3-异丁基-1-甲基黄嘌呤对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的Ca^(2+)/cAMP不依赖性保护作用

目的 观察 3 异丁基 1 甲基黄嘌呤 ( 3 Isobutyl 1 methylxanthine ,IBMX)对 5mmol·L-1KCl诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用并探讨其与 [cAMP]i和Ca2 +的关系。方法 建立KCl 5mmol·L-1诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡模型 ,用荧光二酯素法分析神经元存活 ,Hoechest332 5 8核染色和DNA琼脂糖凝胶电泳分析凋亡 ,放射免疫法测定cAMP浓度。结果 IBMX呈浓度依赖性拮抗 5mmol·L-1KCl诱导的神经元死亡 ,并明显减少核形态异常的神经元 ,使DNA电泳梯带变浅或完全消失 ;IBMX( 1.0mmol·L-1)可持续升高神经元 [cAMP]i,福司可林 2 .0 μmol·L-1升高 [cAMP]i作用与IBMX类似 ,但不能模拟IBMX的作用 ;此外 ,IBMX的拮抗作用不被cAMP竞争性抑制剂Rp cAMP和PKA的特异阻断药H 89阻断 ;单用或联用钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ的特异抑制剂KN 93和磷酯酰肌醇 3位羟基激酶的特异性抑制剂LY2 940 0 2也不能阻断。结论IBMX抗低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡作用不依赖cAMP和Ca2 +。

外周神经和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤对成年金黄地鼠视网膜节细胞再生的影响

【目的】探讨玻璃体内插入外周神经和玻璃体内注射 3 异丁基 1 甲基黄嘌呤 (IBMX)对轴突损伤的视网膜节细胞再生的影响。【方法】 2 0只成年金黄地鼠随机分 4组 ,每组 5只动物。切断视神经 (ON)并缝接坐骨神经 (attachedgraft ,AG)为再生对照组 ;ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射IBMX和 /或插入一小段自体坐骨神经 (SN)为实验组。采用逆行示踪标记术 ,观察视网膜平铺片节细胞数。【结果】①对照组 (AG)每个视网膜再生的节细胞数为 (142 8± 2 84)个 /reti na;②外周神经组 (AG +SN)为 (2 2 2 0± 415 )个 /retina ;③IBMX组 (AG +IBMX)为 (2 42 4± 10 2 6 )个 /retina;④外周神经和IB MX联合组 (AG +IBMX +SN)为 (30 6 5± 6 5 4)个 /retina;其中 ,AG +SN组同AG组相比存在显著性差异 (P <0 0 1) ;AG +IBMX +SN组同AG、AG +IBMX和AG +SN组相比均有显著性差异 (P <0 0 1)。

AY9944-A-7对于IBMX抑制的绵羊卵母细胞体外成熟的诱导作用

为了探究AY 9944-A-7在3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX）阻滞的绵羊卵母细胞减数分裂恢复过程中的作用,将绵羊卵丘-卵母细胞复合体（COCs）、分离的卵丘-卵母细胞（split COCs）和脱卵丘后制成的裸卵（DOs）培养于含250μmol/L IBMX的体外成熟液中,分别添加10,20,30,40μmol/L的AY 9944-A-7以诱导卵母细胞恢复减数分裂。结果表明,10-40μmol/L的AY 9944-A-7极显著地提高了绵羊COCs的生发泡破裂（GVBD）率和第一极体（PBI）排出率（P〈0.01）;添加AY 9944-A-7对IBMX阻滞的绵羊DOs生发泡破裂和PBI排出没有显著的刺激作用（P〉0.05）;40μmol/L AY 9944-A-7使绵羊COCs、split COCs、DOs的退化率极显著提高（P〈0.01）。说明AY 9944-A-7能够诱导IBMX抑制的绵羊COCs恢复减数分裂成熟,但是过量的AY 9944-A-7对绵羊卵母细胞有毒性,AY 9944-A-7诱导绵羊COCs克服IBMX抑制恢复减数分裂成熟的适宜剂量为20μmol/L。

小分子化合物毛喉素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤诱导骨髓间充质干细胞分化为许旺细胞样表型的可能性

背景:周围神经损伤是一种主要由创伤等因素引起的临床常见疾病,研究表明,由骨髓间充质干细胞转分化的许旺细胞可以促进周围神经损伤的修复与重建,但其诱导方法尚未达成共识,并且细胞神经转分化的机制仍尚不明确。目的:探讨小分子化合物(毛喉素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)诱导骨髓间充质干细胞分化为许旺细胞的可行性,以及该诱导过程与cAMP/PKA通路的相关性。方法:采用全骨髓贴壁法从1周龄SD乳鼠四肢骨骨髓中提取出原代骨髓间充质干细胞,运用细胞免疫荧光对其进行鉴定,并用CCK-8法检测各代骨髓间充质干细胞在不同培养时间点的增殖活性变化,以小分子化合物对骨髓间充质干细胞进行体外诱导分化,实验分为3组:对照组用神经生长培养基处理120 h、诱导组用神经生长培养基+毛喉素+3-异丁基-1-甲基黄嘌呤处理120 h、抑制组用神经生长培养基+毛喉素+3-异丁基-1-甲基黄嘌呤+cAMP抑制剂SQ22536处理120 h,每60 h更换1次培养基。通过细胞形态学、Western blot等技术对许旺细胞样细胞进行鉴定及相关分析,同时检测分化过程中cAMP相关蛋白的表达。结果与结论:①细胞免疫荧光染色显示分离培养的原代细胞能够被CD44和CD90标记,CCK-8结果显示在相同培养时间点,第1-3代骨髓间充质干细胞增殖活性逐渐增加,第3-6代骨髓间充质干细胞增殖活性逐渐降低;②Western blot结果显示小分子化合物诱导后许旺细胞特异性标志物S100β、GFAP和p75以及cAMP相关蛋白p-CREB表达均明显增加(P<0.001;P<0.001;P<0.05;P<0.0001),而cAMP/PKA抑制剂SQ22536可以抑制这一效应(P<0.01;P<0.01;P<0.05;P<0.001);③结果表明,该小分子化合物可以诱导骨髓间充质干细胞分化为许旺细胞表型,并且诱导过程中可能激活了cAMP/PKA通路。

睫状神经营养因子复合毛喉素及3-异丁基-1-甲基黄嘌呤通过环磷酸腺苷信号通路诱导肌源性干细胞分化为许旺细胞表型

背景:许旺细胞是周围神经组织工程最理想的种子细胞,但许旺细胞存在诸多缺陷,因此目前的研究主要集中在具有许旺细胞特性的其他细胞上,并且许旺细胞样细胞已成为周围神经损伤修复的理想细胞来源。目的:探讨睫状神经营养因子复合毛喉素和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(Fsk-IBMX)诱导肌源性干细胞分化为许旺细胞表型的方法及该诱导过程与环磷酸腺苷信号通路的相关性,以期为进一步将肌源性干细胞应用于周围神经损伤修复奠定基础。方法:采用混合消化酶从1周龄SD乳鼠中提取肌源性干细胞,以睫状神经营养因子诱导肌源性干细胞去分化,再用Fsk-IBMX对去分化肌源性干细胞进行诱导。通过细胞形态学、细胞免疫荧光、CCK-8、Western blot、RT-qPCR等技术对肌源性干细胞、去分化细胞和许旺细胞样细胞进行鉴定及相关分析,同时检测去分化过程和许旺细胞样细胞分化过程中环磷酸腺苷信号通路相关蛋白的表达。结果与结论:(1)细胞免疫荧光染色显示取自SD乳鼠的原代细胞能够被肌源性干细胞特异性标志物Desmin标记;(2)CCK-8结果显示第1-3代肌源性干细胞增殖活性逐渐增加,第3-8代肌源性干细胞增殖活性趋于稳定;(3)Western blot结果显示睫状神经营养因子诱导后成肌分化相关蛋白p21和MyoG表达降低,环磷酸腺苷信号通路相关蛋白p-CREB表达增加,Fsk-IBMX诱导后许旺细胞标志物S100β、GFAP和p75以及p-CREB表达均增加,而环磷酸腺苷抑制剂SQ22536可以抑制睫状神经营养因子和Fsk-IBMX的作用;(4)RT-qPCR结果与Western blot结果一致,即Fsk-IBMX诱导后S100β、GFAP和p75 mRNA表达水平增加,而SQ22536可以抑制这一效应;CCK-8结果显示Fsk-IBMX诱导后细胞活性有所降低;(5)结果显示:睫状神经营养因子复合Fsk-IBMX可以诱导肌源性干细胞分化为许旺细胞表型,并且诱导过程激活了环磷酸腺苷信号通路。

黄嘌呤抗视神经切断后视网膜细胞凋亡的作用

目的 探讨眼球玻璃体注射 3 异丁基 1 甲基 (IBMX)对切断视神经后视网膜细胞凋亡的作用。方法 用荧光核染料 332 5 8和琼脂糖凝胶电脉技术观察切断视神经 5、7和 1 4d后成年金黄地鼠视网膜细胞凋亡的变化。结果 ( 1 )视神经切断 5、7、1 4d后 ,节细胞层 (GCL)细胞凋亡密度 (cell/mm2 )分别为 94 60± 2 9 40、81 2 0± 1 5 1 9和 31 2 0± 1 1 43,给予IBMX组在上述时间点凋亡密度为 67 80± 1 3 83、60 2 0± 9 68和 2 7 0 0± 9 5 7。IBMX 7d组与对照组比较有显著差异 (P <0 0 5 )。 ( 2 )琼脂糖凝胶电脉显示切断 7d的视网膜细胞DNA抽提物显示典型的DNA梯形条带。其它各间间点 ( 5d和 1 4d)以及玻璃体内注射IBMX均未见典型DNA梯形条带。