用液相等电聚焦电泳纯化藻蓝蛋白亚基

以纯藻蓝蛋白(C-phycocyan in,C-PC)为材料,采用Rotofor系统进行液相等电聚焦(L iqu id-phase iso-eletric focusing,LP-IEF)电泳纯化C-PC的α,β亚基,探讨蛋白质亚基纯化的制备电泳(Preparative eletro-phoresis)技术.结果显示,样品经2次等电聚焦电泳后,C-PC的α,β亚基分别浓集在pH=4.9和pH=4.1附近,平板超薄等电聚焦(Slab u ltra th in IEF)和SDS-PAGE电泳鉴定表明分别为高纯度的C-PCα,β亚基.提示LP-IEF是分离纯化等电点差异蛋白质活性亚基的简便有效的方法.

酯酶同工酶IEF电泳及香菇品种鉴别

本研究旨在建立一种鉴别香菇品种的高效、高分辨率方法，即聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦同工酶电泳法，并利用此方法对28个香菇品种进行检测。实验结果表明，不同香菇品种均有基础酶带的存在，但不同品种间在酶带条数，pI值及酶活性上有差异。

水稻种子贮藏谷蛋白的改良电泳分析法(英文)

利用１５％～２５％丙烯酸胺梯度凝胶的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析法可将水稻种子贮藏谷蛋白分离为３个酸性（α）亚基和３个碱性（β）亚基。通过调整两性电解质比例对现有等电点聚焦电泳分析法进行改良，可将谷蛋白酸性亚基和碱性亚基分别分划为１３和１４条多肽带。将上述两种方法结合起来的双向电泳分析法可以高清晰度地离析谷蛋白并获得单一多肽。此改良的电泳分析系统有助于确定水稻谷蛋白变异及谷蛋白的生化研究。

小麦叶片蛋白质双向电泳的改良方法

以普通小麦叶片为实验材料 ,在原有双向电泳基础上通过对样品制备、样品溶解、等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行改进和优化 ,在小麦叶片可溶性蛋白的分析中获得了满意的双向电泳图谱。

胸腺素α_1的生化特性及生物学活性的分析

目的 :建立确定胸腺素α1纯度、分子量和等电点等生化特性和生物学活性检测的方法。方法 :应用高效液相色谱、三羟甲基甘氨酸 -SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦 -聚丙烯酰胺凝胶电泳和3H -TdR掺入法 ,在致有丝分裂原存在的条件下 ,刺激小鼠脾淋巴细胞分裂增殖的能力。结果 :胸腺素α1的纯度为 98% ,其相对分子质量为 3 15 3 ,等电点为3 93,在 1 5 6～ 12 5 μg·mL-1剂量范围内脾淋巴细胞的增殖率明显提高。结论 :本文所用检测方法能准确地测定胸腺素α1的纯度、相对分子质量和等电点 ,有效地测定其生物学活性 。

硬粒小麦—簇毛麦双二倍体乙醇脱氢酶和酯酶同工酶谱的研究

对硬—簇双二倍体 TH_1,TH_1W(81086A/簇毛麦),TH_2W(D311/簇毛麦),TH_3,TH_3W(墨75/簇毛麦)及它们的双亲硬粒小麦 D311,重建 AABB 四倍体81086A,墨75和簇毛麦(H.villosa)成熟种子乙醇脱氢酶(ADH)和酯酶(Esterase)的测试结果表明,硬粒小麦 D311和重建 AABB 四倍体都表现三条 ADH 同功酶带,即 ADH-1(αα),ADH-2(2αβ)和ADH-3(ββ).簇毛麦只有一条酶带 ADH-5(vv).。硬—簇双二倍体都显现5条同功酶带ADH-1(αα),ADH-2(2αβ),ADH-3(ββ+2αv),ADH-4(2βv)和 ADH-5(vv)为此,ADH 酶可作为鉴别真假硬—簇双二倍体的生化标志,但不能用来区分硬粒小麦和重建 AABB四倍体。在等电点(pI)pH 7.2—6.2的活性区内的酯酶谱带色深且宽,至少有21条,酶带1,2,3,4(来源于普通小麦)可作为区别 D311和重建 AABB 四倍体的生化标志。硬一簇双二倍体的 EST 酶带来源于双亲,无杂种特异带。酶带14a(来源于簇毛麦)的有、无与双二倍体颖壳蜡粉无、有的特征相一致。根据 C.C.Ainsworth(1984)对六倍体小麦籽粒酯酶结构基因的研究,比较分析普通小麦,硬粒小麦和重组 AABB 四倍体的酶带,发现小麦由四倍体种向六倍体种进化的漫长历程中,第3部分同源染色体组发生过酯酶结构基因的交换。

上海地区胃癌病人运铁蛋白(Tf)、组特异性成分(Gc)、α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)亚型分布的研究

用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分析了上海地区202例汉族胃癌病人及202例正常对照组的运铁聋白(Tf)和α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)亚型的分布,发现胃癌组Tfc_1c_1纯合子频率(0.3713)和Tfc_1基因频率(0.5718)显著低于对照组(分别为0.5149和0.6782),均为p<0.01,胃癌组Tfc_2c_2纯合子频率(0.2228)和Tfc_2基因频率(0.4019)显著高于对照组(分别为0.1436,p<0.05和0.2970,p<0.01),胃癌组和对照组的α_1-抗胰蛋白酶亚型分布无显著差异。用薄层聚丙烯酰胺等电聚焦结合免疫固定分析了上海地区200例汉族胃癌病人和200例正常对照组的组特异性成分(Gc)亚型分布,发现胃癌组Go1F表型频率(0.22)和Gc1F基因频率(0.4375)均显著高于正常对照组(分别为0.14和0.3600,均为p<0.05)。

黄瓜器官特异蛋白的研究

利用 SDS单向电泳对黄瓜 ( Cucumissativus L .)的根、茎、叶、花萼、花冠、雄蕊、花柱和子房的可溶性蛋白进行了分析和比较。检测到花冠中的 2 3.5 k D和 33.0 k D,雄蕊中的 1 8.8k D、2 8.5 k D、31 .0 k D、37.0 k D和 39.0 k D,花柱中的 4 5 .0 k D及子房中的 32 .5 k D蛋白 ,分别为各自器官中的器官特异蛋白质。对花冠、雄蕊、花柱和子房的可溶性蛋白的 IEF- SDS双向电泳分析也确定了相应于 SDS单向电泳上特异蛋白带的蛋白质斑点。而且相应于 SDS单向电泳上的一条带 ,在 IEF- SDS双向电泳上可能是一个以上的分子量相同而等电点不同的几个蛋白质斑点。各种器官的蛋白质含量以雄蕊为最高、花萼为最低。

由强反应电解质形成的移动化学反应界面:理论(英文)

在“沉淀反应前缘”（precipitatereactionfront）概念和“静止中和反应界面”概念的基础上，提出了由强反应电解质形成的移动化学反应界面的概念，推导出一系列相关的移动和静止化学反应界面方程.理论结果显示：（1）“沉淀反应前缘”的概念在本质上相当于，但不等同于移动化学反应界面的概念；（2）移动化学反应界面的概念在本质上不同于移动界面系统的概念，既使前者的方程在形式上非常相似于和对称于后者的方程（此方程在40－50年代形成，在等速电泳或置换电泳中具有重要的应用）。

两种粉螨的酯酶同工酶和相关蛋白质电泳的研究

目的 探讨粉螨的酯酶同工酶和相关蛋白质在分类及生化遗传学上应用价值。方法 应用等电聚焦电泳 (IEFE)研究腐食酪螨 (Tyrophagusputrescentiae)和粉尘螨 (Dermatophagoidesfarinae)的酯酶同工酶和蛋白质 ,并将两者进行了比较。结果 腐食酪螨的酯酶同工酶可见 8条带 ,分布在 pH3 6 2～ 5 2 0范围内 ,第 2 ,6条明显深染 ,为主带 ;粉尘螨的酯酶有 7条带 ,分布在 pH4 6 8～ 5 42范围内 ,可见 3条主带 ;腐食酪螨和粉尘螨蛋白质均出现 2 2条带 ,但腐食酪螨有 2条特别明显的深染主带 ,粉尘螨可见 3条明显深染主带。结论 两种粉螨的酯酶同工酶及相关蛋白质的电泳谱可在一定程度上反映出科、属、种的差别 ,酯酶同工酶具多态性 。

水稻白叶枯病菌解毒素蛋白提纯和作用机制研究

采用 (NH4) 2 SO4分步沉淀法 ,从水稻白叶枯病菌培养滤液中提取对水稻白叶枯病菌有机酸毒素具解毒作用的解毒蛋白粗提物 (crudedetoxificationprotein ,CDP) ,经滚动式等电聚焦电泳 (RPIE)和离子交换层析 (FPLC)分离 ,生物测定结果表明 ,第Ⅱ吸收峰具有生物活性 ;再经SDS PAGE电泳和考马斯亮蓝染色 ,第Ⅱ吸收峰收集物有明显的一条带 ,相对分子质量为 4 7 9× 10 3 。野生菌产生的CDP解毒活性明显低于其毒性基因突变体。CDP对热和蛋白酶K均不稳定 ,对毒素的解毒主要是通过脱羧起作用。用CDP处理水稻后 ,水稻体内与抗病性相关的酶活性显著提高 ;接种水稻白叶枯病菌 。

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９。

IPGphor^(TM)等电聚焦加样方法的改进与电泳结果的预测

固相pH梯度干胶条等电聚焦电泳技术因其分辨率高而成为当今双向电泳分离蛋白质的首选技术,但其实验步骤多难度大,要求试剂配制精确,各项操作无误。通过改变蛋白质加样方法,测定固相pH梯度干胶条IEF电泳过程中的前期水化干胶条时初始电流与终电压的内在规律,发现在不同的样品和不同的设定电压条件下初始电流的变化与IEF电泳终电压结果存在着高度的相关性,水化干胶条时的初始电流与终电压亦存在着高度的相关性。将IEF电泳的水化初始电流值(1μA)作为蛋白质等电聚焦判断标准,指导实验。其方法实用简便,可提高工作效率。

IEF/SDS PAGE双向电泳技术的建立

IEF/SDS PAGE双向电泳的高分离度是各种类型的单向PAGE无法比拟的.以Bio—Rad公司的PROTEAN Ⅱ xi 2-D电泳系统为基础,初步研究了IEF/SDS PAGE双向电泳技术建立的条件.

嗜人按蚊和中华按蚊蛹的蛋白质等生化指标的初步研究

糖、脂、蛋白质和酯酶同工酶ＩＥＦ区带在嗜人按蚊分别为１７、８、２９和１８条；中华按蚊１６、８、３０和２０条。两者绝大部分区带分布在ｐＨ５－８范围，尤以ｐＨ５－６区域主带为多。嗜人按蚊和中华按蚊分别显示多肽斑点２６６和２６８个，其大多数为小分子量的酸性蛋白，两者差异斑点分别为７４和７６个，平均差异２７．５％。

用复性电泳技术研究溶酶体蛋白水解酶的性质和活性

介绍了复性单向电泳（Ｇ－ＰＡＧＥ）和复性双向电泳（ＩＥＦ－Ｇ－ＰＡＧＥ）的概念、原理、方法、应用范围、优缺点和使用该方法应注意的事项。并用该方法定性和定量分析了Ｃ６大白鼠神经胶质瘤细胞酸性溶酶体蛋白水解酶的性质和活性。

伊氏锥虫和媾疫锥虫蛋白组分的电泳分析

应用SDS—PAGE和IEF电泳对伊氏锥虫和媾疫锥虫的蛋白组分进行了分析.在SDS—PAGE中,伊氏锥虫有21条带.媾疫锥虫有19条带,两种虫体的蛋白质区带在分子量40000～90000之间存在差异,尤其表现在表面糖蛋白上,伊氏锥虫为43000,媾疫锥虫为60000.在IEF电泳中,伊氏锥虫出现26条带,媾疫锥虫出现33条带,两种虫体的蛋白质区带在等电点4.8～5.6之间相同,而在5.6～7.0之间存在差异.本实验还对马媾疫锥虫的蛋白质进行了双相电泳分析,显示出86个多肽斑点.