两株鱼源降脂乳酸菌的分离、体外筛选及分子鉴定

脂肪肝病是我国人工养殖鱼类中常见的营养性疾病,对水产养殖业造成很大的负面影响。为了筛选具有降脂作用的潜在乳酸菌,利用MRS琼脂培养基,从健康褐篮子鱼(Siganus fuscescens)和卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)肠道中分离得到52株乳酸菌。测定这些菌株的溶血性后得到35株不溶血乳酸菌菌株。经降脂活性复筛(测定菌株体外降胆固醇能力、体外降三酰甘油能力)后从中筛选得到2株具有降脂能力的潜在益生菌,随后测定了这2株菌株对人工模拟胃液、人工模拟肠液的耐受性、菌株的黏附能力(菌株表面疏水活性和自凝集能力)、胞外酶活性及颉颃病原菌活性,最终获得2株具有较强体外降脂能力的潜在益生菌(LZ8和F2),其中,菌株LZ8分离于褐篮子鱼肠道、F2分离于卵形鲳鲹肠道。经16S rRNA鉴定分别为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。

三株异淀粉酶酶源菌株的筛选分离及部分酶学性质研究

从云南温泉中分离鉴定了3株产异淀粉酶的芽孢杆菌，经16SrDNA序列比对分析及主要生理生化研究，初步鉴定为：Bacillus amyloliquefacie LCEP-1、Bacillus subtilis DL-34—2、Bacillus subtilis DMJS-2—1。GeneBank登录号分别为：gb．GQ199589、gb．GQ199593、gb．GQ199594。3株菌所产的异淀粉酶都能降解玉米支链淀粉。酶解反应的最适pH分别为pH6．8、5．4和pH7．8；最适温度分别为60、55、60℃。优化条件下，最高酶活分别为：36．5、18．89、11．08μ／mL。3株菌的酶对不同金属离子有不同的反应，金属螯合剂EDTA对酶活又有较强的抑制作用，推测可能都属于金属酶。3株菌能在偏酸性至中性的pH范围内（pH4．4～8．0）保持稳定，可以在pH变化较大的条件下保持较高的酶活，在偏酸性、中性和弱碱性环境中都能有效地水解淀粉质底物。3株菌所产异淀粉酶，底物专一性强，最适pH可低至5．4。

抗肿瘤活性海洋放线菌的筛选及菌株HGF26的初步鉴定

对采自连云港海域的海泥样品进行放线菌选择性分离,用其发酵液进行抗肿瘤活性筛选,并对活性较好的菌株HGF26进行了初步鉴定。从海泥样品中共分离得到放线菌78株,以人肝癌细胞HepG2为靶标,活性筛选得到细胞毒活性达60%以上的阳性菌株3株,以其他5株肿瘤细胞为靶标的复筛表明,菌株HGF、26的发酵液对多种肿瘤细胞具有显著的细胞毒活性,其中对胃癌细胞BGC823的细胞毒活性为79%,活性产物具有较好的酸碱和热稳定性。通过对菌株的培养特征、形态特征、生理生化特征和细胞壁成分分析,将菌株HGF26初步鉴定为微白黄链霉菌的海洋变种。

重金属富集植物纤维素降解菌株的分离鉴定

从铀尾矿腐烂植物体中,分离出耐受一定浓度铀及伴生重金属(锰、铅、砷)的纤维素降解菌株。通过羧甲基纤维素(CMC-Na)水解圈测定法、纤维素酶活(CMCA)和滤纸酶活(FPA)等方法筛选出两株有较强纤维素降解能力的菌株C3和C5。经形态学、菌株培养特征、16S r DNA序列和gyr B基因序列系统发育树对分离的菌株进行鉴定和分析,鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。液体发酵试验结果表明,菌株C3和C5的最大CMCA分别为224.00 U/m L和178.32 U/m L,最大FPA分别为164.46 U/m L和174.96 U/m L。C3和C5对小麦秸秆均有较好的降解效果,在10 d时秸秆失重率分别为53.78%和48.67%。

高产碱性纤维素酶细菌的筛选鉴定及其酶学特性与发酵条件研究

【目的】从自然环境中分离筛选高产纤维素酶的菌株,开展碱性纤维素酶的酶学特性分析,为该菌株及所产纤维素酶的综合开发利用打下基础。【方法】采用羧甲基纤维素钠(CMCNa)平板筛选法筛选纤维素酶高产菌株,利用生理生化分析结合分子生物学法对菌株进行鉴定,并通过3,5-二硝基水杨酸(DNS)法研究其活性特征与发酵条件。【结果】在长期覆盖枯树叶的土壤中分离获得1株高产碱性纤维素酶的菌株,经鉴定该菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),名称为B.cereus strain CQNUX 3-1。酶活性分析显示该菌株胞外分泌液具有内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶及β-葡萄糖苷酶的活性,其酶活力分别达107.7、33.1和155.6 U/mL。酶学特征分析表明3种酶组分均具有较好的耐碱和一定的耐高温能力。其中,内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的最佳反应温度分别为70、60和40℃;最佳反应pH分别为8.0、9.0和9.0;Fe^(3+)能增加3种酶的酶活力,而β-葡萄糖苷酶具有较好的EDTA、尿素和Cu^(2+)耐受性。发酵条件对菌株产酶的分析结果表明,该菌株发酵温度在37℃较适宜;发酵第4 d时的酶活力达最大值;该菌株能在碱性发酵环境下生长并产酶,在初始pH为7.0时发酵酶活力最高。【结论】筛选获得的纤维素酶高产菌株B.cereus strain CQNUX 3-1所生产的纤维素酶具有较高的反应温度适用性和较强的碱耐受性,菌株发酵产酶温度适中,且有较宽的发酵pH适用范围,可作为碱性纤维素酶生产资源菌株,具有应用于纤维素酶制剂制备与生产、纤维素资源综合利用等领域的潜力。

细菌纤维素合成菌的筛选、鉴定及其产物结构和性质表征

该研究从腐败葡萄中筛选、分离细菌纤维素(BC)合成菌株,对其进行分子生物学鉴定,并对其产物的结构与性质进行表征。结果表明,筛选分离得到一株细菌纤维素合成菌株,该菌株的16S rRNA基因测序结果表明其属于醋酸菌属(Acetobacter sp.),编号为ZX C6-15。扫描电镜(SEM)和傅立叶变换红外光谱(FT-IR)分析结果表明,菌株ZX C6-15产膜具有典型的3D纳米纤维状结构且具有典型细菌纤维素吸收峰。凝胶渗透色谱(GPC)、X-射线衍射(XRD)分析结果表明,菌株产膜重均分子质量(Mw)为14.1×10^(4)k Da,数均分子质量(Mn)为32.3×10^(4)k Da,分散度为2.28,结晶度指数为96%,吸水率达298%。该菌株合成细菌纤维素具有优良的材料性质,为后续培养条件优化及规模生产奠定基础。

对甘薯茎线虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌筛选及特性鉴定

为筛选对甘薯茎线虫具有高毒力的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株,提取12株供试Bt菌株的晶体蛋白,溶解后加入到甘薯茎线虫悬浮液中,统计3 d和7 d后甘薯茎线虫的死亡率.经初筛和复筛后得到一株对甘薯茎线虫具有高毒力的Bt菌株YBT-008,其对甘薯茎线虫的LC50值为203.76μg/mL.研究了YBT-008的生物学特性,结果表明,YBT-008在LB培养基上培养约12 h后进入稳定期,并且伴随芽胞的形成产生卵圆形的伴胞晶体;SDS-PAGE分析表明YBT-008可产生多种待鉴定的晶体蛋白类型,质粒检测显示该菌株有5条质粒条带.YBT-008的获得为利用Bt防治甘薯茎线虫提供了新型菌株和基因资源.