抗人FXYD3单克隆抗体的制备与初步鉴定

制备抗人FXYD3单克隆抗体(McAb)并鉴定其生物学特性,以固相合成法获得的FXYD3合成多肽与载体蛋白KLH偶联后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人FXYD3 McAb。用ELISA、Western Blot、免疫组化技术对抗人FXYD3McAb的亚型、效价、亲和力及特异性进行鉴定。筛选出两段较好的优势抗原表位,分别为NDLEDKNSPFY和KFGQKSGHH-PGETPPLITPGSA。获得四株可稳定分泌抗人FXYD3 McAb的杂交瘤细胞株02A12C4、02F1E8、02E6B10与03A10E11,亚型鉴定重链均为IgG1,轻链为kappa链。间接ELISA法测定效价均在为1∶104以上。其中02F1E8效价为1∶105以上,亲和常数为3.11×108L/mol。免疫组化分析显示了FXYD3均匀分布于肝癌细胞与人胰腺癌Bxpc-3细胞系细胞的胞膜上。结果成功制备了四株抗人FXYD3 McAb,其中02F1E8纯度好、效价高及特异性强。为进一步研究FXYD3在肿瘤组织及细胞系中的表达及临床意义奠定了基础。