法观察MDA-MB-231细胞骨架F-actin排列情况;Western Blot法检测细胞Runx2、磷酸化Runx2(p-Runx2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;采用SensoLyte^(■)570 Generic MMP检测试剂盒分析MDA-MB-231细胞的MMPs活性。结果EVP的终浓度分别为生药40、80、160、320、640 g·L^(-1)时,MDA-MB-231细胞相对存活率分别为(105.63±4.62)%、(92.81±8.34)%、(103.32±17.47)%、(69.08±4.32)%、(41.82±12.63)%,低浓度EVP对MDA-MB-231细胞的生存无明显影响,后续研究中采用生药40、80、160 g·L^(-1)作为各EVP处理组的终浓度。与空白组相比,BB-94组及EVP生药40、80、160 g·L^(-1)浓度组的迁移细胞数显著减少(P<0.01)。空白组的绝大多数细胞可突破基质胶,侵袭至中央空白处,几乎完全覆盖中央圆形无细胞区域;而BB-94组及EVP各浓度组的MDA-MB-231细胞侵袭则明显被抑制,均不能完全侵袭至中央区域,且中央无细胞区域的大小呈现一定的剂量依赖性。空白组MDA-MB-231细胞中,F-actin沿细胞长轴整齐排列,F-actin在细胞周边聚集成应力纤维;而BB-94组及EVP各浓度组的MDA-MB-231细胞内,F-actin均呈无规则的紊乱排列,应力纤维明显减少。与空白组相比,EVP生药40、80、160 g·L^(-1)浓度组MDA-MB-231细胞的Runx2蛋白表达无明显变化(P>0.05),而p-Runx2、MMP-9蛋白表达均显著下调(P<0.01),MMPs活性明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论EVP可显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外运动能力,具有潜在的抗转移作用,其机制可能与抑制Runx2活化,进而干扰其下游MMP-9等靶基因表达有关。

白皮杉醇对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其诱导凋亡作用的实验研究

目的:探究白皮杉醇对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及相关的作用机制。方法:采用CCK8法检测不同浓度的白皮杉醇对SKOV-3细胞增殖能力的影响;采用细胞划痕实验检测不同浓度的白皮杉醇对SKOV-3细胞迁移能力的影响;采用Transwell侵袭实验检测不同浓度的白皮杉醇对SKOV-3细胞侵袭能力的影响;采用DAPI染色法检测不同浓度白皮杉醇对SKOV-3细胞凋亡的影响;采用Western blot实验检测SKOV-3细胞核增殖抗原(Ki67)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BCL-2相关X蛋白(Bax)和活化的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase-3)的表达水平。结果:白皮杉醇能够明显抑制SKOV-3细胞的增殖能力,明显降低SKOV-3细胞的迁移能力和侵袭能力;明显提高SKOV-3细胞的凋亡水平;白皮杉醇干预后,SKOV-3细胞Ki67和Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达显著升高。结论:白皮杉醇能够有效抑制SKOV-3细胞的增殖、迁移和侵袭,并能够诱导SKOV-3细胞凋亡。

中药紫龙金对前列腺癌细胞体外增殖和侵袭的抑制作用

目的探讨复方中药紫龙金对前列腺癌的体外增殖和侵袭的抑制作用。方法通过绘制生长曲线、软琼脂集落生长试验评价紫龙金对人前列腺癌细胞系的增殖抑制、集落生长抑制作用；应用Tran- sWell细胞培养小室评价紫龙金的侵袭抑制作用；应用Western blot方法检测紫龙金对细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和上皮型钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-Cadherin)表达的影响。结果紫龙金对3种前列腺癌细胞系均具有剂量依赖性增殖抑制作用,紫龙金0．5 mg/ml作用6天对LN- CaP、DU-145和PC-3的抑制率分别为78．0%、87．9%和81．0%；紫龙金0．1 mg/ml可以显著抑制DU-145细胞的软琼脂集落生长,抑制率为87．9%；紫龙金0．5 mg/ml作用12h对DU-145细胞体外侵袭抑制率为44．5%；紫龙金可以剂量依赖性上调LNCaP和DU-145细胞ICAM-1和E-Cadherin表达。结论紫龙金具有抑制前列腺癌细胞增殖、降低集落生长和体外侵袭能力,其作用可能是通过增加ICAM-1和E-Cadherin表达而实现的。

大气中细颗粒物对肺癌细胞A549迁移和侵袭作用的影响

采集大连城区大气中可吸入性细颗粒物(PM_(2.5)),研究其对肺癌A549细胞迁移、黏附和侵袭力的影响,利用明胶酶谱法检测细胞分泌的基质金属蛋白酶活性,利用Western blot法测定A549细胞中转移相关蛋白的表达。结果表明,在无明显细胞毒性浓度下,PM_(2.5)可增加A549细胞的迁移速率;细胞与细胞外基质的黏附率增加;细胞侵袭实验结果表明PM_(2.5)可增加A549细胞穿透基底膜的能力;用明胶酶谱法检测发现PM_(2.5)可使A549细胞分泌的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性增强。转移相关蛋白——细胞钙粘蛋白-N(N-cadherin)的表达量升高,而钙粘蛋白-E(E-cadherin)的表达量下降,实验结果表明,PM_(2.5)可增强A549细胞的侵袭性,大气中的可吸入性颗粒可能导致肺癌转移发生率增加。

LncRNA-ATB在胃癌细胞中的表达及体外功能实验研究

目的研究LncRNA-ATB在胃癌细胞的表达及体外功能,为进一步筛选胃癌的有效诊治靶点奠定基础。方法设计LncRNA-ATB干扰序列,构建敲低LncRNA-ATB的胃癌细胞系并验证,进行克隆、增殖、迁移侵袭实验。结果LncRNA-ATB在胃癌细胞BGC-823、MGC-803中高表达,成功转染LncRNA-ATB干扰序列,并验证敲低效率,体外转染LncRNA-ATB干扰序列后,胃癌细胞克隆、增殖、迁移侵袭能力明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论敲低LncRNA-ATB后胃癌细胞的克隆、增殖、迁移侵袭能力明显降低,表明其在胃癌进展中发挥重要的调控作用。

5-氟尿嘧啶对胃癌细胞体外迁移和侵袭作用的研究

探究5-氟尿嘧啶对胃癌细胞体外迁移和侵袭的影响。实验对象为胃癌SGC7901细胞株,分别用含0μg/mL、250μg/mL、500μg/mL的5-氟尿嘧啶的DMEM培养基对其进行加样处理,通过细胞划痕实验,测细胞迁移率,通过transwell小室实验测细胞侵袭数。在划痕实验中,用3种培养基处理胃癌细胞48 h后,其平均迁移率分别为38.3%、29.7%%和3.9%,与空白对照组相比,250μg/mL抑制效果不显著(P>0.05),500μg/mL抑制效果极显著(P<0.01);在transwell侵袭实验中,用含3种培养基处理胃癌细胞24 h后,穿过膜的细胞数平均为136个、71个和18个,与空白对照组相比,250μg/mL浓度组有较显著抑制作用(P<0.05),500μg/mL浓度组有极显著抑制效果(P<0.01)。实验结论:5-氟尿嘧啶对胃癌细胞体外迁移和侵袭均有较为明显的抑制作用,且有剂量-效应关系。

半夏泻心汤含药血清对胃癌腹膜转移细胞系GC9811-P增殖及侵袭转移的影响

目的观察半夏泻心汤含药血清对体外人胃癌腹膜高转移潜能细胞株GC9811-P增殖及侵袭转移的影响。方法制备半夏泻心汤含药血清,在E-Plate 96及CIM Plate16检测板孔中接种GC9811-P细胞,并加入0、25、50、100μL/m L的半夏泻心汤含药血清,同时对GC9811-P细胞进行Diff-Quik染色,采用实时无标记细胞分析技术(real time cellular analysis,RTCA)结合Diff-Quik染色法,观察半夏泻心汤对GC9811-P增殖细胞指数(cell index,CI)及侵袭转移的抑制作用。结果半夏泻心汤含药血清可明显抑制GC9811-P细胞增殖,70 h后CI接近于0,Diff-Quik染色细胞大多死亡。细胞迁移曲线表明,25、50、100μL/m L的半夏泻心汤含药血清能明显抑制GC9811-P细胞迁移能力,细胞迁移数目均较0μL/m L半夏泻心汤含药血清明显减少,且呈浓度依赖关系(P<0.05)。结论半夏泻心汤含药血清可抑制体外人胃癌腹膜高转移潜能细胞株GC9811-P的增殖及侵袭转移,可能与其具有阻断胃癌腹膜转移的作用有关。

蛋白磷酸酶Ⅰ(PPP1R3)在直肠癌细胞体外侵袭转移的生物学活性研究

目的探讨研究蛋白磷酸酶I(protein phosphatase1 regulatory subunit 3,PPP1R3)在直肠癌SW480细胞中的黏附、运动、迁移和侵袭能力的生物学活性。方法用PPP1R3、EGFR抗体、VEGFR抗体干预SW480细胞后,分别对其行细胞运动实验、黏附实验、迁移及侵袭实验,分析PPP1R3对SW480细胞运动、黏附、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。结果随着PPP1R3浓度的增加,直肠癌SW480细胞的黏附、运动、迁移和侵袭能力明显减退(P<0.05)。而且穿过人工基底膜的能力明显减低(P<0.05)。结论 PPP1R3能够抑制直肠癌SW480体外的侵袭、转移作用,可为PPP1R3基因表达缺失的直肠癌术后患者提供放化疗、生物靶向治疗依据。