上皮性卵巢癌YAP核表达及肿瘤大小与预后的关联性研究

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)中YES相关蛋白(YAP)核表达与肿瘤大小及预后关系及YAP作用。方法 120例EOC患者组织标本为实验组,其中早期(Ⅰ+Ⅱ)和晚期(Ⅲ+Ⅳ)EOC分别为38和82例,30例选自子宫肌瘤患者的正常卵巢组织为对照组。免疫组织化学染色法检测YAP蛋白定位及表达,回顾性分析120例EOC患者临床资料,YAP核表达与EOC病理参数及患者预后相关性;不同初始细胞量培养EOC细胞系C13K及OV2008,使用免疫荧光及克隆形成实验分别检测Ki67表达及增殖情况;EOC细胞分别培养至汇合度为60%(低密度组)和90%(高密度组),q-PCR及Western blot分别检测YAP mRNA及蛋白在EOC细胞中表达。结果 YAP蛋白在EOC组织中胞核阳性表达率高于正常卵巢组织(P<0.05);Ⅰ+Ⅱ期EOC肿瘤平均直径大于Ⅲ+Ⅳ期EOC (P<0.01);YAP核高表达与病理学分级、临床分期、糖类抗原125(Ca125>1 000 IU/ml)呈正相关,而与肿瘤大小呈负相关(P均<0.05);生存分析提示肿瘤直径较小(<10 cm)及YAP核高表达与EOC术后3年生存率呈负相关(P<0.01)。低密度组培养C13K及OV2008细胞克隆形成数目多,Ki67及YAP表达高(P<0.01);敲低YAP表达可降低两种培养密度细胞的增殖能力(P<0.05)。结论 YAP核高表达及肿瘤直径小与EOC患者预后负相关,降低YAP核表达可使EOC细胞增殖能力减弱。

胃癌循环肿瘤细胞膜滤过分离技术检测及其与临床病理特征关系研究

目的:研究胃癌循环肿瘤细胞(CTC)检出情况与胃癌临床病理特征之间的关系。方法:选取胃癌患者84例作为试验组,选取同期30例健康体检者为对照组,采集外周血后用膜滤过分离肿瘤细胞技术(ISET)检测鉴定CTC[包括循环肿瘤微栓(CTM)],并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果:对照组外周血标本均未检测到CTC或CTM,试验组外周血标本CTC/CTM总阳性率为60.71%。不同病理分期胃癌患者CTC/CTM阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同病理类型胃癌患者外周血CTC/CTM阳性率比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。胃癌患者外周血CTC和CTM检出情况在胃癌瘤块大小、有无淋巴结转移、有无血管侵犯和有无远处转移灶方面比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:循环肿瘤细胞检出率与胃癌临床病理特征密切相关,对胃癌的早期诊断和预后判断有潜在的应用价值。

异育银鲫呼肠孤病毒的分离与鉴定

【目的】发现异育银鲫Carassius auratus gibelio新病原,为其病害防控提供理论基础。【方法】从吉林省某养殖场采集异育银鲫出血病疑似病样,对其进行细菌分离及寄生虫观察、鲤疱疹病毒Ⅱ型的PCR检测和人工感染试验,然后用感染滤液接种鲤上皮瘤细胞(EPC),并对其进行电镜观察。对病毒基因组进行SDS-PAGE电泳分析、RT-PCR鉴定及序列测定。【结果】发病异育银鲫无细菌及寄生虫感染,鲤疱疹病毒Ⅱ型的PCR检测无特异性条带,将过滤后的患病鱼组织滤液感染健康异育银鲫,7 d内死亡率高达86.7%。盲传4代后出现明显的细胞病变。负染后电镜下可观察到病毒粒子,直径约70 nm,病毒颗粒近球形,无囊膜结构,初步判断为呼肠孤病毒(暂命名JL-4)。SDS-PAGE结果揭示,JL-4基因组由11条dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征。将RT-PCR扩增产物的序列进行聚类分析,结果显示,JL-4与呼肠孤病毒HZ08株S6序列相似性高达99%,证明该分离株为呼肠孤病毒。【结论】从患病异育银鲫中分离到1株呼肠孤病毒。

外周血循环肿瘤细胞形态学分析技术在临床检验中的应用

目的探讨外周血循环肿瘤细胞(CTC)形态学分析技术在肿瘤临床检验中的应用。方法收集212例肿瘤患者外周血样本,使用CTCBIOPSY异常细胞分离染色仪检测后,于显微镜下进行CTC形态学分析。采用CD45和CD31单克隆抗体进行免疫组化检测,进一步验证形态学判读标准的临床适用性。分析CTC检出率、CTC计数与肿瘤类型、临床分期等临床因素之间的关系。结果形态学分析技术CTC检出率为41.51%,经免疫组化检测验证,特异性为100%。CTC阳性组与阴性组年龄和TNM分期差异均有统计学意义(P=0.036、P<0.001)。不同类型肿瘤和相同类型不同分期肿瘤患者的CTC检出率和CTC计数均有所不同,其中肺癌晚期和前列腺癌晚期患者CTC检出率最高,且早、晚期肿瘤患者的CTC计数差异有统计学意义(P<0.001)。结论CTC形态学分析技术可以保证细胞的完整性,能够快速判读多种类型肿瘤的CTC,特异性好,但敏感性优势不显著。

CTC-Biopsy系统检测肿瘤患者外周血CTC临床应用可行性研究

目的循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)在判断临床分期、评估预后、监测疗效、辅助诊断和指导个体化治疗等方面表现出巨大潜力。本研究在完善和优化CTC-Biopsy检测系统的基础上,通过临床试验验证其检测肿瘤患者外周血中CTC的效果,探讨其临床推广应用的价值。方法使用CTC-Biopsy检测系统,按照中国国家食品药品监督局(China Food and Drug Administration,CFDA)的药物临床试验管理规范(Good Clinical Practice,GCP),对山东大学附属山东省肿瘤医院2014-09-01-2014-12-31收治的150例肿瘤患者及2014-12-12-2014-12-15 22名健康志愿者进行了临床试验。结果 CTC-Biopsy检测系统检测的染色标本背景干净,细胞形态清晰,细胞核质分界清楚;除异常细胞外,样片中仅残留少量的单核细胞。CTC-Biopsy检测系统检测不分病种恶性肿瘤灵敏度为51.33%(77/150),特异性为100.00%(77/77),约登指数为0.513。由CTC-Biopsy检测系统的CTC检出率的95%CI下限为43.33%,大于国际ISET法报道的43.06%。胃癌Ⅳ期患者检出率高于Ⅰ～Ⅲ期患者,差异有统计学意义,P=0.002。结论通过GCP临床试验证实,CTC-Biopsy系统检测肿瘤患者外周血中CTC的灵敏度、特异性等指标均达到国际同类检测系统水平。该系统检测操作简便易行,且高效、稳定和经济,具有良好的临床推广价值。

用膜滤过联合激光扫描细胞仪检测恶性肿瘤患者循环肿瘤细胞

目的建立用膜滤过分离肿瘤细胞技术(ISET)联合激光扫描细胞仪(LSC)检测循环肿瘤细胞(CTC)的方法。方法将不同数量的乳腺癌细胞系(MCF-7)细胞分别混入健康血标本中,用ISET联合LSC自动扫描分析,以建立稳定的检测方法,同时验证该方法肿瘤细胞回收率、敏感性及特异性。结果建立了用ISET(用8μm孔径的聚碳酸酯滤膜)联合LSC,并用CK8抗体、CD45抗体分别作为肿瘤上皮细胞的阳性和阴性选择标记来检测CTC的方法;该方法肿瘤细胞回收率为(10.34±1.15)%,在混入60～600000个肿瘤细胞范围内回收率保持稳定(P>0.05);达到可检测到1ml血中一个肿瘤细胞的敏感性,相同条件下空白对照组均未检出肿瘤细胞。结论用ISET联合LSC检测恶性肿瘤患者CTC方法简便、敏感性高、特异性强,有望进一步应用于临床。

膜滤过分离肿瘤细胞技术在泌尿系肿瘤患者临床治疗中的应用

目的探讨膜滤过分离肿瘤细胞技术(ISET)检测泌尿系肿瘤患者外周血循环肿瘤细胞(CTC)的临床效果,分析对泌尿系肿瘤患者应用ISET检测的意义。方法选择2018年4月至2019年4月在本院治疗的98例肾癌患者为实验组,将同期选取的24例健康志愿者作为对照组进行研究。实验组进行术前采血,对照组行空腹采血,采用CTC-Biopsy检测仪以ⅠSET检测血液样本。根据临床病理特征分析ⅠSET在肾癌患者的CTC检测中的效果。结果对照组经ⅠSET检测后,未发现CTC阳性。实验组在98例患者共检出51例,检出率为52.04%。根据临床病理分期,Ⅰ~Ⅱ期患者共63例,检出CTC阳性24例,占38.10%,Ⅱ~ⅠV期患者共35例,检出27例CTC阳性,占77.14%,差异有统计学意义(P<0.05);根据肿瘤分级,4级患者的CTC阳性检出率显著高于1.2.3级患者(P<0.05);外周血红蛋白(HCB)和中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)增多患者的CTC阳性检出率也显著高于没有增多的患者(P<0.05);肉瘤样改变的患者CTC阳性检出率显著高于未改变的患者(P<0.05);其他脏器转移与患者CTC阳性检出率无关(P>0.05)。ISET检测灵敏度77.14%,特异度为61.90%,约登指数为0.390。采用logistie回归分析得出在ISET检测下,外周血CTC与患者病理分期、肿瘤分级、NLR的增多以及肉瘤样改变有相关性(P<0.05)。结论ISTE在肾癌患者的外周血CTC的检测中具有有效性。ISTE对肾癌患者的外周血CTC检测结果与病理分期、肿瘤分级、NLR等多个临床病理因素具有相关关系,推测ⅠSET对肾癌患者的预后效果具有一定的预测作用。